Проба на мастит с димастином

Скрытый мастит у коров сопровождается вяло протекающим воспалительным процессом, при котором клинические признаки мастита выражены очень слабо, а то вообще не проявляются.

На крупных молочных комплексах подобная форма патологии широко распространена и практически ветспециалистами сельскохозяйственных предприятий обычно диагностируется во время проведения ежемесячных исследованиях дойного стада на скрытую форму мастита. При машинном доении скрытым маститом поражается до 15% лактирующих коров.

Этиология. Причины возникновения скрытых маститов разнообразны. В сельхозпредприятиях скрытые маститы наиболее часто возникают при несоблюдении операторами машинного доения ветеринарно-санитарных правил доения коров, при неправильном запуске, несоблюдении курса лечения маститных животных.

При скрытом мастите происходит расстройство функции молочной железы, клинически проявляющееся гипогалактией и изменением биохимических свойств молока. Объективным показателем здорового вымени у коровы является количество содержащихся соматических клеток в молоке. Соматические клетки молока являются нормальным компонентом в качественном молоке. Соматические клетки в молоке коровы представлены лейкоцитами и эпителием альвеол и молоко выводящих путей молочной железы. Если в секрете молока от здоровой коровы преобладают эпителиальные клетки, которые образуются в тканях вымени в процессе естественного старения и обновления тканей, то при мастите происходит усиление миграции лейкоцитов в очаг воспаления, что в конечном итоге приводит к резкому возрастанию соматических клеток в молоке. Если в 1мл молока от клинически здоровых коров содержится в среднем 250тысяч соматических клеток, то при заболевании маститом их количество возрастает до 950тысяч. Молоко от коров больных субклиническим маститом имеет пониженную кислотность (до 8-12 градусов по Тернеру, реакция молока становится слабощелочной, происходит увеличение содержания хлоридов, альбуминов и глобулинов, в несколько раз увеличивается количество клеточных элементов, особенно лейкоцитов. Одновременно происходит уменьшение содержания сухих веществ (казеина, лактозы, кальция и фосфора).

При попадании молока от коров больных скрытой формой мастита в общий удой делает его непригодным для приготовления сыров, молочнокислой продукции и крайне отрицательно сказывается на здоровье человека.

Скрытые маститы могут быть причиной в дальнейшем клинически выраженных маститов, но в основной своей массе остаются незамеченными доярками, и ветспециалистам до очередной проверки дойного стада на скрытую форму мастита, постепенно приводя корову к гипогалактие, агалактие в связи с гибелью части клеток секреторного эпителия молочной железы и регенерации за счет соединительной ткани и даже атрофии пораженной доли вымени. При проведении глубокой пальпации в пораженной четверти в отдельных случаях ветспециалист может обнаружить отдельные очаговые уплотнения тканей вымени, сужение емкости цистерны и соскового канала, утолщение стенок соска.

Диагностика. Экспресс — диагностика субклинического мастита в лактационный период основана на определении количества соматических клеток в молоке, а также посредством оценки реакции диагностических реактивов (2% раствор мастидина, 5% раствор димастина, мастоприма, 2% раствор мастотеста, с калифорниским тестом, кено тестом) с пробой молока. Проведение реакции с диагностическим реактивом осуществляется с использованием молочно-контрольной пластинки (МКП-1 или МКП-2). Для этой цели из каждой доли молочной железы выдаиваем в соответствующие лунки МКП по 1мл молока, затем добавляем по 1мл одного из одного вышеуказанных реактивов при помощи стеклянной палочки смешиваем их. Учет реакции проводим в течение 15-20сек по образованию желеобразного сгустка или изменению цвета смеси.

При наличии воспалительного процесса, в молочной железе образуется хорошо сформированный желеобразный сгусток (от умеренного до плотного), при этом сгусток хорошо выбрасывается палочкой из луночки пластинки при перемешивании.

Экспресс-диагностику субклинического мастита с целью исключения раздражения вымени, представляющую собой кратковременную реакцию молочной железы, возникающую в ответ на нарушение технологии машинного доения, воздействие ряда неблагоприятных факторов внешней среды проводим дважды с 48-часовым интервалом, когда после устранения вышеуказанных неблагоприятных факторов в течении 48часов молочная железа приходит в норму. При этом больными маститами считаем тех коров, которые дважды дают положительную реакцию с одним из диагностик умов.

Дополнительным методом исследования на мастит служит проба отстаивания, положительный результат которой говорит о скрытой форме мастита. Для выполнения данной пробы специалист берет в пробирки 10-15мл молока из тех долей вымени, которые дали положительные реакции с маститными тестами и ставит данные пробирки в штативе на 16-18 часов в холодильник или другое холодное место где имеется температура 4-10градусов. Учет реакции проводим путем просмотра пробирок с молоком при дневном освещении.Молоко из здоровых долей имеет белый или слегка синеватый цвет, а осадок отсутствует. Молоко из долей больных скрытым маститом дает образование на дне пробирки осадка, при этом слой сливок уменьшается, они становятся тягучими, слизистыми, хлопьевидными.

В сухостойный период и во время запуска диагностика основана на проведение клинического обследования молочной железы, органолептической оценке секрета, определении в молоке и секрете количества соматических клеток, оценке реакции с одним из вышеуказанных диагностических реактивов, постановке пробы отстаивания.

Всех коров в последний день запуска ветспециалист хозяйства или госветслужбы обследует клинически. При отсутствии клинических признаков мастита (увеличение доли, болезненности, уплотнения тканей, изменение секрета и повышение местной температуры), ветспециалист проводит исследования секрета из каждой четверти вымени по одному из вышеуказанных быстрых маститных тестов и ставит пробу отстаивания.

В сухостойный период обследование молочной железы проводят дважды: через 10-15дней после запуска коровы и за 10-15дней до ожидаемого отела. При выявлении больных скрытой формой мастита проводим лечение.

В последние годы, учитывая, что работа по исследованию дойного стада на скрытую форму мастита очень трудоемка, а также запросы специалистов с мест с целью облегчения работы ветспециалистам в сельскохозяйственных предприятиях по диагностике скрытых форм мастита ученые предложили использовать электронные методы выявления субклинических маститов. Данные методы основаны на том, что при маститах происходит повышение содержания уровня ионов хлора в молоке, которые в свою очередь вызывают снижение электрического сопротивления молока. Мы Ветспециалисты Гороховецкой ветстанции, чтобы подтвердить эффективность и достоверность получаемых данных при исследовании дойного стада на скрытую форму мастита провели тестирование данного прибора «Маститон» в сельскохозяйственном предприятие ООО» Лукьяново».

Для исследования на скрытую форму мастита во время проведения контрольной дойки брали от 15 до 20мл молока из каждой четверти функционирующих долей вымени. Для этого в прибор после подмывания дояркой вымени сдаивали первые порции молока непосредственно в чашку прибора так, чтобы электроды прибора были полностью закрыты молоком. После этого нажимали кнопку включения, удерживая ее в нажатом состоянии 1-2секунды, до установления показателей на дисплее ЖКИ. Записав показатели прибора в специально заведенном журнале исследования дойного стада на скрытую форму мастита, с указанием инвентарного номера исследуемой коровы, приступаем к исследованию других долей вымени.

Прибор «Маститон» имеет достаточно широкий диапазон данных на ЖКИ дисплее (от 000 до 1999 единиц), позволяя практическим ветспециалистам достаточно точно интерпретировать результаты исследования на мастит:

при показаниях на дисплее значений 450 единиц и ниже — данный образец молока из исследуемой доли вымени, говорит о том, что молоко высокого качества; а вероятность субклинического мастита крайне низка.
при показаниях 450- 600 единиц говорит нам о том, что в исследуемой доле существует вероятность возникновения скрытой формы мастита.
при показаниях на дисплее выше 600 единиц говорит о наличии в данной доле вымени скрытой формы мастита и чем выше показатели на дисплее, тем большая вероятность существует у данной коровы перехода субклинического мастита в клиническую форму.

