Что такое белок резистентности рака молочной железы

Авторы: О.Д. Захаров, Е.Ю. Рыбалкина, М.А. Волкова, А.А. Ставровская
ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Резюме
Множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) называют резистентность клеток к ряду лекарственных препаратов, различающихся по химической структуре и механизму действия. Наиболее изученным фактором, определяющим наличие у клетки феномена МЛУ, являются белки из семейства АВС-транспортеров. По данным литературы, признана роль в развитии феномена МЛУ Pgp, MRP1, BCRP, а также LRP. Мы определяли экспрессию данных белков у первичных больных ОМЛ (кроме М3). Экспрессия данных белков наблюдалась у 64,3, 46,4, 64,3 и 42,9% больных соответственно. Бластные клетки всех больных, не ответивших на терапию, экспрессировали более одного маркера МЛУ, у 80% резистентных больных отмечена экспрессия трех и четырех маркеров, в то время как в группе чувствительных больных 1–2 маркера экспрессировались у 83% пациентов.
Ключевые слова: ОМЛ, Pgp, MRP1, BCRP, LRP

За последние годы достигнут несомненный прогресс в изучении острых миелоидных лейкозов (ОМЛ). Благодаря исследованиям патологов, клиницистов, генетиков раскрыты некоторые механизмы патогенеза, определены факторы прогноза. Все это привело к тому, что заболевание, бывшее фатальным для 100% больных, в настоящее время расценивается как потенциально излечиваемое. При использовании современных схем ПХТ 5-летняя безрецидивная выживаемость составляет 45–50%, проведение аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток увеличивает этот показатель до 55–60%.Основной задачей, стоящей перед клиницистом при лечении первичного больного с ОМЛ, является достижение полной клинико-гематологической ремиссии. Современная терапия ОМЛ позволяет получить полные ремиссии у 65–80% первичных больных. По данным отечественных исследователей (Российская группа по изучению острых лейкозов), этот показатель составляет 64% [1]. Несмотря на очевидные успехи в лечении острых нелимфобластных лейкозов (ОНЛЛ), приблизительно у 10–20% пациентов при применении стандартной химиотерапии не удается получить полной ремиссии. Данная группа больных представляет большую клиническую проблему, так как эффективность схем второй линии химиотерапии, основанных, главным образом , на высоких дозах цитарабина, не превышает 20%. Использование новых препаратов, таких как ингибиторы топоизомеразы II (топотекан), производные платины (карбоплатин), флударабин, не улучшило ситуацию. Применение столь агрессивного метода лечения, как аллогенная трансплантация костного мозга, позволяет надеяться на долговременную выживаемость у 10% первично-резистентных больных. Таким образом, первичная резистентность, т.е. отсутствие полной ремиссии после проведения 1–2 курсов современной индукционной химиотерапии в адекватных дозах, является крайне неблагоприятным фактором прогноза и представляет собой одну из основных проблем современной онкогематологии, для решения которой проводятся многочисленные исследования.

В последние годы все больший интерес исследователей привлекает феномен множественной лекарственной устойчивости (МЛУ). МЛУ называют резистентность клеток к ряду лекарственных препаратов, различающихся по химической структуре и механизму действия [2]. От момента открытия данного феномена и до наших дней ОМЛ является наилучшей экспериментальной моделью для изучения механизмов устойчивости злокачественных клеток к действию цитостатиков. Это обусловлено высокой чувствительностью клеток к химиотерапии, относительной простотой их получения и культивирования.

Наиболее изученным фактором, определяющим наличие у клетки феномена МЛУ, являются белки из семейства АВС-транспортеров (ATP Binding Cassette transporters, АТФ-зависимые транспортеры; рис. 1). Данная группа объединяет трансмембранные протеины, связывающие АТФ и использующие энергию для транспортировки некоторых молекул через все виды клеточных мембран. Семейство подразделяется на подсемейства A, B, C, D, E, F, и G в зависимости от структуры АТФ-связывающих доменов и в настоящее время насчитывает около 50 белков, 3 из которых имеют значение в развитии феномена МЛУ при ОМЛ [3, 4].

