Проба на мастит с мастопримом

Лабораторная диагностика мастита основана на выявлении физико-химических, биологических изменений секрета, увеличения в нем количества соматических клеток (лейкоциты, эпителиальные клетки выводных протоков) и выделении возбудителя.

Косвенно соматические клетки определяют с помощью диагностических реактивов беломастина, мастидина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества (ПАВ). ПАВ разрушают мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реакцию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молочно-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4 луночки, соответственно долям вымени коровы. Определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов проводят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы.

После каждого исследования необходимо промывать молочно-контрольные пластинки.

Проба с беломастином. Реакция основана на способности поверхностно-активного вещества образовывать гель с молоком, содержащим соматические клетки. При исследовании молока (секрета) из вымени коров, диагностикум разводят дистиллированной или кипяченой водой в соотношении 1: 3 (к 100 мл беломастина добавляют 300 мл воды). Срок использования рабочего раствора 8 месяцев.

Для проведения пробы с беломастином в луночки молочно-контрольной пластинки (МКП-1) из соответствующих долей вымени выдаивают по 1 мл испытуемого молока и добавляют 1 мл рабочего раствора диагностикума с помощью пипетки. Смесь молока с реактивом перемешивают стеклянной палочкой в течении 9-10 секунд. Результаты реакции:

• · отрицательная реакция (-) — жидкая смесь остаётся однородной;
• · сомнительная реакция (-, +) — в смеси образуются слизистые нити;
• · положительная реакция (+) — смесь приобретает консистенцию слизистой массы или желеобразного сгустка.

Для контроля результатов лечения больных маститами животных молоко исследуют на 10-14 день после введения препаратов. В сборном молоке при отрицательной реакции в 1 мл содержится до 500 тыс. соматических клеток, при сомнительной — от 500 тыс. до 1 млн; при положительной — свыше 1 млн.

Проба с 2% раствором мастидина. Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл 10% раствора, выпускаемого отечественной промышленностью, прибавляют 400 мл дистиллированной или прокипяченной воды. В луночки молочно-контрольной пластинки (ПМК-1, ПМК-2) из соответствующих долей вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл приготовленного 2% раствора мастидина с помощью пипетки-автомата или дозатора жидкости. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой луночке ПМК-1 поочередно в течение 10-15 секунд. При использовании ПМК-2 смешивание молока с реактивом проводят одновременно во всех луночках, путем ротационного вращения пластинки в горизонтальной плоскости. Реакцию учитывают по густоте желе:

• · отрицательная реакция (-) — однородная жидкость;
• · сомнительная реакция (-, +) — следы образования желе;
• · положительная реакция (+) — ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании.

На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции:

• · (-) — образуется однородная смесь;
• · (-,+) — при сомнительной реакции во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити (тяжи) без тенденции образования сгустка;
• · (+) — положительная реакция отчетливое появление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концентрирующегося при вращении пластинки в центре луночки.

Определение рН молока по цвету с 2% раствором мастидина:

• · светло-сиреневый, дымчатый — рН молока нормальная (рН = 6,5-6,8);
• · почти белый — повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);
• · темно-сиреневый — повышенная щелочность молока (рН больше 8).

Проба с 5% раствором мастидина. Раствор мастидина готовят на дистиллированной или прокипяченной теплой воде.Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Определения рН молока по цвету:

• · оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый) — нормальная реакция молока (рН = 6,5-6,8);
• · желтый — повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);
• · красный — повышенная щелочность молока (рН больше 6,8);
• · алый и малиновый — ярко выраженная щелочность молока (рН больше 7.0).

Проба с 1% раствором мастоприма. Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4 части) с едким натрием (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде.

Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Проба с димастином (по В.И. Мутовину.) Димастин включает в себя 2 реагента: поверхностно активное вещество акрилсульфонат и индикатор бромкрезол пурпур.

Проба позволяет одновременно выявлять в молоке щелочную реакцию и повышенное содержание клеток. Для этого в лунку молочно-контрольной пластинки вносят пипеткой по 1 мл исследуемого молока. Добавьте к нему из склянки 1 мл 5% раствора димастина. Стеклянной палочкой смешивают0 молоко с реагентом и сравните показания реакции. Молоко из больной четверти приобретает малиновый цвет и образует желеобразный сгусток. Молоко из здоровой доли — оранжевый цвет, а его консистенция не изменяется.

Проба Уайтсайда. Проба основана на косвенном учете повышенного содержание лейкоцитов и эпителиальных клеток. В лунку молочно-контрольной пластинки вносят глазной пипеткой 5 капель молока и добавляют 2-3 капли 4% водного раствора едкого натра. Реактивную смесь перемешивают стеклянной палочкой 20-30 сек. Молоко из больной доли вымени дает образование желеобразного сгустка.

Проба с розоловой кислотой. В лунку молочно-контрольной пластинки вносят 10 мл молока и добавить 1 мл 0,1% раствора розоловой кислоты на 65% спирте. В норме содержимое приобретает светло-розовую окраску. При патологии окраска содержимого имеет цвет от светлого до темно-красного.

Проба с мастит-диагностом. В состав мастит-диагноста входит: вода 100 мл, сульфанол-30, тринолинфосфат-5г, бромтимоловый синий — 0,02г, 1% раствор розоловой кислоты-0,5 мл.

В лунки молочно-контрольной пластинки вносят 1 мл молока и 1 мл реактива и смешивают. Гомогенная смесь — молоко от здоровых коров; наличие плотного желеобразного сгустка, тягучей массы или редко слизи — положительная реакция на скрытый мастит.

Бромтимоловая проба по Эрасту. Реактив: 0,1 г бромтимолблау + 100 мл 960 спирта. Берут 5 мл молока и добавляют 1 мл реактива, встряхивают в пробирке. При норме цвет желтоватый, желтый, желто-салатовый, желто-зеленый. Патология — светло-зеленый, зеленый, ярко-зеленый, сине-зеленый и синий цвет

Бромтимоловая проба по Логвинову. Реактив: 0,1 г бромтимолового индикатора + 20 мл 960 спирта + 80 мл дистиллированной воды. Берем 1 мл молока и 1 мл бромтимоловой пробы в луночки прибора для определения качества молока. Если появляется синяя окраска смеси, то реакция положительная. Если желтоватый цвет или без изменений, то реакция отрицательная.

Проба с бензидином. Используется для выявления в молоке пигментов крови. В пробирку наливают 5 мл 3% -ного раствора перекиси водорода и 2 мл насыщенного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте. После тщательного взбалтывания в смесь прибавляют 2-10 капель молока. Положительная реакция — смесь окрашивается сначала в зеленый, а через минуту в темно-синий цвет; отрицательная — смесь светлая с беловатым хлопьевидным осадком.

Проба отстаивания. Молоко из каждой четверти вымени положительно реагирующее, проверяют пробой отстаивания. При положительной пробе, корова считается больной маститом. В конце доения из каждой доли в пробирку берут 10-15 мл молока и ставят на 16-18 часов в холодное место (в холодильник, при температуре от +4 до 100С), чтобы молоко не прокисло. Реакцию читают на второй день у источника света. Исследуют: цвет молока, наличие осадка, толщину и характер слоя сливок. Молоко от здоровой коровы белого или слегка синеватого цвета, осадок не образуется. Молоко от больной коровы — водянистое, консистенция сливок изменена (тягучие, слизистые, хлопьевидные). Главный признак — наличие осадка высотой 1 мм и более. Слой сливок толщиной более 1,5 см — нет мастита, слой менее 5 мм — есть мастит.

Коров с отрицательным результатом при постановке пробы отстаивания проверяют повторно при помощи вышеуказанных диагностических тестов не позднее чем через 6 дней после первой проверки.

источник

а) общее клиническое обследование животного с проведением пробного сдаивания и внешнего осмотра секрета молочной железы;

б) лабораторное исследование секрета молочной железы с помощью быстрых диагностических тестов и пробы отстаивания;

в) бактериологическое исследование секрета молочной железы, с определением чувствительности выделенной микрофлоры к антибиотикам.

Диагностика маститов у коров в период лактации

Диагностика клинически выраженных маститов

Базируется на характерных изменениях внешнего вида молочной железы и ее секрета.