Учитывая, что при однократном исследовании нельзя определить по каждой корове какое-либо фиксированное число, по которому бы ветспециалист мог однозначно определить наличие или отсутствие у данной коровы субклинического мастита, мы вынуждены будем провести многократные исследования в динамике. И по каждому конкретному случаю проследить наличие увеличения или уменьшения показателей на дисплее. По каждому проведенному исследованию его результаты записываем в карточку конкретной коровы.

Чтобы определить границы «здоровое молоко-субклинический мастит» при показаниях прибора около 600 единиц проводили пробу с кено тестом, которая давала положительную реакцию на скрытый мастит. В результате проводимых исследований при помощи прибора «Маститон» в результате повышения уровня ионов хлора в молоке показала нам возможность выявить тенденцию возникновения скрытого мастита еще до того как проба с кено тестом будет давать положительную реакцию на мастит.

Прибор не дает однозначной цифры, выше значений которой специалист должен приступать к лечению коровы. К расшифровке результатов обследования каждого животного следует подходить строго индивидуально т.к. небольшие отклонения от приведенных выше показателей не обязательно свидетельствуют о наличие у коровы мастита. На показатели прибора оказывают влияние- жирность молока, рацион кормления коровы, условия содержания. К примеру у коровы имеющей наибольшую жирность молока в отличие от других коров показатель на дисплее будет выше среднего чем по стаду. У коров 9- летнего возраста и старше в молоке физиологически увеличивается содержание натрия хлорида и количество соматических клеток. В результате чего имеем завышенные показания прибора. У таких коров очень важно обследовать молоко из всех 4-х долей и если три доли дают показание на дисплее прибора 450 единиц, а одна-590, то данный показатель говорит нам о риске заболевания маститом в доле с наибольшим показателем.

С целью выявления субклинического мастита и наблюдения за здоровьем вымени ветспециалистам необходимо вести наблюдения за динамикой изменений показателей электропроводности молока по дисплею ЖКИ прибора «Маститон» у каждой коровы.

Например, у дойной коровы с инв.№1183 при проведении контрольных доек показатели на дисплее по трем четвертям вымени идут в диапазоне 450-550 единиц, а в четвертой доле 600 единиц, то данный показатель будет говорить нам о наличии скрытого мастита в данной доле, а для коров имеющих обычно показатели в интервале от 400 до 500 единиц, получение результата на дисплее 550 и более единиц будет служить показателем о появлении скрытого мастита.

Если при исследовании дойного стада на скрытую форму мастита мы получим показатели 600 единиц и более, то мы должны будем у данного животного перейти к регулярным исследованиям вымени на скрытую форму мастита т.к. данные показатели нам говорят о наличии у коровы мастита или механической травмы вымени.

Отдельные коровы переболевшие маститом, могут длительное время показывать результаты на дисплее 500 единиц и более даже после полного клинического выздоровления, т.к. это связано с последствиями воспаления молочной железы.

Полученные с помощью прибора Маститон данные позволяют практическим ветврачам, да и фермерам своевременно отбирать больных животных из стада, проводить их углубленное обследование на мастит и при его наличие назначать соответствующее лечение.

Если во время контрольной дойки мы выявим большое количество коров показывающих результат 500 единиц и выше, то специалистам хозяйства необходимо провести анализ заболеваемости коров маститами (смотри статью анализ заболеваемости коров маститами в сельскохозяйственном предприятии).

Лечение. Больную субклиническим маститом корову переводим с машинного доения на ручное.

При проведении ручного доения делаем массаж вымени. Применяем методы физиотерапии (аппликации на вымя озокерита, парафина, согревающие повязки (навымник), компрессы, прогревание лампами солюкс, инфраруж и др.).

Проводим лечение с использованием лазерных аппаратов различных модификаций. При использовании лазерного аппарата «СТП» и «ЛАПА» продолжительность одного сеанса в минутах для «СТП»-4-5минут, для «ЛАПЫ»-1минута, курс лечения состоит из 3-4 сеансов по 1 сеансу в день.

Внутримышечно вводим антибиотики: тилозин 200 один раз в день по 8-10мл-3дня. Билозин 200 (инъекционный раствор макролидного антибиотика тилозина в форме основания), в 1мл содержится 200мг тилозина основания (20%). Применяем в дозе 0,5мл на 10кг массы тела животного 2 раза в день (молоко нельзя использовать для пищевых целей в течении 7дней).

Эфикур из расчета 1мл на 50кг массы тела животного подкожно в течении 2-3дней. Можно применять традиционные антибиотики, предварительно проверив молоко из пораженной четверти вымени на чувствительность к антибиотикам.

Внутривымянно применяем Мастиет-форте 10мл в пластмассовом шприце.

Неплохие результаты получают от внутривымянного введения 150 мл парного высоколизоцимного молока (полученного от здоровых коров) 1-2 раза в день в течении 2-3дней.

Рекомендуются блокады вымени с использованием раствора новокаина и тримекаина.

Профилактика. В сухостойный период — проводим запуск коров за 1,5-2 месяца до предполагаемого отела. Запуск начинаем с ограничения дачи сочных кормов и концентратов до 50% рациона. Коров с трехкратного доения переводим на двукратное, затем на однократное, после этого корову начинаем доить через день и прекращаем совсем. У высокопродуктивных коров, которые обычно трудно запускаются, иногда приходится из рациона исключать полностью сочные и концентрированные корма и ограничивать водопой.

Ввиду того, что заболевание коров субклиническим маститом очень часто встречается в период запуска и сухостоя владельцы животных и специалисты хозяйств должны усилить контроль за состоянием вымени в эти периоды. Специалисты должны один раз в две недели проводить клиническое обследование вымени с пробным сдаиванием секрета из молочных четвертей.

В ряде хозяйств Ветспециалисты с целью профилактики послеродовых маститов при запуске коров применяют внутривымянное введение антибактериальных препаратов. Причем обычно вводят препараты длительного спектра действия (бициллин-3 в дозе 300тыс ЕД в каждую запускаемую четверть, Мастикур, мастицид,Мастиен- форте, Мамифорт Секадо по одному шприцу содержащему 10мл. препарата в каждую четверть вымени, а также другие антибактериальные средства).

источник

Для исследования готовят 5% раствор димастина на дистиллированной или прокипяченной теплой воде. В каждое углубление пластинки из соответствующей четверти вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл димастина из бутылки с пипеткой-автоматом. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой лунке в течение 10-15 секунд.

При использовании пластинки МКП-2 палочка не требуется, смешивание молока с реактивом производится путем горизонтального вращения пластинки. Реакция учитывается по густоте желе и цвету.

— отрицательная реакция — однородная жидкость (—);

— сомнительная реакция — следы образования желе(±);

— положительная реакция — ясно видимый сгусток (от слабого до плотного), который можно выбросить из луночки палочкой (+).

— отрицательной реакции (-) образуется однородная смесь.

— Сомнительная реакция (±) — во время вращения пластинки на дне лунки заметны тонкие хлопья без образования сгустка.

— Положительная реакция (+) — отчетливое появление слабого или быстрообразующегося плотного сгустка.

Для исследования коров на мастит по молоку из общего удоя применяют 10% раствор мастидина.

Техника постановки пробы на пластинках МКП-1 и МКП-2 и учет реакции по образованию желе проводят так же, как и при постановке с димастином.

Для определения пораженной четверти вымени от животных давших, положительную или сомнительную реакции с 10% раствором мастидина, отбирают пробы молока из каждой четверти и исследуют с 5% или 2% растворами мастидина или по пробе отстаивания.

Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл 10% раствора прибавляют 400 мл дистиллированной воды или прокипяченной теплой воды.

Постановка пробы и учет реакции проводят по образованию сгустка и изменению цвета, как при исследовании молока с 10% раствором мастидина.

Образование сгустка является основным диагностическим признаком при исследовании молока по димастиновой и мастидиновой пробам, а изменение цвета служит ориентирующим признаком.

Показания реакций с димастином или мастидином не имеют самостоятельного значения для постановки диагноза на мастит, они в обязательном порядке должны подтвердиться пробой отстаивания.

Ее проводят путем отбора секрета из четвертей вымени, которые реагировали положительно на димастиновый или мастидиновый тесты.

В конце доения в пробирку надаивают 10 мл молока и ставят ее на 16-18 часов в холодильник, чтобы оно не прокисло. На второй день учитывают результат. При этом обращают внимание на наличие осадка, количество и характер сливок и цвет молока.

Молоко здоровых коров имеет белый или слегка синеватый оттенок, осадка не образует. Молоко от больных маститом коров водянистое, сливки становятся тягучие, слизистые, хлопьевидные.

Основным диагностическим признаком при пробе отстаивания является осадок. Образование его в отстоявшемся молоке или наличие хлопьевидных, тягучих слизистых сливок указывает на положительную реакцию (Рис. 12). Такую корову считают больной маститом, ее изолируют от общего стада и подвергают лечению. Молоко из пораженной маститом доли выдаивают руками, собирают отдельно и уничтожают. Молоко из непораженных четвертей в каждом отдельном случае бракуют в соответствии с наставлением по применению того или иного метода лечения.

Проба Тромсдорфа— один из давно известных непрямых методов обнаружения повышенного количества клеток в молоке. Сущность ее заключается в осаждении повышенного содержания лейкоцитов и других клеточных элементов при центрифугировании 10 мл молока. Используют делительные пробирки с суженным нижним концом. После центрифугирования судят по объему осадка о наличии или отсутствии заболевания вымени.

В процессе дальнейших исследований было замечено, что при центрифугировании сырого молока не все соматические клетки выпадают в осадок, какая-то часть их остается в слое сливок. Поэтому при нагревании молока перед центрифугированием до температуры 60— 70 °С объем осадка увеличивается.

Проба Уайтсайда— довольно распространенный диагностический тест. Для постановки пробы используют 4 %-ный раствор едкого натра, который смешивают с молоком в соотношении 1 : 5. При наличии воспалительных процессов в вымени (положительная реакция) образуется густая тягучая масса с хлопьями. Для упрощения реакции и ускорения исследований обычно берут 0,1 мл щелочи и 0,5 мл молока.

Многие исследователи признают пробу Уайтсайда достаточно чувствительной и пригодной для выявления различных состояний вымени, при помощи которой можно обнаружить до 80 % и более коров, подозреваемых в заболевании маститом. При изучении механизма действия пробы Уайтсайда оказалось, что степень реакции ее зависит не только от количества лейкоцитов, но и содержания молочного жира и солей кальция в молоке.

В настоящее время более широко применяют быстрые маститные тесты из поверхностно-активных веществ, которые, по нашим и другим многочисленным данным, дают хорошие результаты при диагностике мастита, отражая количество соматических клеток в молоке. Одним из таких тестов является калифорнийская маститная проба (КМТ).

Действующим началом в ней являются поверхностно-активные вещества типа алкиларилсульфатов и алкиларилсульфонатов. Данная проба заключается в смешивании равных объемов молока и раствора реактива (3—5 %-ного). Ставят ее на специальных пластмассовых пластинках с четырьмя цилиндрическими углублениями. В углубления надаивают из каждой четверти вымени по 2 мл молока и добавляют такое же количество реактива из пластмассовой шприц-бутылки. Молоко с реактивом перемешивают круговыми движениями пластинки. При повышенном содержании клеток в молоке через 5—10 с образуется желеобразная масса (густота последней зависит от количества клеток). Реактив включает индикатор бромкрезоловый пурпурный, который одновременно показывает изменения рН молока. Положительная реакция по КМТ разграничивается на три степени: слабо положительная, четко положительная и сильно положительная.

По данным авторов КМТ и других исследователей, которые проверяли данный тест, результаты пробы соответствуют содержанию клеток в молоке.

Механизм действия калифорнийской маститной пробы заключается в том, что в реакцию с поверхностно-активным веществом вступают ядра клеток. При этом оболочка ядер разрушается, дезоксирибонуклеиновая кислота, содержащаяся в них, освобождается и придает молоку, смешанному с реактивом, вязкую консистенцию.

источник

Лабораторная диагностика мастита основана на выявлении физико-химических, биологических изменений секрета, увеличения в нем количества соматических клеток (лейкоциты, эпителиальные клетки выводных протоков) и выделении возбудителя.

Косвенно соматические клетки определяют с помощью диагностических реактивов беломастина, мастидина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества (ПАВ). ПАВ разрушают мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реакцию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молочно-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4 луночки, соответственно долям вымени коровы. Определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов проводят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы.

После каждого исследования необходимо промывать молочно-контрольные пластинки.

Проба с беломастином. Реакция основана на способности поверхностно-активного вещества образовывать гель с молоком, содержащим соматические клетки. При исследовании молока (секрета) из вымени коров, диагностикум разводят дистиллированной или кипяченой водой в соотношении 1: 3 (к 100 мл беломастина добавляют 300 мл воды). Срок использования рабочего раствора 8 месяцев.

Для проведения пробы с беломастином в луночки молочно-контрольной пластинки (МКП-1) из соответствующих долей вымени выдаивают по 1 мл испытуемого молока и добавляют 1 мл рабочего раствора диагностикума с помощью пипетки. Смесь молока с реактивом перемешивают стеклянной палочкой в течении 9-10 секунд. Результаты реакции:

· отрицательная реакция (-) — жидкая смесь остаётся однородной;
· сомнительная реакция (-, +) — в смеси образуются слизистые нити;
· положительная реакция (+) — смесь приобретает консистенцию слизистой массы или желеобразного сгустка.

Для контроля результатов лечения больных маститами животных молоко исследуют на 10-14 день после введения препаратов. В сборном молоке при отрицательной реакции в 1 мл содержится до 500 тыс. соматических клеток, при сомнительной — от 500 тыс. до 1 млн; при положительной — свыше 1 млн.

Проба с 2% раствором мастидина. Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл 10% раствора, выпускаемого отечественной промышленностью, прибавляют 400 мл дистиллированной или прокипяченной воды. В луночки молочно-контрольной пластинки (ПМК-1, ПМК-2) из соответствующих долей вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл приготовленного 2% раствора мастидина с помощью пипетки-автомата или дозатора жидкости. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой луночке ПМК-1 поочередно в течение 10-15 секунд. При использовании ПМК-2 смешивание молока с реактивом проводят одновременно во всех луночках, путем ротационного вращения пластинки в горизонтальной плоскости. Реакцию учитывают по густоте желе:

· отрицательная реакция (-) — однородная жидкость;
· сомнительная реакция (-, +) — следы образования желе;
· положительная реакция (+) — ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании.

На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции:

· (-) — образуется однородная смесь;
· (-,+) — при сомнительной реакции во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити (тяжи) без тенденции образования сгустка;
· (+) — положительная реакция отчетливое появление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концентрирующегося при вращении пластинки в центре луночки.

Определение рН молока по цвету с 2% раствором мастидина:

· светло-сиреневый, дымчатый — рН молока нормальная (рН = 6,5-6,8);
· почти белый — повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);
· темно-сиреневый — повышенная щелочность молока (рН больше 8).