Рис. 1. Структура типичного ABC-транспортера. Желтым показана билипидная мембрана, синим – трансмембранный домен, красным – связывающая последовательность нуклеотидов

Впервые связь мембранных белков-транспортеров с феноменом МЛУ была показана в исследованиях лаборатории Victor Ling при изучении белка с молекулярной массой 170 кД, названного Р-гликопротеином (Pgp), обладавшим способностью уменьшать внутриклеточное накопление и цитотоксичность структурно и функционально различных цитостатиков [5]. Pgp кодируется геном MDR1 (относится к семейству В, международное название АВСВ1), расположенным на длинном плече хромосомы 7 (7q21). Молекула белка имеет внутри- и внеклеточный компонент и 12 раз пересекает цитоплазматическую мембрану. Его функцией являются энергозависимый транспорт (эффлюкс) за пределы клетки и уменьшение внутриклеточной концентрации большого числа ксенобиотиков, в том числе лекарственных препаратов. Кроме того, последние исследования показывают, что Pgp играет роль в увеличении апоптотического порога клетки. Pgp демонстрирует широкую специфичность к веществам с различной структурой и соответственно определяет устойчивость клеток к большому числу препаратов, таких как алкалоиды барвинка, антрациклины, эпиподофиллотоксины, таксаны, актиномицин D [6, 7]. При ОМЛ гиперэкспрессия MDR1 наблюдается, по данным разных исследователей, у 20–50% первичных больных.

Таблица 1. Экспрессия Pgp и ее влияние на частоту достижения полной ремиссии (%)

Несмотря на предпринятые многочисленные многоцентровые исследования, роль Р-гликопротеина в развитии первичной резистентности у больных ОМЛ до сих пор остается спорной. Как видно из данных, приведенных в табл. 1, составленной по результатам многоцентровых исследований, в мировой литературе имеются противоречивые результаты: в ряде исследований отмечается достоверно больший процент достижения полных ремиссий в группе пациентов, бластные клетки которых не экспрессируют Pgp, в других работах подобного различия не отмечено [8, 9]. Были предприняты попытки связать гиперэкспрессию белка Pgp с известными прогностически неблагоприятными факторами, включая возраст, цитогенетические аберрации, гиперлейкоцитоз, уровень гемоглобина, экспрессию CD34, вторичный характер ОМЛ. Показана корреляция экспрессии Pgp с наличием маркера CD34 (по данным разных авторов, 50–70% CD34+СD38- клеток имеют Р-гликопротеин) [10, 11]. Неизвестно, оказывает ли молекула CD34 непосредственное влияние на активность Pgp. Встречаются отдельные сообщения о взаимосвязи экспрессии и функциональной активности Pgp с различными ФАБ-вариантами ОМЛ, однако на настоящий момент можно сказать, что экспрессия данного белка практически отсутствует только при остром промиелоцитарном лейкозе, отличающемся высочайшей чувствительностью к антрациклинам и служащем экспериментальной моделью для поиска путей преодоления МЛУ при других ФАБ-вариантах ОМЛ. Несомненной является связь возраста с экспрессией Pgp. В исследовании O. Legrand и соавт. [12], включившем в себя 132 пациента, Pgp определялся лишь у 17% больных моложе 35 лет, в то время как в возрастных группах 35–50 лет и старше 65 лет экспрессия составила 39 и 71% соответственно.

D. Damiani и соавт. [13] считают Pgp независимым фактором прогноза у больных с нормальным кариотипом, поскольку имеющиеся данные убедительно показывают необходимость отнесения больных с гиперэкспрессиией Pgp и нормальным кариотипом в группу неблагоприятного прогноза.