Клинические методы основаны на сборе анамнеза и исследовании молочной железы. Анамнез не является определяющим, однако, он должен быть подробным и позволяющим выяснить условия, способствующие возникновению заболевания, а часто и непосредственно его причину.

Исследование включает три диагностических приема: осмотр, пальпацию и пробное доение.

При осмотре животного нельзя использовать любые фиксирующие приспособления. Осматривают вымя сзади и с боков, обращая внимание на величину, форму и расположение каждой четверти вымени, в том числе сосков, сравнивая их между собой. При патологических процессах симметричность и конфигурация четвертей вымени изменяется. В зависимости от локализации и характера воспалительного процесса вымя становится выпяченным с любой поверхности (передней, задней, боковой) или на её отдельных участках. Так, увеличение поражённой четверти (поражённых четвертей) происходит при остро протекающем мастите и при отёке. В отличии от мастита при отёке кожа молочной железы холодная, а после надавливания на неё пальцем остаётся долго не выравнивающая впадина. При хроническом гнойно-катаральном мастите, наоборот, может наблюдаться уменьшение в объёме поражённой четверти. Ограниченную припухлость констатируют при поражении одной четверти вымени, а диффузную — двух-трёх или всех четырёх четвертей.

Осматривая кожу вымени, устанавливают изменения ее цвета и различные повреждения. При остро протекающем абсцессе кожа приобретает очаговое покраснение. Красные или багровые пятна с тёмно-красной кожей сосков появляются при геморрагическом мастите. Развитые флегмоны характеризуются полосчатой гиперемией. При гангрене обнаруживают вначале красные, затем сине-багровые и зелёные пятна. Покраснение поражённых четвертей вымени наблюдается при серозном, фибринозном, гнойно-катаральном маститах, множественных абсцессах. Разлитое покраснение всего вымени наблюдают при его послеродовой гиперемии.

Путём пальпации вымени устанавливают его консистенцию, плотность, местную температуру, болезненность, очаговые уплотнения, бугристость, флюктуацию, толщину кожи и его отёчность, подвижность и образование складок. С помощью пальпации исследуют также надвымянные лимфатические узлы.

Осуществляют пальпацию молочной железы дважды в строгой последовательности, как до доения, так и после него. В последнем случае пальпация бывает более глубокой.

Сначала пальпируют наружные поверхности, затем внутренние правой передней четверти вымени и только после этого — левой передней четверти, сравнивая полученные результаты. Таким же образом поступают и в отношении задних четвертей.

У здорового животного кожа вымени нежная, эластичная, гладкая, с ровной поверхностью, подвижная. Хорошо оттягивается пальцами в складку, а при опускании её складка быстро расправляется.

Повышение местной температуры до 37-40°С наблюдается при мастите, флегмоне, абсцессах. Понижение — при серозном отёке и гангрене.

Болезненность зависит от тяжести воспалительного процесса и наблюдается при всех патологиях молочной железы, кроме гангрены.

Напряжение кожи отмечают при мастите, отёке, флегмоне, множественных абсцессах. Флюктуацию обнаруживают при абсцессах.

Консистенция вымени может быть плотной (любая форма мастита, гиперемия); тестоватой (отёк); деревянистой (флегмона, иногда при серозном и фибринозном маститах).

Очаговые уплотнения тканей присущи всем формам мастита, абсцессу, флегмоне. При катаральном мастите над соском можно найти глыбы створоженного молока.

Крепитация фибрина ощущается при фибринозном мастите или 2 — 3-дневной гематоме, а пузырьки газа свидетельствуют о развитии анаэробных микроорганизмов при гангрене.

При пальпации соска его сначала двумя пальцами у основания и скользящими движениями вытягивают вниз, наблюдают за выходом молока через сосковый канал и за наличием (отсутствием) болевой реакции. Затем, сжимая сосок указательным и большим пальцами, стремятся сместить противоположные стенки соска сверху вниз, выявляя поперечные уплотнения слизистой оболочки сосковой цистерны. После чего, сжимая сосок и смещая противоположные стенки спереди назад, определяют продольно расположенные утолщения. Раскатыванием соска между пальцами устанавливают морфологические изменения в стенке цистерны. Пальпацией верхушки соска (лёгким сжатием и движением пальцев спереди назад) регистрируют утолщения в стенке соскового канала и его просвете. Тестоватая консистенция соска наблюдается при катаральном мастите. Крепитация у основания соска проявляется при фибринозном мастите.

Надвымянные лимфатические узлы пальпируют поочередно следующим образом. Кожу, находящуюся ниже узла, собирают в складку, сдвигают несколько кверху и, захватив верхний участок задней четверти вымени, прощупывают её, а над ней — лимфатический узел соответствующей стороны. В норме надвымянные лимфатические узлы имеют размер голубиного яйца, упругой консистенции, подвижны безболезненны. При остро протекающем мастите они увеличены, уплотнены, малоподвижны. При хроническом мастите надвымянные лимфатические узлы обычно твёрдые, малоподвижные, безболезненные.

Пробное доение осуществляют вручную, без применения машинного аппарата. Устанавливают степень нарушения функции молочной железы. При этом определяют визуально количество молока (секрета), полученного из каждой четверти вымени отдельно, и его качество: цвет, консистенцию, запах, наличие сгустков, хлопьев, примеси крови.

При диагностических исследованиях устанавливают, что серозный мастит характеризуется обильным выпотом серозного экссудата в подкожную клетчатку и междольковую соединительную ткань и в меньшей степени в межальвеолярную. Этот процесс сопровождается болезненностью, гиперемией и повышением местной, а иногда и общей температуры. Отмечается легкое угнетение животного, снижение удоя до 50-60%, но внешне заметных качественных изменений молока в начале заболевания не наблюдается, затем оно становится водянистым с мелкими хлопьями казеина. Пораженная четверть (половина) вымени увеличена, тестоватой или уплотненной консистенции, болезненная, местная температура повышена, кожа гиперемирована, отечна, напряжена, сосок чаще увеличен, отечен. Лимфатический узел со стороны пораженной четверти иногда увеличен. Серозный мастит обычно заканчивается через 5-7 суток полным клиническим выздоровлением животного.

Катаральный мастит протекает преимущественно с поражением эпителия слизистых оболочек молочной цистерны и молочных ходов или железистого эпителия альвеол. Характерным признаком является водянистый от синевато-серого до кремово-белого цвета секрет, содержащий сгустки и хлопья казеина серо-белого цвета, выделяющегося только в начале доения, если воспалительный процесс локализован только в цистерне, или в течение всего доения, если имеется катаральное воспаление альвеол. Общее состояние животного при катаре цистерны остается чаще всего без изменений. В случае катара альвеол у коровы возникает резкое снижение аппетита, наблюдается повышение температуры тела до 40-41°С, учащается пульс и дыхание.

При катаральном воспалении цистерны и молочных ходов пораженная четверть вымени незначительно увеличена в объеме, ее сосок отечный, тестоватый, гиперемированный. Болезненность слабо выражена. Канал соска сужен, что приводит к затруднению проходимости секрета. При пальпации в нижней трети пораженной четверти и у основания соска обнаруживаются уплотненные, упругие, флюктуирующие и крепитирующие участки величиной в среднем с грецкий орех.

При катаре альвеол отдельные участки пораженной четверти или вся четверть вымени увеличены, местная температура незначительно повышена, при пальпации, кроме вышеотмеченных изменений, можно обнаружить очаги уплотнения паренхимы.

Фибринозный мастит характеризуется обильным выходом из кровеносных сосудов жидкости, содержащей фибриноген, который вне сосудов свертывается, что приводит к быстрому нарушению функции молочной железы. При этом животное угнетено, аппетит снижен или отсутствует, зачастую нет жвачки, общая температура 40-41°С, пульс и дыхание учащаются, может быть расстройство органов пищеварения. При движении заметна хромота на обе или одну конечность, прилегающую к пораженной четверти. Пораженная четверть вымени увеличена, плотная (каменистой консистенции), горячая, покрасневшая и болезненная. Соски отечные, покрасневшие, болезненные. Корова не дает дотрагиваться до вымени, при пальпации в тканях и на слизистой соска ощущается крепитация фибрина.