Проба с 5% раствором мастидина. Раствор мастидина готовят на дистиллированной или прокипяченной теплой воде.Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Определения рН молока по цвету:

· оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый) — нормальная реакция молока (рН = 6,5-6,8);
· желтый — повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);
· красный — повышенная щелочность молока (рН больше 6,8);
· алый и малиновый — ярко выраженная щелочность молока (рН больше 7.0).

Проба с 1% раствором мастоприма. Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4 части) с едким натрием (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде.

Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Проба с димастином (по В.И. Мутовину.) Димастин включает в себя 2 реагента: поверхностно активное вещество акрилсульфонат и индикатор бромкрезол пурпур.

Проба позволяет одновременно выявлять в молоке щелочную реакцию и повышенное содержание клеток. Для этого в лунку молочно-контрольной пластинки вносят пипеткой по 1 мл исследуемого молока. Добавьте к нему из склянки 1 мл 5% раствора димастина. Стеклянной палочкой смешивают0 молоко с реагентом и сравните показания реакции. Молоко из больной четверти приобретает малиновый цвет и образует желеобразный сгусток. Молоко из здоровой доли — оранжевый цвет, а его консистенция не изменяется.

Проба Уайтсайда. Проба основана на косвенном учете повышенного содержание лейкоцитов и эпителиальных клеток. В лунку молочно-контрольной пластинки вносят глазной пипеткой 5 капель молока и добавляют 2-3 капли 4% водного раствора едкого натра. Реактивную смесь перемешивают стеклянной палочкой 20-30 сек. Молоко из больной доли вымени дает образование желеобразного сгустка.

Проба с розоловой кислотой. В лунку молочно-контрольной пластинки вносят 10 мл молока и добавить 1 мл 0,1% раствора розоловой кислоты на 65% спирте. В норме содержимое приобретает светло-розовую окраску. При патологии окраска содержимого имеет цвет от светлого до темно-красного.

Проба с мастит-диагностом. В состав мастит-диагноста входит: вода 100 мл, сульфанол-30, тринолинфосфат-5г, бромтимоловый синий — 0,02г, 1% раствор розоловой кислоты-0,5 мл.

В лунки молочно-контрольной пластинки вносят 1 мл молока и 1 мл реактива и смешивают. Гомогенная смесь — молоко от здоровых коров; наличие плотного желеобразного сгустка, тягучей массы или редко слизи — положительная реакция на скрытый мастит.

Бромтимоловая проба по Эрасту. Реактив: 0,1 г бромтимолблау + 100 мл 960 спирта. Берут 5 мл молока и добавляют 1 мл реактива, встряхивают в пробирке. При норме цвет желтоватый, желтый, желто-салатовый, желто-зеленый. Патология — светло-зеленый, зеленый, ярко-зеленый, сине-зеленый и синий цвет

Бромтимоловая проба по Логвинову. Реактив: 0,1 г бромтимолового индикатора + 20 мл 960 спирта + 80 мл дистиллированной воды. Берем 1 мл молока и 1 мл бромтимоловой пробы в луночки прибора для определения качества молока. Если появляется синяя окраска смеси, то реакция положительная. Если желтоватый цвет или без изменений, то реакция отрицательная.

Проба с бензидином. Используется для выявления в молоке пигментов крови. В пробирку наливают 5 мл 3% -ного раствора перекиси водорода и 2 мл насыщенного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте. После тщательного взбалтывания в смесь прибавляют 2-10 капель молока. Положительная реакция — смесь окрашивается сначала в зеленый, а через минуту в темно-синий цвет; отрицательная — смесь светлая с беловатым хлопьевидным осадком.

Проба отстаивания. Молоко из каждой четверти вымени положительно реагирующее, проверяют пробой отстаивания. При положительной пробе, корова считается больной маститом. В конце доения из каждой доли в пробирку берут 10-15 мл молока и ставят на 16-18 часов в холодное место (в холодильник, при температуре от +4 до 100С), чтобы молоко не прокисло. Реакцию читают на второй день у источника света. Исследуют: цвет молока, наличие осадка, толщину и характер слоя сливок. Молоко от здоровой коровы белого или слегка синеватого цвета, осадок не образуется. Молоко от больной коровы — водянистое, консистенция сливок изменена (тягучие, слизистые, хлопьевидные). Главный признак — наличие осадка высотой 1 мм и более. Слой сливок толщиной более 1,5 см — нет мастита, слой менее 5 мм — есть мастит.

Коров с отрицательным результатом при постановке пробы отстаивания проверяют повторно при помощи вышеуказанных диагностических тестов не позднее чем через 6 дней после первой проверки.

источник

Диагностика мастита. В зависимости от характера воспалительной реакции мастит разделяют на клинический с ярко выраженными признаками воспаления и скрытый (субклинический) без выраженных клинических симптомов заболевания. Диагностика клинического мастита основывается на данных анамнеза, клинического и лабораторного исследований.

По клиническим признакам, отражающим характер воспалительного процесса различают:

— Катаральный: катар молочных ходов и цистерн, катар альвеол;

— Гнойный: гнойно-катаральный; абсцесс вымени; флегмона вымени;

— Специфический: ящур; туберкулез вымени; актиноминоз. По течению маститы разделяются:

— острые, продолжительностью до 10 дней;

— подострые, продолжительностью до 3 недель;

— хронические, продолжительностью свыше 3 недель. Диагностируют маститы клиническими и лабораторными методами. Клиническая диагностика включает анамнез (опрос), общее обследование вымени и других органов.

Анамнезом устанавливают благополучные хозяйства в отношении заразных и незаразных и инвазионных болезней, особенно гинекологических; тип и уровень кормления; условия содержания, особенно в сухостойный период; наличие моциона и его организацию; дату последнего отела; длительность сухостойного периода; общее состояние организма до и после родов; время появление болезни, ее признаки; состояние вымени и уровень молочной продуктивности в предыдущие годы, режим и технологию машинного доения; санитарное и технологическое состояние доильного оборудования; лечение животных и его эффективность.

Клинические исследования начинают с осмотра животного: измерения температуры тела, частоты пульса дыхания. Затем определяют состояние кожи, лимфатических узлов, сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечного тракта. Вымя исследуют при помощи осмотра, пальпации и пробного доения.

Осмотром определяют цвет, целостность кожи, состояние волосяного покрова, форму и пропорциональность отдельных четвертей, состояние подкожных кровеносных сосудов вымени.

Пальпацией устанавливают болевую и температурную реакцию молочной железы, ее консистенцию, наличие и характер уплотнений и других морфологических изменений в ткани, цистерне и канале соска вымени. Наличие атрофированных четвертей вымени, указывают на ранее перенесенный мастит. Пальпацию молочной железы проводят после доения.

Для определения консистенции, болезненных и характерных уплотнений каждую четверть вымени пальпируют в отдельности путем легкого сдавливания ее тканей. В норме молочная железа нежная, кожа легко собирается в складки и смещается, а паренхима ощущается в виде упругой дольчатой ткани.

Цистерну и канал соска исследуют путем захвата основания соска между указательным и большим пальцами и вытягивая его к низу, смещая пальцы к верхушке соска, одновременно прокатывая сосок между пальцами, что позволяет выявить морфологические изменения в стенке цистерны или канале соска.

Пальпацией определяют величину, подвижность, консистенцию болезненность паховых узлов. В норме они 7-8 см длиной, 1 см в диаметре, подвижны, безболезненны, упругой консистенции. Пробным доением определяют тонус сфинктера соскового канала по усилию, прикладываемому для выдаивания молока, а также аномалию соскового канала обуславливающих слабо-тугодойность, непроизвольное истечение молока (лакторею), количество и органолептические свойства секрета, обнаружение в секрете хлопьев или сгустков, выявляемых осмотром, являются одним из признаков мастита.