В последние годы проводятся исследования по выявлению взаимосвязи Pgp с новыми факторами прогноза, одним из которых является мутация FLT3. Показано, что бластные клетки, одновременно экспрессирующие Pgp и имеющие мутацию FLT3, отличаются сниженной апоптотической способностью в сравнении с клетками, не имеющими данной ассоциации [14]. Вслед за открытием Pgp исследование злокачественных клеток с фенотипом МЛУ, не связанным с геном MDR1, привело к открытию S.P. Cole и соавт. [15] в 1992 г. в клеточной линии мелкоклеточного рака легкого белка MRP1 (multidrug resistance-associated protein; белок, ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью; класс С, ген АВСС1). Этот белок с молекулярной массой 190 кДа, кодируемый геном, расположенным на хромосоме 16 (регион 16р13.1), обеспечивает резистентность примерно к тому же кругу химиопрепаратов, что и Pgp. Он транспортирует отрицательно заряженные ионы, конъюгированные с молекулой глутатиона. В норме белок MRP1 широко распространен в органах и тканях организма, включая клетки гемопоэтической системы. Признано его участие в развитии феномена МЛУ при раке легкого, толстой кишки, молочной железы, мочевого пузыря и простаты, а также при лейкозах. Данные о частоте экспрессии и функциональной значимости белка MRP при ОМЛ весьма противоречивы. По данным D.C. Zhou и соавт. [16], проанализировавших бластные клетки 91 первичного больного ОМЛ, экспрессия MRP1 наблюдалась у 24% пациентов, полные ремиссии в данной группе были достигнуты у 22% по сравнению с 84% в группе пациентов без экспрессии MRP1. M. Filipits и соавт. [17] определяли экспрессию MRP у 121 первичного больного ОМЛ, обнаружив при этом низкий уровень экспрессии у 30% пациентов, средний и высокий – у 46 и 24% соответственно. Экспрессия MRP1 не зависела от классических факторов прогноза (включая цитогенетические аномалии) и не влияла на непосредственные результаты лечения. Показана тенденция к снижению общей выживаемости в группе с высоким и средним уровнем экспрессии MRP1 [17]. В исследовании M. Schiach и соавт. [18] при анализе данных 331 больного показано, что в отличие от Pgp, оказывавшего влияние на непосредственные результаты лечения и общую выживаемость, экспрессия MRP1 является независимым фактором прогноза для безрецидивной выживаемости. Интересные данные опубликованы в 1996 г. B.J. Kuss и соавт. [19], которые, основываясь на локализации гена MRP1 на хромосоме 16, предположили, что дезактивация этого гена при специфической мутации (inv16), характерной для М4 ФАБ-варианта ОМЛ с эозинофилией, является причиной благоприятного прогноза при данном варианте заболевания. Был проведен анализ 22 больных с inv 16, у 5 из них была обнаружена делеция гена MRP, у этих больных отмечены достоверно лучшие показатели выживаемости [19].

Некоторые исследователи высказали предположение, что феномен МЛУ в большей степени связан с коэкспрессией нескольких белковых молекул. Так, O. Legrand и соавт. [12], проанализировав данные 132 больных, показали прогностическое значение одновременного обнаружения Pgp и MRP1 в бластных клетках при ОМЛ.

Активные исследования семейства АВС-транспортеров позволили в 1998 г. группе исследователей под руководством L.A. Doyle [20] выделить из клеточной линии рака молочной железы MCF-7/AdrVp, резистентной к даунорубицину, топотекану и митоксантрону, новый белок этого семейства. Он был назван «белком устойчивости рака молочной железы» (breast cancer resistance protein, BCRP) и отнесен к подсемейству G (ген ABCG2). Было показано, что перенос этого гена в химиочувствительные клеточные линии индуцирует резистентность к вышеуказанным препаратам при сохранении чувствительности к цисплатину, паклитакселу и винкаалкалоидам. Почти одновременно этот белок был выделен в двух других лабораториях, в связи с чем в литературе встречаются синонимичные обозначения MXR (mitoxantrone resistance protein) и ABCP (placental ABC transporter). Ген, кодирующий белок, располагается на длинном плече хромосомы 4 (4q22).

Хорошо известно, что антрациклины являются базисными препаратами при лечении ОМЛ, в связи с чем значение белка BCRP при ОМЛ начало активно изучаться сразу после его открытия. Данные продолжают накапливаться. Например, в исследовании Z. Benderra и соавт. [21] (149 первичных больных ОМЛ), завершенном в 2004 г., экспрессия белка BCRP обнаружена в 52%. В данной группе частота достижения полных ремиссий составила 43% против 69% в группе BCRP-отрицательных пациентов (р=0,005). Значимой корреляции между экспрессией BCRP и Pgp обнаружено не было. Исследователи делают вывод о том, что наихудший прогноз отмечен в группе больных, бластные клетки которых экспрессировали одновременно BCRP и Pgp (45% полных ремиссий в сравнении с 90% в группе без экспрессии обоих маркеров) [21]. Этот вывод был дополнен в более поздней работе той же исследовательской группы. У 81 больного ОМЛ была определена экспрессия MRP, BCRP и Pgp и продемонстрированы достоверно лучшие показатели общей выживаемости у пациентов, в бластных клетках которых белков МЛУ не обнаружено вообще либо обнаружен 1 белок.