Надвымянные лимфатические узлы увеличены, горячие и болезненные. Молочная продуктивность снижается, а из пораженной четверти молоко вообще не выделяется. С трудом из них можно выдоить немного неоднородной, мутной, клейкой жидкости, тягучей консистенции, содержащей крошки, нити и пленки фибрина. От сгустков казеина они отличаются желтоватым или янтарным цветом и большей прочностью.

При гнойно-катаральном мастите животное угнетено, температура повышается до 40,0-40,5°С, пульс и дыхание учащается, аппетит резко понижается, секреция молока уменьшается. Пораженная четверть вымени увеличена, отечна, болезненна, кожа ее неравномерно покрасневшая и напряжена. После сдаивания она почти не уменьшается в объеме. Сосок отечный, покрасневший и слегка болезненный, проходимость его затруднена. Секрет тягучий, слизистый, содержит сгустки казеина и гноя желто-зеленого или желто-розового цвета. При пальпации в цистерне и у основания соска можно обнаружить уплотненные и флюктуирующие участки. Надвымянный лимфатический узел, находящийся со стороны пораженной четверти, увеличен, часто болезненный, малоподвижный.

При абсцессе вымени наблюдается угнетение, уменьшение аппетита, периодическое повышение температуры при множественных абсцессах, ремитирующая лихорадка. Удой снижается вплоть до полного прекращения секреции молока. При одиночных абсцессах молоко внешне не изменено, при множественных — водянистое, с примесью слизи и гноя. В зависимости от величины абсцесса увеличение четверти умеренное, или значительное при множественных абсцессах. Над поверхностными абсцессами кожа гиперемирована, отечна, напряжена. Уплотнение тканей диффузное или очаговое, часто отмечается флюктуация. Болезненность сильная. Местная температура повышена. Лимфатический узел с пораженной стороны вымени увеличен.

Флегмона вымени характеризуется сильным угнетением, уменьшением или отсутствием аппетита, повышением температуры, хромотой. Удой резко снижается, молоко вначале водянистое, затем мутное, серого цвета, с примесью хлопьев. Вымя увеличено в размере, кожа напряжена с разлитой или полосчатой гиперемией. Резкое уплотнение тканей и сильная болезненность. Местная температура повышена. Лимфатический узел с пораженной стороны увеличен.

Геморрагический мастит характеризуется угнетением, отсутствием аппетита, повышением температуры до 41°С, пульс частый, слабый, малого наполнения. Может появиться диарея и гемолитическая желтуха. Надвымянные лимфатические узлы увеличены и болезненны. Удой резко снижается, молоко водянистое, красноватое или красное, с хлопьями. Пораженная четверть (половина) вымени значительно увеличена, кожа отечная, с красными или багровыми пятнами, ткани уплотнены, болезненны, местная температура повышена.

Ящурный мастит характеризуется афтозным поражением кожи вымени и сосков. На месте афт образуются язвочки, что может привести к любой форме мастита.

Актиномикозный мастит характеризуется появлением бугорков, в центре которых развиваются абсцессы, а вокруг них образуется толстостенная соединительно-тканная капсула.

Туберкулезный мастит характеризуется появлением в тканях молочной железы постепенно увеличивающихся, безболезненных, плохо ограниченных уплотнений, содержащих густой желтовато-оранжевого цвета гной. Повышение местной температуры не наблюдается. Надвымянные лимфатические узлы увеличены, уплотнены, болезненные. Молоко сначала нормальное, затем с примесью сукровицы и творожистой массы, водянистое с зеленоватым оттенком, содержит хлопья, комочки тканей.

К травматическим повреждениям кожи сосков вымени относят: трещины, раны, ссадины, царапины, свищи, разрывы сосков. Наиболее часто у коров регистрируются трещины и раны кожи сосков вымени.

Трещины кожи сосков представляют собой раны и язвочки в виде продольных и поперечных повреждений поверхностных слоёв кожи, длиной 1-10 мм. На месте трещин кожи сосков образуются корочки, а под ними нередко скапливается гной. Если корочки разрушаются, трещины начинают кровоточить.

Раны сосков бывают чаще всего или колотыми поверхностными, или проникающими. Отличительные клинические признаки имеют лишь проникающие раны. При этом через раневой канал выделяется молоко. Такие раны медленно заживают и часто заканчиваются формированием молочных свищей.

При доении коров с трещинами или ранами сосков возникает болезненность, что сопровождается неполным выдаиванием и предрасполагает к возникновению мастита, а раны могут осложняться заращением сосковой цистерны и сокового канала.

Дифференциальная диагностика клинически выраженных маститов

Диагностика субклинических маститов

Скрыто протекающий мастит диагностируют путем исследования молока одним из быстрых диагностических тестов с последующим подтверждением диагноза пробой отстаивания и бактериологически.

Лактирующих коров в хозяйстве обследуют на скрыто протекающий мастит один раз в месяц. Исследуют порции молока после доения.

Лабораторные методы основаны на прямых и косвенных методах подсчёта соматических клеток.

К прямому методу относят подсчет на стекле по Прэскотту-Бриду, который является и контрольным при автоматическом подсчёте соматических клеток в молоке.

При этом чистое предметное стекло кладут на лист бумаги расчерченный на квадраты со стороной 1 см. Пробу молока тщательно перемешивают и с помощью микропипетки наносят на 3-4 квадрата предметного стекла по 0,01 см 3 . Нанесенную каплю молока равномерно распределяют по площади квадрата стеклянной палочкой или препаровальной иглой. Мазок высушивают на воздухе, фиксируют и одновременно обезжиривают нанесением сначала метилового спирта на 10-15 мин, а затем спирт-эфирной смеси до высыхания. Окрашивают мазок рабочим раствором краски Романовского-Гимза (3-4 мл продажного раствора на 100 мл дистиллированной воды) методом подслаивания или при вертикальном положении стекла в течение 20-30 мин. После окрашивания мазок промывают водой и высушивают при комнатной температуре. Подсчет соматических клеток ведут под микроскопом с иммерсионным объективом. В каждом мазке просматривают 100 полей зрения. Подсчитанное число клеток умножают на коэффициент с учетом значений объектива и окуляра и определяют их количество в 1 см 3 молока. Для выведения коэффициента с помощью объект-метра определяют диаметр поля зрения микроскопа и вычисляют площадь одного поля зрения по формуле яR 2 . Затем вычисляют, сколько полей зрения микроскопа размещаются на площади 1 см 2 . Полученный результат переводят на объем.

определение коэффициента пересчета при окуляре 7 и объективе 90. В поле зрения размещается 17 делений объект-метра. Величина одного деления — 0,01 мм. Диаметр поля зрения — 0,01 мм х 17 = 0.17 мм, радиус — 0,085 мм. площадь одного поля зрения — 3,14 х 0,085 2 = 0,023 мм 2 или 0,00023 см 2 . Площадь полей зрения будет равна 0,00023 см 2 х 100 = 0,023 см 2 . На площади 1 см 2 таких участков будет: 1: 0,023 = 43,48. Взятый объем молока 0,01 см 3 в 100 раз меньше 1см 3 . Коэффициент в данном случае будет равен 4348 (43,48×100).

За окончательный результат принимают среднее арифметическое двух параллельных определений.

К прямым методам подсчета соматических клеток относят камерные методы по Н. М. Хилькевичу, И. И. Архангельскому и др. в модификации В. И. Слободяника, подсчет с помощью электронного прибора «Фоссоматик». электронных счетчиков частиц: целлоскоп, «Культер-Каунтер», пикоскель, гемоцитометр кондуктометрический марки ГЦМК-3 и др.

Косвенно соматические клетки определяют с помощью диагностических реактивов беломастина, мастидина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества (ПАВ). ПАВ разрушают мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реакцию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молочно-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4 луночки, соответственно долям вымени коровы. Определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов проводят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы.

После каждого исследования необходимо промывать молочно-контрольные пластинки.

Реакция основана на способности поверхностно-активного вещества образовывать гель с молоком, содержащим соматические клетки. При исследовании молока (секрета) из вымени коров, диагностикум разводят дистиллированной или кипяченой водой в соотношении 1: 3 (к 100 мл беломастина добавляют 300 мл воды). Срок использования рабочего раствора 8 месяцев.