Для дифференциальной диагностики руководствуются показателями в таблицах 14 и 15.

Диагностика скрыто протекающего мастита требует проведения специальных исследований. Для выявления скрыто протекающих маститов используют быстрые диагностические тесты с применением химических препаратов, пробу отстаивания, подсчет соматических клеток, бактериологические исследования и различные технологические устройства.

Быстрый маститный тест (БМТ) с использованием диагностикумов химической природы получил наибольшее распространение. В качестве диагностикумов применяют димастин, мастидин, мастоприм, мастотест Воронежский, проба 20 % сульфоналом и др., позволяющие обнаружить увеличение лейкоцитов в молоке.

Схема диагностики мастита у коров

Дифференциальная диагностика клинически выраженного мастита у коров

В «БелНИИЭВ им. С.Н. Вышелесского» разработан диагностикум «Беломастин», представляющий собой 10 % раствор поверхностно-антисного вещества с добавлением индикатора. Лактирующих коров обследуют на скрыто протекающий мастит не реже одного раза в месяц.

Исследования проводят на молочно-контрольных пластинках (МКП-1 или МКП-2).

МКП-1 для диагностики мастита представляют собой пластинку с четырьмя (по числу долей вымени) полушаровидными лунками, которые имеют контрастное черно-белое окрашивание и кольцевые углубления, соответствующие объему 1,0 и 2,5 мл молока. Черно-белое дно луночек облегчает выявление в молоке белых хлопьев на черном или примеси крови на белом фоне. Между одной парой луночек сделано отверстие для обозначения луночек и соответствующих им частей вымени. При взятии проб молока из вымени МКП-1 держат отверстием по направлению и коровы, что позволяет затем легко определить из какой четверти взято молоко в ту или иную луночку.

Молочно-контрольная пластинка МКП-2 отличается от МКП-1 большим размером лунок цилиндрической формы с калиброванным центральным углублением на 1 мл и наличием двух щелей между лунками для одновременного слива излишке молока (более 1 мл) путем наклона пластины под углом 60-650.

При использовании МКП-1 молоко с реактивом смешивают при помощи деревянной или стеклянной палочки, а на МКП-2 смешивание осуществляется путем горизонтальных круговых вращений пластины.

Беломастин применяют в нативном виде для исследования сборного молока, а для исследования секрета из вымени разбавляют водой 1:3 (к 100 мл препарата добавляют 300 мл3 воды).

В углубление пластинок (МКП-1, МКП-2) при пробирки вносят 1 мл исследуемого молока (секрета) и добавляют 1 мл рабочего раствора одного из диагностикумов, перемешивают стеклянной палочкой или путем горизонтального вращения пластинки. Реакцию учитывают в первые 10-20 сек.:

— отрицательная реакция (-) жидкая смесь остается однородной;

— сомнительная реакция ± смесь образует единичные слизистые хлопья или тяжи;

— положительная реакция (+) смесь приобретает консистенцию слизистой массы или желеобразного сгустка.

Коров давших сомнительную реакцию, используют повторно через 2-3 дня.

С целью сохранения затрат труда и времени при обследовании коров на мастит первичную диагностику проводят во время контрольных доек путем исследования молока из удоя каждой коровы при помощи 10 % мастидина, 10 % сульфанола, Беломастина. После установления положительной реакции на мастит в молоке из удоя исследуют молоко из каждой доли. В случае не возможности постановки реакции сразу после взятия пробы молоко консервируют 10 % раствором бихромата калия (из расчета 1 мл консерванта на 100 мл молока).

С целью диагностики маститов многие исследователи предлагают определять рН молока с помощью различных индикаторов: феноловый красный, бромкрезоловый, бромтимоловый синий, нейтральный красный, крезоловый красный, ализариновый красный, розовая кислота, универсальный индикатор. А.И. Ивашура (1991) при постановке опыта на МКП с контролем на рН метре установил, что из вышеуказанных реактивов наиболее часто изменял цвет с ясно выраженными оттенками, позволяющими уловить изменения рН в пределах 6,6-7,0 через каждые 0,1-0,15 изменений только индикатор бромтимоловый синий (0,5 г в 50 мл этилового спирта с добавлением 50 мл дистиллированной воды).

Для подтверждения диагноза на скрытый мастит часто ставят пробу отстаивания. Проба отстаивания считается недостаточно чувствительным способом диагностики скрытых маститов и обычно используется как дополнительный метод. Она дает положительные результаты при значительных воспалительных изменениях в тканях молочной железы. При ее постановке из вымени выдаивают из каждой доли в отдельную пробирку по 10-15 мл молока и ставят на 16-18 ч. в холодильник при температуре 4-100С. У здоровых коров молоко белое, однородное, без осадка. У больных животных на дне пробирки образуется осадок, содержащий лейкоциты, клетки эпителия. В отдельных пробах положительная реакция сопровождается изменением цвета молока — сероватый, слизистый, желтоватый. Положительной реакцией считается, если высота осадка в пробирке составляет 0,1 см и более. Для выявления больных животных в процессе машинного доения Н.Л. Егин, И.И. Блаковой и др. (1986) предложили механический индикатор мастита (МИМ-1).

Принцип действия устройства основано на фильтрации молока через металлическую сетку вставленную с рамкой в молочный шланг. Наличие хлопьев, сгустков свидетельствует о заболевании коровы маститом.

Обследование коров различными диагностическими тестами показало, что большое количество хлопьев обнаруживается при клиническом мастите, незначительное при переходе субклинической формы мастита в клиническую. При подсчете соматических клеток в пробах молока полученного из здоровых и пораженных долей. Положительная проба отстаивания установлена в 27,8 %, хлопья на сетке МИМ-1 в 41,2 %, положительная реакция с 5 % раствором димастина 86,6%. При заболевании маститом изменяется в молоке соотношение солей, учитывая этот фактор для диагностики маститов предложены приборы действия, которых основано на измерении электропроводности ПЭДМ, АСМ-1, Биотест и др. Методы измерения электропроводности молока благодаря своей доступности и быстроте позволяет обследовать фермы с большим поголовьем, однако не всегда позволяют выявлять коров на ранних стадиях воспалительного процесса. Неточность результатов определения мастита измерением электропроводности достигает 29,4%.

Одним из широко используемых диагностических тестов является определение соматических клеток. Это наиболее точный показатель маститных тестов. В состав соматических клеток входят лейкоциты (80-85 % от общего числа клеток), эритроциты, клетки плоского, цилиндрического и кубического эпителия молочной железы, колостральные тела. От состояния вымени животного зависит их количественное соотношение (табл. 16).

Повышение соматических клеток является одним из первых сигналов любого вредного воздействия на ткани молочной железы и начавшегося в ней воспалительного процесса.

Содержание соматических клеток молока у коров

Хотя средние показатели количества соматических клеток в молоке довольно хорошо характеризуют различное состояние вымени наблюдаются в пределах одного и того же состояние вымени довольно широкие их колебания. Так, в молоке здоровых четвертей число соматических клеток насчитывают от десятков тысяч до 1 млн. При нарушении секреции колебания в более широких пределах. Так, проведенные исследования показали, что 30 % обследованных проб молока при нарушении секреции содержало меньше 1 млн./мл, 6 % проб больше 5 млн. остальные 61 % в пределах 1 -5 млн. При ранней форме мастита 3 % проб больше 500 тыс. соматических клеток, 51,4 % проб от 1 до 5 млн. и 45,6 % — больше 5 млн.

В качестве нормы для вымени здоровых коров уровень соматических клеток составляет 350 000 в 1 мл.