В 2006 г. были опубликованы результаты работы итальянской группы исследователей [13], в которую были включены 73 первичных больных ОМЛ. Экспрессия BCRP выявлена у 33% больных, причем статистически значимых различий в достижении полной ремиссии у BCRP-позитивных и BCRP-негативных больных обнаружено не было. Тем не менее, в группе BCRP-позитивных пациентов отмечена достоверно более высокая частота рецидивов (78% против 38%), причем все рецидивы были ранними. В работе вновь подчеркивается важность комплексного исследования фенотипа МЛУ.

Несмотря на отчетливую связь BCRP с транспортом антрациклинов in vitro, до последнего времени не было продемонстрировано преимуществ ни одного из них (даунорубицин, идарубицин, митоксантрон) для преодоления резистентности опухолевых клеток, обусловленной этим белком. Тем не менее в 2002 г. B.L. Abbott с соавт. [22] in vitro показали значение BCRP в развитии резистентности к митоксантрону и топотекану при сохранении чувствительности к идарубицину. Необходимо отметить тот факт, что ни в одном исследовании не было показано статистически значимой связи экспрессии BCRP с классическими неблагоприятными факторами прогноза, в том числе с цитогенетическими аномалиями, что позволяет считать данный белок независимым прогностическим фактором. Помимо вышеописанных белков из семейства АВС-транспортеров, в развитии феномена МЛУ участвует еще ряд факторов. В 1993 г. при помощи моноклонального антитела LRP56 в полирезистентной Pgp-отрицательной клеточной линии рака легкого был выделен белок с молекулярной массой 110 кД, названный белком устойчивости рака легкого – LRP (lung resistance protein). Ген LRP, расположенный на хромосоме 16 в регионе, близком к гену MRP1, является гомологом главного везикулярного белка крыс. Исследования показали, что в отличие от АВС-белков он локализован не на клеточной мембране, а в цитоплазме и ассоциирован с везикулами и лизосомами, что позволяет считать его участником ядерно-цитоплазматического транспорта. Везикулы представляют собой расположенные в цитоплазме частицы, состоящие из РНК и белка. При культивировании клеток, экспрессирующих LRP, с антрациклинами эти препараты обнаруживаются внутри везикул и выводятся из клетки путем экзоцитоза. Гиперэкспрессия LRP в норме наблюдается в тканях толстой кишки, легкого, проксимальных почечных канальцев, коре надпочечников и макрофагов, однако его физиологические функции остаются неизвестными. Белок LRP обнаруживается в клетках различных злокачественных опухолей при отсутствии экспрессии Pgp и MRP1, что аассоциируется с резистентностью к доксорубицину, винкристину, цисплатину и мелфалану.

Первые данные о значении LRP при ОМЛ появились в 1996 г. Группа исследователей под руководством A.F. List [23] на достаточно разнородной группе из 86 больных (первичный и вторичный ОМЛ, РАИБ-Т, бластный криз хронического миелобластного лейкоза) показала, что у LRP-отрицательных пациентов частота достижения полной ремиии достоверно выше (35% против 68%). Была выявлена зависимость экспрессии LRP от возраста (старше 55 лет), подтвержденная во всех последующих исследованиях. В других исследованиях была продемонстрирована взаимосвязь экспрессии LRP с лейкоцитозом. Влияние экспрессии LRP на непосредственные результаты терапии отображено в табл. 2.

Таблица 2. Влияние экспрессии LRP на частоту достижения полной ремиссии (в %).

Ряд исследователей, например M. Schaich и соавт. [18], на больших группах больных (n=331) показывают отсутствие самостоятельного значения экспрессии LRP как прогностического фактора. Неоднозначность данных и достаточно большой накопленный материал привели к тому, что в последние годы большинство исследователей, занимающихся проблемой лекарственной устойчивости, оценивают комплексный фенотип МЛУ, т.е. экспрессию двух и более белков и влияние на исход лечения их ассоциаций. Например, H.J. Huh и соавт. [26] в 2006 г., проанализировав данные 81 больного, показали прогностическую значимость коэкспрессии MRP и MDR1, а также MRP и LRP для 2-летней выживаемости, подтвердив тем самым выводы ряда предшествовавших исследований. В последних работах показано, что у больных, бластные клетки которых экспрессируют 3 и более маркера МЛУ, шанс достижения полной ремиссии при применении стандартных методов лечения чрезвычайно мал.