Для проведения пробы с беломастином в луночки молочно-контрольной пластинки (МКП-1) из соответствующих долей вымени выдаивают по 1 мл испытуемого молока и добавляют 1 мл рабочего раствора диагностикума с помощью пипетки. Смесь молока с реактивом перемешивают стеклянной палочкой в течении 9-10 секунд. Результаты реакции:

— отрицательная реакция (-) — жидкая смесь остаётся однородной;

— сомнительная реакция (-, +) — в смеси образуются слизистые нити;

— положительная реакция (+) — смесь приобретает консистенцию слизистой массы или желеобразного сгустка.

Для контроля результатов лечения больных маститами животных молоко исследуют на 10-14 день после введения препаратов.

В сборном молоке при отрицательной реакции в 1 мл содержится до 500 тыс. соматических клеток, при сомнительной — от 500 тыс. до 1 млн; при положительной — свыше 1 млн.

Проба с 2% раствором мастидина.

Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл 10% раствора, выпускаемого отечественной промышленностью, прибавляют 400 мл дистиллированной или прокипяченной воды. В луночки молочно-контрольной пластинки (ПМК-1, ПМК-2) из соответствующих долей вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл приготовленного 2% раствора мастидина с помощью пипетки-автомата или дозатора жидкости. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой луночке ПМК-1 поочередно в течение 10-15 секунд. При использовании ПМК-2 смешивание молока с реактивом проводят одновременно во всех луночках, путем ротационного вращения пластинки в горизонтальной плоскости. Реакцию учитывают по густоте желе:

отрицательная реакция (-) — однородная жидкость;

сомнительная реакция (-, +) — следы образования желе;

положительная реакция (+) — ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании.

На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции:

— (-) — образуется однородная смесь;

— (-,+) — при сомнительной реакции во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити (тяжи) без тенденции образования сгустка;

— (+) — положительная реакция отчетливое появление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концентрирующегося при вращении пластинки в центре луночки.

Определение рН молока по цвету с 2% раствором мастидина:

— светло-сиреневый, дымчатый — рН молока нормальная (рН = 6,5-6,8);

— почти белый — повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);

— темно-сиреневый — повышенная щелочность молока (рН больше 8).

Проба с 5% раствором мастидина. Раствор мастидина готовят на дистиллированной или прокипяченной теплой воде.

Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Определения рН молока по цвету:

— оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый) — нормальная реакция молока (рН = 6,5-6,8);

— желтый — повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);

— красный — повышенная щелочность молока (рН больше 6,8);

— алый и малиновый — ярко выраженная щелочность молока (рН больше 7.0).

Проба с 1% раствором мастоприма.

Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4 части) с едким натрием (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде.

Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Проба с димастином (по В. И. Мутовину.)

Димастин включает в себя 2 реагента: поверхностно активное вещество акрилсульфонат и индикатор бромкрезол пурпур.

Проба позволяет одновременно выявлять в молоке щелочную реакцию и повышенное содержание клеток. Для этого в лунку молочно-контрольной пластинки вносят пипеткой по 1 мл исследуемого молока. Добавьте к нему из склянки 1 мл 5% раствора димастина. Стеклянной палочкой смешивают0 молоко с реагентом и сравните показания реакции. Молоко из больной четверти приобретает малиновый цвет и образует желеобразный сгусток. Молоко из здоровой доли — оранжевый цвет, а его консистенция не изменяется.

Проба основана на косвенном учете повышенного содержание лейкоцитов и эпителиальных клеток. В лунку молочно-контрольной пластинки вносят глазной пипеткой 5 капель молока и добавляют 2-3 капли 4% водного раствора едкого натра. Реактивную смесь перемешивают стеклянной палочкой 20-30 сек. Молоко из больной доли вымени дает образование желеобразного сгустка.

Проба с розоловой кислотой.

В лунку молочно-контрольной пластинки вносят 10 мл молока и добавить 1 мл 0,1% раствора розоловой кислоты на 65% спирте. В норме содержимое приобретает светло-розовую окраску. При патологии окраска содержимого имеет цвет от светлого до темно-красного.

В состав мастит-диагноста входит: вода 100 мл, сульфанол-30, тринолинфосфат-5г, бромтимоловый синий — 0,02г, 1% раствор розоловой кислоты-0,5 мл.

В лунки молочно-контрольной пластинки вносят 1 мл молока и 1 мл реактива и смешивают. Гомогенная смесь — молоко от здоровых коров; наличие плотного желеобразного сгустка, тягучей массы или редко слизи — положительная реакция на скрытый мастит.

Бромтимоловая проба по Эрасту.

Реактив: 0,1 г бромтимолблау + 100 мл 96 0 спирта. Берут 5 мл молока и добавляют 1 мл реактива, встряхивают в пробирке. При норме цвет желтоватый, желтый, желто-салатовый, желто-зеленый. Патология — светло-зеленый, зеленый, ярко-зеленый, сине-зеленый и синий цвет

Бромтимоловая проба по Логвинову.

Реактив: 0,1 г бромтимолового индикатора + 20 мл 96 0 спирта + 80 мл дистиллированной воды. Берем 1 мл молока и 1 мл бромтимоловой пробы в луночки прибора для определения качества молока. Если появляется синяя окраска смеси, то реакция положительная. Если желтоватый цвет или без изменений, то реакция отрицательная.

Используется для выявления в молоке пигментов крови. В пробирку наливают 5 мл 3% -ного раствора перекиси водорода и 2 мл насыщенного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте. После тщательного взбалтывания в смесь прибавляют 2-10 капель молока. Положительная реакция — смесь окрашивается сначала в зеленый, а через минуту в темно-синий цвет; отрицательная — смесь светлая с беловатым хлопьевидным осадком.

Диагностика маститов по молоку из каждой четверти вымени

Для проведения исследования отбирают пробы молока от каждой четверти вымени коров, которые дали положительный результат по молоку из удоя и исследуют с 2% -ным раствором мастидина.

Если молоко из любой четверти вымени дает положительный результат, то животное считается подозрительной на субклинический мастит. Для подтверждения диагноза на скрытый мастит необходимо провести пробу отстаивания.

Молоко из каждой четверти вымени положительно реагирующее, проверяют пробой отстаивания. При положительной пробе, корова считается больной маститом. В конце доения из каждой доли в пробирку берут 10-15 мл молока и ставят на 16-18 часов в холодное место (в холодильник, при температуре от +4 до 10°С), чтобы молоко не прокисло. Реакцию читают на второй день у источника света. Исследуют: цвет молока, наличие осадка, толщину и характер слоя сливок. Молоко от здоровой коровы белого или слегка синеватого цвета, осадок не образуется. Молоко от больной коровы — водянистое, консистенция сливок изменена (тягучие, слизистые, хлопьевидные). Главный признак — наличие осадка высотой 1 мм и более. Слой сливок толщиной более 1,5 см — нет мастита, слой менее 5 мм — есть мастит.

Коров с отрицательным результатом при постановке пробы отстаивания проверяют повторно при помощи вышеуказанных диагностических тестов не позднее чем через 6 дней после первой проверки.

Бактериологическое исследования молока

Секрет вымени коров, давших положительную реакцию с одним из быстрых маститных тестов, дополнительно исследуют бактериологически для выделения патогенной микрофлоры.

Для таких исследований отбирают пробы молока из четвертей вымени, реагирующих на быстрый маститный тест и дающих положительную пробу отстаивания. Исследуемое молоко отбирают в стерильные пробирки в количестве 10-15мл. Полученный материал в количестве 0,2 мл наносят на поверхность твердых питательных сред: Эндо, Левина, ЖСА (желточно-солевом агаре), Сабуро, 5 % -ый кровяной агар; а также в жидкие питательные среды накопления: селенитовый бульон и сахарный бульон. Посев на поверхность твердых питательных сред проводят шпателем. Посевы на средах Эндо, Левина, 5 % -го кровяного агара, а также жидкие питательные среды накопления инкубируют в термостате при температуре 37°С в течении 24 часов; посевы на ЖСА инкубируют в термостате при температуре 37°С в течении 48 часов; посевы на среде Сабуро инкубируют в термостате при температуре 22°С в течении 5 суток. Ежедневно все среды просматривают. Через 24 часа со сред накопления проводят пересев исследуемого материала, с помощью петли, на плотные питательные среды: с селенитового бульона — на среду Плоскирева и Висмут-сульфит-агар; с сахарного бульона — на 5% -ый кровяной агар, ЖСА, среду Эндо.