Имеется взаимосвязь степени заболеваемости коров стада маститами с количеством соматических клеток в сборном молоке. Так, при их содержании 0,5 млн. в 1 мл степень заболеваемости составляет менее 10 %, 1,3 млн. 10-20 %, 3,8 млн. более 20 %.

По данным О.Р. Ивановой (1994) уровень соматических клеток от 400 тыс. до 31 млн.в 1 см3 в сборном молоке показывает 5-21 % больных коров в стаде. Увеличение количества клеток свыше 1 млн. в 1 см процент мастита в стаде возрастает от 21 и выше.

Для подсчета соматических клеток предложено значительное количество методов: Прэскот-Брид (1910), определения лейкоцитов в молоке И.И. Архангельский и др. (1969) и др.

Предложенные методы трудоемки, выполнимы при использовании микроскопа в лабораторных условиях. В настоящее время для подсчета соматических клеток в молоке используются приборы типа Соматос, Фоссоматик, которыми оборудованы молочные заводы, производственные лаборатории.

Бактериологические исследования. Для определения возбудителей мастита их чувствительности к лекарственным препаратам из пораженных четвертей вымени (положительная проба отстаивания и реакция с БМТ), отбирают молоко (секрет) для бактериологических исследований.

Для этого соски вымени протирают ватным тампоном, смоченным 700 спиртом (5 см3 на одну четверть) и надаивают 10 см3 молока в стерильную пробирку. При взятии проб следят за тем, чтобы, сосок не касался края пробирки.

Пробы молока доставляют в ветеринарную лабораторию в течение 3-4 ч. с помощью взятия в специальных емкостях, обеспечивающих температуру не выше 8100 или термосах со льдом.

В лаборатории из проб молока (секрета) делают посевы на элективные питательные среды для выделения и идентификации основных возбудителей мастита и определения их чувствительности к антимикробным препаратам. Определение антибиотико-препаратограмм проводят не реже 6 мес. в год. При необходимости проводят исследование на патогенность выделенных культур путем заражения белых мышей.

Диагностика мастита в запускной и сухостойный периоды. За 7-10 дней до запуска и в последний день запуска всех коров исследуют клинически. При отсутствии клинических признаков (увеличения, доли, болезненность, изменение секрета, повышение местной температуры), болезни исследуют секрет из каждой доли вымени по быстрому маститному тесту.

В период запуска, а также в первые дни лактации положительные реакции с беломастином, димастином не всегда обусловлены воспалительным процессом, там как в этот период в молоке содержится высокое содержание лейкоцитов. Отрицательной реакцией в этом случае считается такая, при которой консистенция молока выражена в одинаковой степени во всех четырех лунках молочно-контрольной пластинки. Если положительные реакции установлены в пробе от всех четвертей вымени, то необходимо тщательно провести клиническое исследование, и обратить внимание на качества секрета.

В сухостойный период коров исследуют на мастит дважды: первый за 10-15 дней до начала сухостоя, второй через 10-15 дней от отела при переводе животных в родильное отделение. В течение первых 20-30 дней сухостойного периода секрет жидкий, серовато-белого цвета, однородной консистенции без каких-либо включений. Во второй половине периода секрета в вымени молока (3-5 мл), он вязкий, тягучий, клейкий (медообразный), желто-коричневого цвета, иногда выдоить секрета не удается. Секрет вымени здоровых коров с реактивными быстрых маститных тестов сгустков не образуется, наличие сгустка свидетельствует о заболевании доли вымени субклиническим маститом. Наличие клинических признаков или изменение количества или внешнего вида секрета показывает на клинически выраженный мастит.

Сразу после отела мастит устанавливают по характеру молозива. От здоровых коров, после отстаивания в пробирке образуется два слоя: верхний — интенсивно-желтого цвета, занимающий две трети объема, нижний — белый без каких-либо включений. При воспалении и травмах секреторной ткани вымени молозиво приобретает розовый или красный оттенок. За счет примеси крови, при отстаивании на дне пробирки и под верхним слоем жидкости появляются кольца красно-малинового цвета за счет эритроцитов. При развившемся воспалении вымени образуется бело-серый осадок или серо-желтый экссудат не разрушающий на два слоя при отстаивании.

Мастит у нетелей выявляют на 8-9 месяцах стельности путем осмотра и пальпации молочной железы, а так же пробного сдаивания секрета и его визуальной оценки.

источник

Для профилактики маститов и предупреждения получения молока низкого качества необходимо своевременно проводить диагностические исследования.

Как отмечено выше, по клиническим признакам маститы у коров подразделяют на серозный, катаральный, фиброзный, гнойный и геморрагический. Показатели дифференциальной диагностики клинически выраженного мастита представлены в таблице 5.

Субклинический мастит диагностируют путем исследования молока с одним из быстрых диагностических тестов (БМТ), используя при этом пробу молока с димастином, мастидином, мастотестом Воронежским, или с помощью анализатора Экотест-303 и маститоизмерителя фирмы «Драмински». Действие быстрых маститных тестов основано на выявлении увеличенного количества лейкоцитов и изменения рН молока.

Более эффективно исследовать цистернальное (первые порции) и паренхимное (последние порции) молоко. Исследования проводят обычно на молочно-контрольных пластинах (МКП-1 или МКП-2), которые имеют по четыре (числу четвертей вымени) лунки с углублением, объемом 1 мл или 2,5 мл.

5. Дифференциальная диагностика клинически выраженного мастита у коров

Секрет пораженной четверти

Часто, без изменений, реже легкое угнетение, температура тела

Кожа напряжена, непигментиро-ванные участки гиперемированы,

Поражены чаще половина или

оно увеличено, неравномерно уплотнено, часто сосок местами

Вначале внешне не изменен,

Без видимых изменений, иногда легкое угнетение, аппетит понижен, температура тела повышена

болезненность слабо выражена или отсутствует

она увеличена или местами

уплотнена, особенно у основания;

у основания очаги флюктуации

Жидкий, водянистый, серовато-белого цвета

с примесью желтоватых или беловатых хлопьев, реже выделяется небольшое количество желтоватой сыворотки с хлопьями или густая сметано-образная масса

Угнетенное, аппетит понижен или отсутствует, температура тела повышена, хромота, исхудание

Кожа напряжена, непигментированные участки гиперемированы,

четверть вымени болезненна

она резко увеличена, уплотнена с наличием отдельных

размягчения, сосок отечный, иногда отмечают крепитацию

реже густой экссудат с преобладанием хлопьев,

могут быть примеси крови, сгустки

Угнетение, отказ от корма, температура тела повышена, хромота

Кожа напряжена, непигментированные участки

гиперемированы, температура кожи повышена, болезненность выражена

Пораженная четверть вымени увеличена, местами

чаще густой с хлопьями белого или желтого цвета, может быть жидким, желто-красного цвета

напряжена, отечна, гиперемирована,

неравномерно увеличена, прощупываются флюктуирующие, напряженные очаги разной величины;

при глубоком расположении абсцессов четверть

увеличена, флюктуация слабо выражена

Вначале молоко не изменено,

но его мало; затем оно становится водянистым, серовато-белого цвета с примесью гноя, казеина; вид секрета зависит от количества абсцессов и места их вскрытия (через кожу или просвет молочных ходов)

Сильно угнетенное, температура тела значительно повышена, аппетит пони-жен или отсутствует, хромота

Кожа напряжена, отечна, равномерно гиперемирована, температура высокая, болезненность значительная

Пораженная четверть значительно увеличена; сильно отечный сосок

Секрета мало, он водянистый, сероватого цвета с примесью хлопьев, нередко кровянистый

Угнетенное, температура тела значительно повышена, аппетит понижен

Кожа отечна, равномерно гиперемирована, температура повышена, болезненность значительная

Чаще поражены половина или

все вымя; пораженная часть равномерно увеличена и уплотнена;

водянистый, красноватого цвета,

с хлопьями и сгустками крови

Методы выявления маститов у коров можно разделить на следующие группы:

Физико-химические методы диагностики мастита. Используются как вспомогательные наряду с другими тестами. К ним относятся индикаторные методы, каталазная проба, определение хлорсахарного числа, плотности и электропроводимости молока, а также опсонофагоцитарная реакция лейкоцитов молока.