Отделением химиотерапии гемобластозов РОНЦ РАМН совместно с лабораторией генетики опухолевых клеток НИИ Канцерогенеза РОНЦ РАМН впервые в России проводится комплексное исследование фенотипа МЛУ у первичных больных ОМЛ (кроме М3), изучение его влияния на частоту достижения полной ремиссии, а также на возможность преодоления неблагоприятного фенотипа при использовании различных антрациклинов в схемах индукционной химиотерапии. Мы определяли экспрессию гена MDR1, белков BCRP, LRP и MRP1 в бластных клетках костного мозга в первый острый период, а также во время рецидива. На настоящий момент в исследование включены 30 больных – 18 (58%) мужчин и 12 (42%) женщин с различными ФАБ-вариантами ОМЛ (табл. 3).

Таблица 3. Распределение больных по ФАБ-вариантам

Средний возраст пациентов составил 39,5 года (разброс 15–80 лет). У 22 больных перед началом лечения выполнено цитогенетическое исследование, в соответствии с которым больные были разделены на 3 прогностические группы (табл. 4).

Таблица 4. Распределение больных по прогностическим группам в зависимости от цитогенетических аномалий

У 22 больных проведено иммунофенотипическое исследование бластных клеток, причем у 76% выявлена экспрессия CD34.

Таким образом, число больных с неблагоприятными цитогенетическими и иммунологическими признаками было сравнительно выше, чем в среднем среди больных с ОНЛЛ. 23 больных получали лечение по протоколу РОНЦ для ОМЛ, включающее индукцию ремиссии по стандартной схеме 3+7+7 с этопозидом и идарубицином, консолидацию ремиссии высокими дозами цитозара (курсовая доза 18 г/м2) в комбинации с идарубицином (2 курса), поддерживающую терапию по схеме 1+5+5 также с идарубицином и этопозидом (4–6 курсов). По нашим данным, частота достижения полной ремиссии при подобной программе лечения составляет 72%, причем у всех больных с ремиссиями костномозговые ремиссии достигнуты после 1-го курса химиотерапии. Прочие пациенты получали индукционную химиотерапию по схеме 3+7 с даунорубицином в дозе 45 мг/м2. В целом полные ремиссии были достигнуты у 20 (66,7%) больных, 10 (33,3%) пациентов оказались резистентными к проводимому лечению. Резистентными считались пациенты, у которых ремиссия не была получена после 2 курсов стандартной химиотерапии. У всех пациентов проводился забор костного мозга перед началом лечения, образцы костного мозга в пробирках с ЭДТА доставлялись в лабораторию, где в течение 24 ч с момента взятия материала оценивали экспрессию белков МЛУ в реакции с моноклональными мышиными антителами фирмы CHEMICON: к MRP1 – MAB 4122, к LRP – MAB4126, к BCRP – MAB4146, к MDR1 – UIC2. Анализ экспрессии проводился методом проточной лазерной флуорометрии на приборе FACScan Becton Dickinson. Экспрессия белка считалась положительной при его обнаружении более чем в 25% бластных клеток. Положительная экспрессия Pgp вывлена у 64,3% больных, MRP1 – у 46,4%, LRP – у 64,3%, BCRP – у 42,9%. Эти данные несколько превышают мировые, что может быть объяснено как относительно небольшой выборкой больных, так и совокупностью неблагоприятных факторов прогноза.

Рис. 2. Экспрессия белков МЛУ в группе больных, ответивших на лечение, и у резистентных больных

В группе резистентных больных отмечается более высокая экспрессия белков МЛУ, причем для ВСRР и LRP различия достоверны (р=0,002; рис. 2). Частота достижения полной ремиссии оказалась ниже при экспрессии любого из изучаемых белков, причем вновь для BCRP и LRP различия были статистически достоверны (р=0,004; рис. 3).

Рис. 3. Частота достижения полной ремиссии в зависимости от экспрессии белков МЛУ

В исследованной группе у всех больных выявлена экспрессия хотя бы одного белка МЛУ. Мы оценивали влияние числа экспрессированных маркеров МЛУ на процент достижения полных ремиссий. Лишь у 40% больных обнаружен только 1 АВС-белок, у большинства больных обнаружено 2 белка и более (табл. 5).