Подозрительные (лактозонегативные) колонии (КОЕ — колонии образующие единицы) со сред Эндо, Левина, Плоскирева отсевают на дифференциально-диагностический скошенный агар Клиглера. Подсчитывают число выросших колоний (КОЕ) на плотных питательных средах. На ЖСА через 48 часов учитывают рост белых, кремовых, палевых, золотистых колоний (КОЕ), обладающих лецитиназной активностью и без нее. Отсевают на скошенный МПА, ставят пробы на плазмокоагуляцию и ферментацию маннита и пробу на окисление глицерина. С косяков агара Клиглера и МПА делают мазки с окраской по Граму и наблюдают: в одних случаях — грамотрицательные палочки средних размеров с закругленными концами, располагающиеся беспорядочно; в других случаях — грамположительные кокки мелких и средних размеров, располагающиеся гроздьями, поодиночке, попарно. В итоге определяют вид стафилококков. На 5% -ом кровяном агаре учитывают рост мелких колоний (КОЕ): белесых, бесцветных, сероватых, дающих зону альфа и бетта гемолиза и без нее. Отсевают на сектора 5% -го кровяного агара и изучают морфологию с окраской по Граму. В случае обнаружения грамположительных кокков мелких и средних размеров, располагающихся поодиночке, попарно, цепочками, беспорядочно, отсевают на МПА, обезжиренное молоко с метиленовым синим, желчный бульон, ЭДДС-агар. По изменению или наличию роста на данных средах определяют род и вид некоторых стрептококков.

Со среды Клиглера ставят пестрый биохимический ряд Гисса, изменение сред которого позволяет определить вид энтеробактерий.

ВСА (висмут — сульфит — агар) инкубируют в термостате при температуре 37 0 С в течении 48 часов, затем просматривают с целью обнаружения черных, сероватых, блестящих, округлых, маслянистых колоний (КОЕ), дающих вокруг себя зону с металлическим (ртутным) блеском среды. Подозрительные колонии отсевают на среду Клиглера. Ставят пестрый биохимический ряд Гисса. На среде Сабуро отбирают белые, крупные, плотные, сметанообразные колонии, с характерным кисловато-дрожжевым запахом. Данные колонии отсевают на МПА, окрашивают мазки по Граму. В случае обнаружения грамположительных крупных овальных клеток, располагающихся беспорядочно, либо почкуясь в виде веток, ставят пестрый биохимический ряд Гисса и посев на картофельный агар для определения филоментации и выделения вида грибов рода Candida.

Чувствительность выделенных микроорганизмов к антибиотикам определяют методом диффузии (метод дисков).

В стерильные чашки Петри наливают по 20 мл расплавленной агаравой среды. На поверхность застывшей среды наносят 1мл бактериальной взвеси испытуемой культуры. Покачиванием чашки жидкость равномерно распределяют по всей поверхности среды, избыток жидкости отсасывают. Среду можно засевать непосредственно молоком, и растирать равномерно по всей поверхности шпателем. Среду подсушивают в течении 30 минут при t=37°С. На поверхность засеянной среды накладывают диски с антибиотиками (не класть два сцепленных между собой диска). Диски раскладывают на равном расстоянии один от другого и на 2 см от края чашки. В каждой чашке можно проверить действие 4-5 антибиотиков. Чашки с дисками выдерживают при комнатной температуре и затем в течении 16-18 часов при t=37°С. чашки рекомендуется ставить в термостат в перевёрнутом виде или вкладывать под крышку чашки кружок фильтровальной бумаги. При оценке результатов с помощью линейки или измерителя и миллиметровой бумаги определяют диаметр зон задержки роста микробов вокруг бумажных дисков (включая и диаметр самого бумажного диска).

Хранить готовые диски следует при комнатной температуре. Концентрации антибиотиков подбирают таким образом, чтобы диаметр зон задержки роста чувствительных тест-микробов равнялся для всех антибиотиков 28-32 мм.

Таблица 3. Чувствительность антибиотиков к выделенным с молоком микроорганизмам

Особенности диагностики маститов в период запуска и сухостоя

Диагностика мастита в период запуска и сухостоя затруднена, так как он чаще всего протекает со стертыми клиническими признаками.

Всех коров при переводе на сухостойное содержание в последний день запуска подвергают клиническому обследованию на мастит. Если при этом клинические признаки мастита отсутствуют, то исследуют секрет вымени с помощью 2% раствора мастидина.

В сухостойный период коров обследуют на мастит дважды. Первое исследование проводят через 2-3 недели после запуска, второе — за 10-15 дней до отела. При этом, кроме клинического исследования вымени, проводят пробное сдаивание секрета молочной железы. У здоровых животных в первые 20-30 дней сухостойного периода секрета много, он жидкий, серовато-белого цвета, без хлопьев. Во второй половине сухостойного периода секрета мало (3-5 мл), он вязкий, тягучий, клейкий (медообразный), жёлто-коричневого цвета (редко бывает серо-белым), иногда секрет выдоить не удается.

При воспалении молочной железы секрета много, он жидкий, с хлопьями или примесью гноя (экссудат).

Диагностика маститов у коров в послеродовой период

Сразу после отела из каждой четверти вымени коров надаивают в пробирки 5-7 мл молозива. В положительных случаях через 3-4 часа столбик молозива расслаивается и имеет отличительную окраску от молозива коров из непораженных четвертей.

Скрыто протекающий мастит выявляют быстрым маститным тестом с помощью 2% -го раствора мастидина.

Исследования можно проводить сразу после отела. Но при этом необходимо учитывать, что в первые дни после отела количество клеток (и лейкоцитов) в молоке увеличивается, и пробы молозива из всех четвертей вымени могут давать положительные результаты. В этом случае аналогичные дигностические исследования необходимо провести на 7-8 день после отела. Оценку результатов этих исследований проводят как диагностику маститов в период лактации.

источник

Косвенно соматические клетки определяют с помощью диагности­ческих реактивов мастидина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества (ПАВ). ПАВ разруша­ют мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реакцию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молочно-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4 луночки, соответственно долям вымени коровы, определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов проводят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы для диагностики субклинического мастита и пробах сборного молока для определения в нем примеси анормального.

Для диагностики мастита по молоку из каждой доли вымени используют диагностические реактивы малой концентрации: мастидин 2%, димастин 5%, мастоприм I%, в пробе Уайт-Сайда 4% раствор едкого натра.

Для диагностики мастита у коров по молоку разового или суточного удоя используют 10% раствор димастидина и 20% димастина, а для определения примеси анормального молока в сборном — 2,5% раствор мастоприма и маститодиагност (реактив Загаевского).

Наличие в составе мастидина, кроме ПАВ, индикатора бромкрезолпурина, а в димастине фенолового красного, позволяет судить по изменению цвета смеси о величине рН исследуемого молока.

При использовании этих реактивов для диагностики субклини­ческого мастита основным диагностическим признаком является обра­зование желеобразного сгустка, а изменение цвета смеси – ориентирующим.

Проба с 2% раствором мастидина. Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл 10% раствора, выпускаемого отечественной промышленностью, прибавляют 400 мл дистиллированной или прокипяченной воды.

В луночки молочно-контрольной пластинки (ПМК-1, ПМК-2) из соответствующих долей вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл приготовленного 2% раствора мастидина с помощью пипетки-ав­томата или дозатора жидкости. Смесь молока с реактивом перемеши­вают палочкой в каждой луночке ПМК-1 поочередно в течение 10-15 с. При использовании ПМК-2 смешивание молока с реактивом проводят одновременно во всех луночках, путем ротационного вращения плас­тинки в горизонтальной плоскости.

Реакцию учитывают по густоте желе:

отрицательная реакция (-) — однородная жидкость:

сомнительная реакция (±) — следы образования желе;

положительная реакция (+) — ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании.

На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции (-) образуется однородная смесь. При сомнительной реакции (±) во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити (тяжи) без тенденции образования сгустка. Положительная реакция (+) — отчетливое появ­ление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концент­рирующегося при вращении пластинки в центре луночки.

Определение рН молока по цвету:

светло-сиреневый, дымчатый — рН молока нормальная (6,5-6,8);

почти белый — повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);

темно-сиреневый — повышенная щелочность молока (рН больше 8).