Индикаторные методы чаще используют при определении рН молока. Они основаны на изменении цвета индикатора при тех или иных изменениях рН молока. Наиболее чувствительными являются: бромтимоловый синий, бромкрезоловый пурпурный, феноловый красный, нейтральный красный, крезоловый и другие. Молоко здоровых коров имеет слабокислую реакцию (рН 6,3-6,9). При заболевании коров маститом реакция молока в большинстве случаев становится щелочной (рН 7,0 и выше) и очень редко кислой (рН 6,0 и ниже). Кислая реакция молока также бывает после отела, а щелочная — у стародойных и у коров, находящихся в запуске.

Для контроля за состоянием молочной железы руководствуются «Методическими указаниями по диагностике, лечению и профилактике маститов у коров».

Для диагностики скрыто протекающих маститов используют 10%-ный раствор мастидина или 10%-ный раствор мастотеста Воронежского, или 20%-ный раствор сульфанола (который перед анализом разводят водой до 10%-ной концентрации), или 5%-ный раствор димастина, мастоприма или 4%-ный раствор гидроокиси натрия (проба Уатсайда), а также пробу отстаивания.

Все диагностикумы содержат поверхностно-активные вещества, которые, взаимодействуя с лейкоцитами, образуют сгусток, а индикатор изменяет цвет в зависимости от реакции среды (рН).

Проба с димастином является одним из широко применяемых методов исследования молока с целью выявления субклинического мастита.

Для диагностики заболевания необходимы пластинки с углублениями, пипетки на 1 мл, стеклянная палочка, 5%-ный раствор димастина (приготовленный на дистиллированной воде), автомат-пипетка на 1 мл.

При исследовании в луночки пластинки от каждой доли вымени наливают по 1 мл молока последней порции удоя, добавляют по 1 мл 5%-ного раствора димастина. Содержимое луночки перемешивают стеклянной палочкой. Молоко, полученное от коров, больных маститом, образует плотный тягучий сгусток ярко-красного цвета. Если образуется сгусток желеподобной консистенции красного цвета, то считают, что молоко получено от коров, подозрительных по заболеванию маститом. Нормальное молоко остается однородным, цвет его оранжево-красный.

Проба с мастидином. Пробу проводят так же, как с димастином.

Реакцию учитывают главным образом по густоте желе. Положительная реакция — сгусток похож на белок куриного яйца, фиолетового или

темно-сиреневого цвета, отрицательная — однородная жидкость или слабый сгусток светло-сиреневого или дымчатого цвета. В таком же порядке исследуют молоко другими диагностиками (мастограм, сульфанол).

Проба с отстаиванием. В пробирку наливают 10-15 мл молока, отстаивают в течение 16-18 ч на холоде и на второй день учитывают реакцию. В молоке коров, больных маститом, на дне пробирки образуется осадок с желтоватым или синеватым оттенком высотой 0,1 см и более, а также уменьшается слой сливок. Молоко от здоровых коров осадка не образует. Если проба с отстаиваиванием дает сомнительные результаты, то для уточнения диагноза, молоко направляют на исследование в ветеринарную лабораторию, где определяют число лейкоцитов, активность каталазы и лизоцима, исследуют бактериологически.

Каталазная проба. Каталаза содержится в молоке здоровых коров в небольшом количестве, при воспалительных процессах ее содержание увеличивается. Данная проба основана на определении в молоке увеличенного содержания фермента каталазы, которая продуцируется клетками тканей, соматическими клетками, а также некоторыми микроорганизмами. Наибольшее количество каталазы вырабатывают лейкоциты. Проба основана на принципе расщепления каталазой перекиси водорода с выделением газообразного кислорода. Ставят ее в специальных каталазных или градуированных пробирках. Известны и более упрощенные, ускоренные модификации пробы в виде смешивания молока и раствора перекиси водорода в углубленной черной пластинке или обычных пробирках, где в положительных случаях сразу после перемешивания появляется пенообразование.

Заслуживает внимания очень простой метод каталазной пробы путем погружения в раствор перекиси водорода бумажных дисков, смоченных исследуемым молоком. По времени обнаружения диска на поверхности смеси судят об активности каталазы или о количестве соматических клеток в молоке. Каталазная проба является чувствительным тестом, хотя в ряде случаев, обнаруживается положительная реакция с молоком здоровых коров.

Определение хлорсахарного числа. Хлоросахарное число — это соотношение хлоридов и лактозы (молочного сахара). В нормальном молоке в середине лактации содержится около 0,07% хлоридов и 4,5-4,7% лактозы. Наиболее приемлемым показателем является число Кестлера (процент хлоридов, умноженный на 100 и деленный на процент лактозы). Для нормального молока это число составляет 2 или меньше, а для анормального молока превышает 3.

Лактоза и хлориды имеют важное значение в регулировании осмотического давления молока. Данный показатель является величиной постоянной и характеризует состояние физиологических процессов в организме. Уровень осмотического давления молока зависит от количества растворимых в нем молочного сахара и хлористых солей.

При воспалительных процессах вымени вследствие нарушения секреции в молоке значительно уменьшается количество лактозы, которая не поступает в готовом виде из крови, а синтезируется в молочной железе.

В результате снижается осмотическое давление молока. Так как молоко и кровь изотоничны, то для выравнивания осмотического давления из крови в молоко усиленно начинают диффундировать соли, главным образом — хлористый натрий. Содержание лактозы в молоке при воспалительных процессах в молочной железе является первичным, а солей — вторичным. Границы содержания хлоридов в нормальном молоке — 0,05-0,12%, а в анормальном (при мастите) — 0,30% и более. Содержание лактозы в молоке при ранней форме мастита всегда ниже нормы (в среднем 1,5%).

Массовую долю лактозы можно определить с помощью препарата ЛУМ. Он представляет собой порошкообразную смесь, в состав которой входит лимоннокислый натрий (50%), углекислый натрий безводный (25%) и сернокислая медь (25%). Перед исследованием готовят 4%-ный раствор препарата ЛУМ на дистиллированной воде. Раствор имеет синее окрашивание. В пробирки наливают по 2 мл раствора, добавляют по 2 капли исследуемого молока, перемешивают и ставят в кипящую водяную баню на две минуты. По истечении этого времени пробирки вынимают и учитывают результаты по цвету жидкости. Для сравнения цвета оставляют одну контрольную пробирку. Если цвет реактива с молоком после выдерживания в водяной бане остается синим, молоко содержит в среднем 3% лактозы, при темно-зеленом (сине-зеленом) цвете — 3,45%, при зеленом — 4,4%, а при желто-зеленом или салатном цвете — выше 5%.

Определение плотности молока проводят спустя 2 ч после дойки при температуре 20-25°С. Для этого молоко сначала перемешивают, а затем наливают в стеклянный цилиндр и при помощи ареометра, который погружают в цилиндр, определяют плотность. Нижней границей нормы принята величина 1,027 г./см 3 . При заболевании коров маститом плотность молока обычно снижается.