Проба с 5% раствором димастина. Раствор димастина готовят на дистиллированной или прокипяченной теплой воде.

Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Определения рН молока по цвету:

оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый) – нормальная реакция молока ( рН 6,5-6,8);

желтый — повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);

красный — повышенная щелочность молока (рН больше 6,8);

алый и малиновый — ярко выраженная щелочность молока (рН больше 7,0).

Проба с I% раствором мастоприма. Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4 части) с едким натром (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде. Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводяткакпри исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Проба с 10% раствором мастидина.Диагностику мастита у коров по молоку разового или суточного удоя проводят при контрольных дойках и взятии проб для определе­ния жира и других показателей молока. Молоко в количестве 1 мл берут из молокомера или суточной пробы и выливают в луночку молочно-контрольной пластинки. Затем добавляют 1 мл 10 % раствора мастидина.

Техника постановки пробы на пластинках ПМК-1 и ПМК-2 и учет реакции по образованию желе и цвету проводят как указано раньше.

Для определения пораженной доли вымени от животных, давших положительную и сомнительную реакцию с 10% раствором мастидина, отбирают пробы молока из каждой четверти и исследуют с 2% раство­ром мастидина, или 5% раствором димастина, или 1% раствором мастоприма, или пробой Уайтсайда.

Проба с 20% растворам димастина. Постановку пробы и учет реакции проводят как с 5% раствором.

Соответствие количества соматических клеток (млн./мл), подс­читанных по методу Прэскотта-Брида, показаниям реакции молока из долей вымени коров с 2% раствором мастидина и 5% раствором димас­тина по данным А.И.Ивашуры, представлены в таблице:

Соответствие количества соматических клеток показаниям реакции молока

Проба с 2,5% раствором мастоприма.Примесь анормального молока в сборном определяют на молокоперерабатывающих предприятиях.

В луночки молочно-контрольной пластинки ПМК-1 вносят 1млтщательно перемешанного молока и добавляют к нему 1 мл 2,5% раст­вора мастоприма. Молоко с реактивом перемешивают в течение 10 -15 с и учитывают реакцию.

На пластинке ПМК-1 при отрицательной реакции жидкость одно­родная, желе не образуется. Такое молоко не имеет примеси анор­мального молока или примесь незначительная (2-З%).

Положительная реакция — образуется желеобразный сгусток, степень которого оценивается в крестах.

Один крест (+) — слабое желе, смесь молока с реактивом тя­нется за палочкой в виде нити, на дне уже заметна небольшая выем­ка. Такое молоко содержит в среднем 4-б% анормального молока и до 500 тыс./мл соматических клеток. Два креста (++) — более выраженный желеобразный сгусток, при перемешивании которого хорошо видна выемка, но желе из луночки еще не удается выбросить. Такое молоко содержит в среднем 9-10% анормального молока и от 500 тыс. до 1 млн./мл соматических кле­ток.

Три креста (+++) — хорошо сформированный желеобразный сгусток, который легко можно выбросить палочкой из луночки пластинки. Такое молоко содержит выше 15% анормального молока и свыше 1 млн./мл соматических клеток.

Проба с маститодиагностом (реактив Загаевского).Для приготовления маститодиагноста 300 г сульфанола и 50 г триполифосфата натрия растворяют в 1 л дистиллированной воды при температуре 70-75°С. После полного растворения смеси и охлажде­ния до 20-25°С добавляют 0,2 г бромтимолового синего и 3 мл 1% спиртово-водного раствора розоловой кислоты и тщательно перемеши­вают в течение 3-5 мин, после чего реактив фильтруют через ватный фильтр.

Срок хранения приготовленного реактива — 3-3,5 месяца при температуре 5°С. Для исследования берут 2 мл тщательно перемешанного сборного молока, вносят в луночку молочно-контрольной пластинки ПМК-1, до­бавляют 1 мл маститодиагноста и перемешивают палочкой в течение 5-10 с.

Учет реакции проводят по изменению консистенции и цвета сме­си молока с реактивом. Гомогенная смесь молока с реактивом (-) — отсутствие примеси анормального молока в сборном. Наличие единичных слизистых тяжей и хлопьев (±) — примесь анормального молока 1-5%. Умеренное содержание жидкой слизи и хлопьев(+)—примесьанормального молока 5-10%. Наличие слизи жидкой консистенции (++) — примесь анормально­го молока 10-15%. Умеренный сгусток в виде белка куриного яйца (+++) — примесь анормального молока 20-25%. Плотный желеобразный сгусток, зеленоватого цвета (++++)-примесь анормального молока свыше 25%.

Примесь более 10% анормального молока к сборному влияет на его технологическую переработку, качество изготовляемых из него кисломолочных продуктов и сыров.

источник

4. В комплекс диагностических исследований входят:

общее клиническое обследование животного;

3) клиническое исследование вымени (с пробным выдаиванием секрета);

4) бактериологическое исследование секрета молочной железы.

При сборе анамнестических данных выясняют: частоту случаев мастита у коров хозяйства (фермы), время последнего отела, про­должительность сухостойного периода у больной коровы, уровень молочной продуктивности и период лактации, полноценность корм­ления, состояние молочной железы и предыдущие годы, время за­болевания, изменение физических свойств молока, метод доения, тип доильной установки и правильность ее работы, санитарное и техническое состояние доильной установки, благополучие хозяйст­ва в отношении инфекционных заболеваний.

Общим клиническим обследованием определяют: температуру тела, частоту пульса, дыхания и сокращения рубца; состояние же­лудочно-кишечного тракта, полового аппарата и других органов.

При исследовании молочной железы обращают внимание на величину и консистенцию отдельных четвертей, болезненность их и состояние сосков, местную температуру, состояние кожи вымени и надвыменных лимфатических узлов, характер секрета (цвет, кон­систенцию, количество).

5. Диагностика клинически выраженных маститов не представ­ляет затруднений. Она базируется на характерных изменениях внешнего вида вымени и секрета молочной железы. Для диффе-

ренциальной диагностики острых клинических маститов у коров следует руководствоваться показателями, приведенными в прило­жении 1.

6. Для диагностики субклинических маститов у коров приме­няют стойловые пробы и лабораторные исследования. Непосред­ственно на скотном дворе (в стойле) применяют пробу с димастином или мастидином, бромтимоловую пробу и пробу отстаивания.

При лабораторной диагностике скрытых маститов проводят подсчет лейкоцитов, определение активности каталазы и лизоцимов молока, бактериологические исследования секрета вымени (см. приложение 2).

Молоко при маститах содержит повышенное количество лей­коцитов и в основном имеет щелочную реакцию. Действие мастидина и димастина основано на выявлении увеличенного количест­ва лейкоцитов и изменений реакции (рН) молока.

Исследование указанными реактивами молока коров можно проводить с первого дня после отела. В первые дни после отела и перед запуском количество клеток, в том числе и лейкоцитов, в мо­локе увеличивается, поэтому такое молоко иногда может давать с димастином и мастидином сомнительную или положительную реакцию. Однако эта реакция, как правило, выражена слабее, чем при воспалительных процессах в вымени, и реагируют при этом все четыре доли.

Для исследования молока готовят 5%-ный раствор димастина или 2%-ный раствор мастидина на дистиллированной воде. Ис­следование проводят при помощи специальных молочно-контрольных пластинок.

Молочно-контрольная пластинка для диагностики маститов представляет собой пластинку с четырьмя (по числу долей выме­ни) полушаровыми лунками, которые имеют контрастное черно-белое окрашивание и кольцевые канавки, соответствующие по объему 1,0 и 2,5 мл молока. Черно-белое дно луночек облегчает выявление в молоке белых хлопьев на черном или примеси кро­ви — на белом фоне. Между одной парой луночек сделано отвер­стие для обозначения лунок и соответствующих им четвертей вы­мени. При взятии проб молока из вымени молочно-контрольную пластинку держат отверстием по направлению к голове коровы, что позволяет затем легко определить, из какой четверти взято молоко в ту или иную луночку.

Техника постановки реакции. В каждое углубление пластинки из соответствующей четверти вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл димастина или мастидина из бутылки с автома­том-клювиком. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в течение 30 секунд при работе с димастином и 15—20 секунд при использовании мастидина. Реакция учитывается в крестах по гу-

стоте желе, а изменение цвета является ориентирующим и допол­няющим показателем.

Учет реакции по густоте желе:

отрицательная реакция — однородно» жидкость;

сомнительная реакция — следы образования желе;

положительная реакция — ясно видимый сгусток (от слабого до плотного), который наполовину или целиком выбрасывается из луночки пластинки палочкой при перемешивании.

Цвет смеси при работе с димастином:

оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый)—нормальная слабокислая реакция молока;

желтый — повышенная кислотность молока;

красный — сдвиг в сторону повышения щелочности;

алый, пунцовый, малиновый — повышенная щелочность.

При использовании мастидина цвет смеси при нормаль­ной реакции (рН) молока светло-сиреневый, дымчатый, при кис­лой— почти белый, при щелочной — темно-сиреневый, фиолетовый.

По окончании учета результатов исследовании содержимое лу­ночек сливают в ведро, а пластинку ополаскивают в другом ведре с теплой чистой водой и вытирают полотенцем, после чего пла­стинка готова к дальнейшему пользованию.

При каждом исследовании составляют список коров, где ука­зывают наименование хозяйства, дату исследования, кличку или номер коровы, дату отела и результаты исследования.

Молоко из четверти вымени, при исследовании которого полу­чена положительная реакция с димастином или мастидином, до­полнительно проверяют по пробе отстаивания.

источник

Диагностика мастита. В зависимости от характера воспалительной реакции мастит разделяют на клинический с ярко выраженными признаками воспаления и скрытый (субклинический) без выраженных клинических симптомов заболевания. Диагностика клинического мастита основывается на данных анамнеза, клинического и лабораторного исследований.

По клиническим признакам, отражающим характер воспалительного процесса различают:

— Катаральный: катар молочных ходов и цистерн, катар альвеол;

— Гнойный: гнойно-катаральный; абсцесс вымени; флегмона вымени;

— Специфический: ящур; туберкулез вымени; актиноминоз. По течению маститы разделяются:

— острые, продолжительностью до 10 дней;

— подострые, продолжительностью до 3 недель;

— хронические, продолжительностью свыше 3 недель. Диагностируют маститы клиническими и лабораторными методами. Клиническая диагностика включает анамнез (опрос), общее обследование вымени и других органов.

Анамнезом устанавливают благополучные хозяйства в отношении заразных и незаразных и инвазионных болезней, особенно гинекологических; тип и уровень кормления; условия содержания, особенно в сухостойный период; наличие моциона и его организацию; дату последнего отела; длительность сухостойного периода; общее состояние организма до и после родов; время появление болезни, ее признаки; состояние вымени и уровень молочной продуктивности в предыдущие годы, режим и технологию машинного доения; санитарное и технологическое состояние доильного оборудования; лечение животных и его эффективность.

Клинические исследования начинают с осмотра животного: измерения температуры тела, частоты пульса дыхания. Затем определяют состояние кожи, лимфатических узлов, сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечного тракта. Вымя исследуют при помощи осмотра, пальпации и пробного доения.

Осмотром определяют цвет, целостность кожи, состояние волосяного покрова, форму и пропорциональность отдельных четвертей, состояние подкожных кровеносных сосудов вымени.

Пальпацией устанавливают болевую и температурную реакцию молочной железы, ее консистенцию, наличие и характер уплотнений и других морфологических изменений в ткани, цистерне и канале соска вымени. Наличие атрофированных четвертей вымени, указывают на ранее перенесенный мастит. Пальпацию молочной железы проводят после доения.

Для определения консистенции, болезненных и характерных уплотнений каждую четверть вымени пальпируют в отдельности путем легкого сдавливания ее тканей. В норме молочная железа нежная, кожа легко собирается в складки и смещается, а паренхима ощущается в виде упругой дольчатой ткани.

Цистерну и канал соска исследуют путем захвата основания соска между указательным и большим пальцами и вытягивая его к низу, смещая пальцы к верхушке соска, одновременно прокатывая сосок между пальцами, что позволяет выявить морфологические изменения в стенке цистерны или канале соска.

Пальпацией определяют величину, подвижность, консистенцию болезненность паховых узлов. В норме они 7-8 см длиной, 1 см в диаметре, подвижны, безболезненны, упругой консистенции. Пробным доением определяют тонус сфинктера соскового канала по усилию, прикладываемому для выдаивания молока, а также аномалию соскового канала обуславливающих слабо-тугодойность, непроизвольное истечение молока (лакторею), количество и органолептические свойства секрета, обнаружение в секрете хлопьев или сгустков, выявляемых осмотром, являются одним из признаков мастита.

Для дифференциальной диагностики руководствуются показателями в таблицах 14 и 15.

Диагностика скрыто протекающего мастита требует проведения специальных исследований. Для выявления скрыто протекающих маститов используют быстрые диагностические тесты с применением химических препаратов, пробу отстаивания, подсчет соматических клеток, бактериологические исследования и различные технологические устройства.

Быстрый маститный тест (БМТ) с использованием диагностикумов химической природы получил наибольшее распространение. В качестве диагностикумов применяют димастин, мастидин, мастоприм, мастотест Воронежский, проба 20 % сульфоналом и др., позволяющие обнаружить увеличение лейкоцитов в молоке.

Схема диагностики мастита у коров

Дифференциальная диагностика клинически выраженного мастита у коров

В «БелНИИЭВ им. С.Н. Вышелесского» разработан диагностикум «Беломастин», представляющий собой 10 % раствор поверхностно-антисного вещества с добавлением индикатора. Лактирующих коров обследуют на скрыто протекающий мастит не реже одного раза в месяц.

Исследования проводят на молочно-контрольных пластинках (МКП-1 или МКП-2).

МКП-1 для диагностики мастита представляют собой пластинку с четырьмя (по числу долей вымени) полушаровидными лунками, которые имеют контрастное черно-белое окрашивание и кольцевые углубления, соответствующие объему 1,0 и 2,5 мл молока. Черно-белое дно луночек облегчает выявление в молоке белых хлопьев на черном или примеси крови на белом фоне. Между одной парой луночек сделано отверстие для обозначения луночек и соответствующих им частей вымени. При взятии проб молока из вымени МКП-1 держат отверстием по направлению и коровы, что позволяет затем легко определить из какой четверти взято молоко в ту или иную луночку.

Молочно-контрольная пластинка МКП-2 отличается от МКП-1 большим размером лунок цилиндрической формы с калиброванным центральным углублением на 1 мл и наличием двух щелей между лунками для одновременного слива излишке молока (более 1 мл) путем наклона пластины под углом 60-650.

При использовании МКП-1 молоко с реактивом смешивают при помощи деревянной или стеклянной палочки, а на МКП-2 смешивание осуществляется путем горизонтальных круговых вращений пластины.

Беломастин применяют в нативном виде для исследования сборного молока, а для исследования секрета из вымени разбавляют водой 1:3 (к 100 мл препарата добавляют 300 мл3 воды).

В углубление пластинок (МКП-1, МКП-2) при пробирки вносят 1 мл исследуемого молока (секрета) и добавляют 1 мл рабочего раствора одного из диагностикумов, перемешивают стеклянной палочкой или путем горизонтального вращения пластинки. Реакцию учитывают в первые 10-20 сек.:

— отрицательная реакция (-) жидкая смесь остается однородной;

— сомнительная реакция ± смесь образует единичные слизистые хлопья или тяжи;

— положительная реакция (+) смесь приобретает консистенцию слизистой массы или желеобразного сгустка.

Коров давших сомнительную реакцию, используют повторно через 2-3 дня.

С целью сохранения затрат труда и времени при обследовании коров на мастит первичную диагностику проводят во время контрольных доек путем исследования молока из удоя каждой коровы при помощи 10 % мастидина, 10 % сульфанола, Беломастина. После установления положительной реакции на мастит в молоке из удоя исследуют молоко из каждой доли. В случае не возможности постановки реакции сразу после взятия пробы молоко консервируют 10 % раствором бихромата калия (из расчета 1 мл консерванта на 100 мл молока).