Опсоно-фагоцитарная реакция лейкоцитов молока (ОФР) отражает состояние организма животного, ее используют для уточнения диагноза ранней формы мастита. Для постановки реакции готовят взвесь суточной культуры, содержащую 1 млрд. сапрофитного стафилококка (подогретую до 80°С в течение 30 мин), 0,5 мл взвеси антигена смешивают с 0,5 мл исследуемого молока. Смесь инкубируют в термостате в течение 30 мин, затем делают мазки, высушивают их и окрашивают по Романовскому-Гимза 10 мин. Подсчитывают 50 лейкоцитов и количество находящихся в них бактерий. Учитывают результат по количественному показателю фагоцитоза (АФ) и качественному показателю (ИФ). АФ равен количеству участвующих в фагоцитозе лейкоцитов, деленному на число подсчитанных лейкоцитов и умноженному на 100. ИФ равен количеству поглощенных бактерий, деленному на количество лейкоцитов. Оценка показателей ОФР производится по полученным результатам: при низком уровне фагоцитоза ИФ не превышает 1,0, АФ — 52,0; при среднем ИФ — 1,0-1,5, АФ — 52,0-62,0; при высоком уровне ИФ — 1,5-2,4; АФ — 62,0-79,8.

Для диагностики маститов во многих странах мира (Япония, Голландия, Германия, Англия, Швеция) применяется приборный метод, основанный на изменении электропроводимости молока. Известно, что электропроводимость молока связана с содержанием в нем ионов натрия, калия, хлора и других химических элементов. Японская фирма «Искра» разработала систему автоматического детектирования мастита «Чекгейт». Данный детектор устанавливают перед дойкой в доильный аппарат; вторую часть системы (приборный блок со световой индикацией) помещают на видном для мастера машинного доения месте. Индикаторные лампочки загораются в случае, если имеются соответствующие изменения в составе молока; другие две лампочки сообщают об окончании выделения молока по четвертям.

Цитологические методы диагностики мастита. Методы основаны на определении количества соматических клеток в молоке. Они делятся на прямые и непрямые.

В состав соматических клеток входят лейкоциты (80-85%), эритроциты, клетки плоского, цилиндрического и кубического эпителия молочной железы, колостральные тельца (15-20%). В 1939 году Уайтсайд заметил, что при добавлении к молоку коровы, больной маститом, едкого натра, после помешивания образуется густая тягучая масса. Открытие послужило основанием к использованию поверхностно-активных веществ для косвенного определения количества соматических клеток в молоке.

Проба Тромсдорфа. Один из давно известных методов обнаружения повышенного количества соматических клеток в молоке. Сущность ее заключается в осаждении повышенного содержания лейкоцитов и других клеточных элементов при центрифугировании 10 мл молока, после чего по объему осадка судят о наличии или отсутствии заболевания.

Проба Уайтсайда основана на смешивании 4%-ного раствора едкого натра с молоком в соотношении 1:5. При наличии воспалительных процессов в вымени образуется тягучая густая масса с хлопьями.

В настоящее время широко применяются быстрые маститные тесты из поверхностно-активных веществ, которые отражают количество соматических клеток в молоке. Действующим началом являются поверхностно-активные вещества типа алкиларилсульфатов и алкиларилсульфонатов. За рубежом предложен целый ряд таких реактивов: мичиганский маститный тест, бернбург, стара загора, софия и другие.

В нашей стране используются следующие препараты: димастин, мастидин, маститодиагност, универсал. Желеобразный сгусток образуется в результате разрушения поверхностно-активными веществами ядер клеток, содержащихся в молоке. Переходящая при этом в раствор нативная дезоксирибонуклеиновая кислота придает ему вязкость. Учет результатов проб проводится по характеру образования желеобразного сгустка.

Прямой подсчет соматических клеток считается наиболее точным показателем диагностики мастита. Международная молочная федерация приняла решение считать нормальным наличие в 1 мл сборного молока до 500 тыс. соматических клеток.

Метод Прескотта и Бритта считается арбитражным в международном масштабе, он является контрольным при автоматическом подсчете соматических клеток в молоке. Он основан на свойстве ядер соматических клеток ярко окрашиваться специфическими красителями. После окрашивания (по Романовкому-Гимза) и высушивания мазок молока микроскопируют под иммерсионным объективом. В каждом мазке просматривают 100 полей зрения. Подсчитывают число клеток, умножают его на коэффициент для пересчета с учетом объектива и окуляра и определяют количество клеток в 1 мл молока.

Камерный метод заключается в подсчете соматических клеток в камере Горяева. Сначала необходимо растворить жировые шарики этиловым спиртом или формалином, синтанолом ДС-10 и покрасить пробу, затем под микроскопом подсчитывают количество соматических клеток во всей камере.

Расчет числа клеток проводят по формуле:

где Х — количество соматических клеток в 1 мл молока; 1000 — множитель, приводящий результат к объему 1 мл; 50 — разведение молока; а — сумма клеток в определенном объеме камеры; V — объем камеры.

Подсчет клеток с помощью прибора Культера. Данный прибор представляет собой электронный счетчик с капиллярной трубкой диаметром 100 мкм, подсчитывающий объем молока 0,1 или 0,5 мл (модель F, FN). Сначала проводят калибровку согласно инструкции изготовителя с применением стандартной суспензии частиц. Калибровку проводят по нескольким образцам молока, содержащего от 300 тыс. до 1 млн. клеток в 1 мл, что предварительно определяется под микроскопом. Модельный диаметр соматических клеток должен находиться между 5,45 и 6,25 мкм (рабочий режим счетчика). Реактив для подсчета соматических клеток, в состав которого входят вещества, способствующие растворению жировых шариков (синтанол ДС-10) и делающие раствор электролитичным (хлористый натрий), пропускают через стеклянный фильтр. Подсчет клеток в смеси молока с эмульгирующим электролитом проводят в пределах одного часа при температуре 15-25°С.

Во время подсчета электрод, погружающийся в трубку измерительного прибора, должен находиться ниже поверхности жидкости.

К 9,9 мл синтанола добавляют 0,1 мл фиксированного формалином молока. Образец подогревают при 80°С в течение 10 мин в водяной бане и охлаждают. После этого под трубку подводят стаканчик с 10 мл приготовленного молока. Включают прибор, предварительно поставив его на соответствующий рабочий режим. Результаты подсчета видны на табло (соматических клеток, тыс. на 1 мл молока).

Подсчет соматических клеток на приборе Фоссоматик. Метод основан на образовании флуоресцентного комплекса при взаимодействии люминесцентного красителя с ДНК ядра клетки, поэтому он является специфическим, так как подсчитываются только клетки, имеющие в своей структуре ядро. Фоссоматик — электронный прибор, предназначенный для подсчета соматических клеток в сыром и консервированном молоке.

Бактериологические методы диагностики мастита. Для бактериологического анализа молока на мастит с соблюдением правил асептики отбирают пробы из четвертей вымени, подозреваемых в заболевании. Для посева применяют обычные или элективные питательные среды. Чаще всего используется кровяной мясо-пептонный агар.

Для идентификации выросших культур изучают их свойства. Крупные выпуклые колонии, вне зависимости от наличия зоны гемолиза, ориентировочно относят к стафилококкам; мелкие росинчатые — к стрептококкам; серые и круглые колонии (блестящие и плоские) обычно указывают на рост бактерий группы кишечных палочек. Появление колоний с зеленым оттенком предполагает наличие синегнойной палочки. Слизистые гладкие или матовые колонии характерны для споровой микрофлоры, что свидетельствует о механическом загрязнении молока.

Для выделения и идентификации стрептококков применяют среды

Эдвардса, ТКТ и Карташовой. Из серологических методов идентификации микроорганизмов используется иммунофлюоресценция со специфическими сыворотками.

Для выделения из молока и идентификации стафилококков используют, главным образом, ДНК-новокаиновый агар, тесты Шермана, а БГКП — агары Эндо и Левина, а также жидкую элективную питательную среду Карташовой.

источник