С целью диагностики маститов многие исследователи предлагают определять рН молока с помощью различных индикаторов: феноловый красный, бромкрезоловый, бромтимоловый синий, нейтральный красный, крезоловый красный, ализариновый красный, розовая кислота, универсальный индикатор. А.И. Ивашура (1991) при постановке опыта на МКП с контролем на рН метре установил, что из вышеуказанных реактивов наиболее часто изменял цвет с ясно выраженными оттенками, позволяющими уловить изменения рН в пределах 6,6-7,0 через каждые 0,1-0,15 изменений только индикатор бромтимоловый синий (0,5 г в 50 мл этилового спирта с добавлением 50 мл дистиллированной воды).

Для подтверждения диагноза на скрытый мастит часто ставят пробу отстаивания. Проба отстаивания считается недостаточно чувствительным способом диагностики скрытых маститов и обычно используется как дополнительный метод. Она дает положительные результаты при значительных воспалительных изменениях в тканях молочной железы. При ее постановке из вымени выдаивают из каждой доли в отдельную пробирку по 10-15 мл молока и ставят на 16-18 ч. в холодильник при температуре 4-100С. У здоровых коров молоко белое, однородное, без осадка. У больных животных на дне пробирки образуется осадок, содержащий лейкоциты, клетки эпителия. В отдельных пробах положительная реакция сопровождается изменением цвета молока — сероватый, слизистый, желтоватый. Положительной реакцией считается, если высота осадка в пробирке составляет 0,1 см и более. Для выявления больных животных в процессе машинного доения Н.Л. Егин, И.И. Блаковой и др. (1986) предложили механический индикатор мастита (МИМ-1).

Принцип действия устройства основано на фильтрации молока через металлическую сетку вставленную с рамкой в молочный шланг. Наличие хлопьев, сгустков свидетельствует о заболевании коровы маститом.

Обследование коров различными диагностическими тестами показало, что большое количество хлопьев обнаруживается при клиническом мастите, незначительное при переходе субклинической формы мастита в клиническую. При подсчете соматических клеток в пробах молока полученного из здоровых и пораженных долей. Положительная проба отстаивания установлена в 27,8 %, хлопья на сетке МИМ-1 в 41,2 %, положительная реакция с 5 % раствором димастина 86,6%. При заболевании маститом изменяется в молоке соотношение солей, учитывая этот фактор для диагностики маститов предложены приборы действия, которых основано на измерении электропроводности ПЭДМ, АСМ-1, Биотест и др. Методы измерения электропроводности молока благодаря своей доступности и быстроте позволяет обследовать фермы с большим поголовьем, однако не всегда позволяют выявлять коров на ранних стадиях воспалительного процесса. Неточность результатов определения мастита измерением электропроводности достигает 29,4%.

Одним из широко используемых диагностических тестов является определение соматических клеток. Это наиболее точный показатель маститных тестов. В состав соматических клеток входят лейкоциты (80-85 % от общего числа клеток), эритроциты, клетки плоского, цилиндрического и кубического эпителия молочной железы, колостральные тела. От состояния вымени животного зависит их количественное соотношение (табл. 16).

Повышение соматических клеток является одним из первых сигналов любого вредного воздействия на ткани молочной железы и начавшегося в ней воспалительного процесса.

Содержание соматических клеток молока у коров

Хотя средние показатели количества соматических клеток в молоке довольно хорошо характеризуют различное состояние вымени наблюдаются в пределах одного и того же состояние вымени довольно широкие их колебания. Так, в молоке здоровых четвертей число соматических клеток насчитывают от десятков тысяч до 1 млн. При нарушении секреции колебания в более широких пределах. Так, проведенные исследования показали, что 30 % обследованных проб молока при нарушении секреции содержало меньше 1 млн./мл, 6 % проб больше 5 млн. остальные 61 % в пределах 1 -5 млн. При ранней форме мастита 3 % проб больше 500 тыс. соматических клеток, 51,4 % проб от 1 до 5 млн. и 45,6 % — больше 5 млн.

В качестве нормы для вымени здоровых коров уровень соматических клеток составляет 350 000 в 1 мл.

Имеется взаимосвязь степени заболеваемости коров стада маститами с количеством соматических клеток в сборном молоке. Так, при их содержании 0,5 млн. в 1 мл степень заболеваемости составляет менее 10 %, 1,3 млн. 10-20 %, 3,8 млн. более 20 %.

По данным О.Р. Ивановой (1994) уровень соматических клеток от 400 тыс. до 31 млн.в 1 см3 в сборном молоке показывает 5-21 % больных коров в стаде. Увеличение количества клеток свыше 1 млн. в 1 см процент мастита в стаде возрастает от 21 и выше.

Для подсчета соматических клеток предложено значительное количество методов: Прэскот-Брид (1910), определения лейкоцитов в молоке И.И. Архангельский и др. (1969) и др.

Предложенные методы трудоемки, выполнимы при использовании микроскопа в лабораторных условиях. В настоящее время для подсчета соматических клеток в молоке используются приборы типа Соматос, Фоссоматик, которыми оборудованы молочные заводы, производственные лаборатории.

Бактериологические исследования. Для определения возбудителей мастита их чувствительности к лекарственным препаратам из пораженных четвертей вымени (положительная проба отстаивания и реакция с БМТ), отбирают молоко (секрет) для бактериологических исследований.

Для этого соски вымени протирают ватным тампоном, смоченным 700 спиртом (5 см3 на одну четверть) и надаивают 10 см3 молока в стерильную пробирку. При взятии проб следят за тем, чтобы, сосок не касался края пробирки.

Пробы молока доставляют в ветеринарную лабораторию в течение 3-4 ч. с помощью взятия в специальных емкостях, обеспечивающих температуру не выше 8100 или термосах со льдом.

В лаборатории из проб молока (секрета) делают посевы на элективные питательные среды для выделения и идентификации основных возбудителей мастита и определения их чувствительности к антимикробным препаратам. Определение антибиотико-препаратограмм проводят не реже 6 мес. в год. При необходимости проводят исследование на патогенность выделенных культур путем заражения белых мышей.

Диагностика мастита в запускной и сухостойный периоды. За 7-10 дней до запуска и в последний день запуска всех коров исследуют клинически. При отсутствии клинических признаков (увеличения, доли, болезненность, изменение секрета, повышение местной температуры), болезни исследуют секрет из каждой доли вымени по быстрому маститному тесту.

В период запуска, а также в первые дни лактации положительные реакции с беломастином, димастином не всегда обусловлены воспалительным процессом, там как в этот период в молоке содержится высокое содержание лейкоцитов. Отрицательной реакцией в этом случае считается такая, при которой консистенция молока выражена в одинаковой степени во всех четырех лунках молочно-контрольной пластинки. Если положительные реакции установлены в пробе от всех четвертей вымени, то необходимо тщательно провести клиническое исследование, и обратить внимание на качества секрета.

В сухостойный период коров исследуют на мастит дважды: первый за 10-15 дней до начала сухостоя, второй через 10-15 дней от отела при переводе животных в родильное отделение. В течение первых 20-30 дней сухостойного периода секрет жидкий, серовато-белого цвета, однородной консистенции без каких-либо включений. Во второй половине периода секрета в вымени молока (3-5 мл), он вязкий, тягучий, клейкий (медообразный), желто-коричневого цвета, иногда выдоить секрета не удается. Секрет вымени здоровых коров с реактивными быстрых маститных тестов сгустков не образуется, наличие сгустка свидетельствует о заболевании доли вымени субклиническим маститом. Наличие клинических признаков или изменение количества или внешнего вида секрета показывает на клинически выраженный мастит.

Сразу после отела мастит устанавливают по характеру молозива. От здоровых коров, после отстаивания в пробирке образуется два слоя: верхний — интенсивно-желтого цвета, занимающий две трети объема, нижний — белый без каких-либо включений. При воспалении и травмах секреторной ткани вымени молозиво приобретает розовый или красный оттенок. За счет примеси крови, при отстаивании на дне пробирки и под верхним слоем жидкости появляются кольца красно-малинового цвета за счет эритроцитов. При развившемся воспалении вымени образуется бело-серый осадок или серо-желтый экссудат не разрушающий на два слоя при отстаивании.

Мастит у нетелей выявляют на 8-9 месяцах стельности путем осмотра и пальпации молочной железы, а так же пробного сдаивания секрета и его визуальной оценки.

источник