Таблица 5. Распределение пациентов в зависимости от числа экспрессируемых маркеров

Из полученных нами данных следует, что бластные клетки всех больных, не ответивших на терапию, экспрессировали более одного маркера МЛУ, у 80% резистентных больных отмечена экспрессия трех и четырех маркеров, в то время как в группе чувствительных больных 1–2 маркера экспрессировались бластными клетками у 83% пациентов (рис. 4).

Рис. 4. Зависимость достижения полной ремиссии от числа экспрессируемых белков МЛУ

Более того, необходимо отметить, что у единственного больного, ответившего на лечение и экспрессировавшего все 4 белка (более 50% бластных клеток), развился ранний рецидив. Определенный интерес представляет зависимость экспрессии белков МЛУ от цитогенетической прогностической группы. Несмотря на то что в ряде исследований подобная связь отрицается, по нашим данным, у всех больных из группы с неблагоприятными цитогенетическими аномалиями бластные клетки экспрессировали более двух маркеров МЛУ.

В связи с потенциальной курабельностью ОМЛ феномен МЛУ и пути его преодоления вызывают большой интерес исследователей во всем мире. Данные о прогностической значимости ранее известных и вновь открываемых факторов продолжают накапливаться и все еще остаются весьма неоднозначными. Ряд исследователей полностью отвергают значение описанных белковых субстанций как фактора прогноза, другие же считают необходимым ввести обследование фенотипа МЛУ в рутинную практику. Наши данные показывают, что наличие экспрессии одного белка МЛУ не является прогностически неблагоприятным признаком в условиях современной терапии, экспрессия более двух белков остается прогностически неблагоприятной.

Материал взят из журнала «Онкогематология», №1-2, 2006.

источник

Большинство опухолей молочной железы содержат на поверхности клеток рецепторы эстрогена — такой рак называют ЭР-положительным.

Исследования показывают, что приблизительно 70% всех случаев рака груди являются ЭР-положительными.

Химические сигналы, которые передает гормон эстроген, способствуют росту опухоли. Чтобы остановить ЭР-положительный рак, врачи назначают специальные препараты — антиэстрогены.

Такие препараты, как тамоксифен и фулвестрант, предотвращают распространение опухоли путем подавления рецепторов эстрогена или выработки гормона в организме. Это называется эндокринной терапией.

Но примерно в трети случаев рак становится устойчив к лечению — развивается резистентность, которая плохо влияет на шансы больных.

Механизмы, лежащие в основе устойчивости опухолей к терапии, не совсем понятны, и в настоящее время представляют серьезную научную проблему.

За последние месяцы специалисты из Института рака Дана-Фарбер в Бостоне (США) добились значительного прогресса в понимании резистентности рака к эндокринной терапии.

Доктор Майлс Браун (Dr Myles Brown), директор Центра функциональной эпигенетики рака при Институте, рассказал о специфических мутациях, которые делают раковые клетки более устойчивыми и способствуют метастазированию. Открытие американских исследователей может привести к появлению более эффективных препаратов для больных, которым уже не помогают традиционные методы лечения.

Результаты исследования публикуются в журнале Cancer Cell.

Ранее доктор Ринат Джезельсон (Rinath Jeselsohn) — также участвовавший в последнем проекте — сумел выяснить, что мутации гена рецептора эстрогена в значительной степени отвечают за устойчивость опухолевых клеток к лечению.

После этого открытия доктор Джезельсон и ее коллеги проанализировали новые мутации с использованием лабораторных моделей ЭР-положительного рака молочной железы, отметив, что они поддерживают устойчивость опухолей к тамоксифену и фулвестранту.

Теперь же были обнаружены дополнительные механизмы, которые помогут врачам более эффективно бороться с раком. Мало того, что мутантные гены адаптируют клетки к низким концентрациям эстрогенов, они еще и стимулируют появление метастазов.

Подобные мутации, позволяющие генам приобретать удивительные новые функции, называются неоморфными мутациями.

«Мы обнаружили, что эффект генетических мутаций имеет двоякий характер, позволяя опухоли одновременно действовать по двум «линиям фронта». Эндокринная терапия производит естественный отбор клеток, способных расти в условиях нехватки эстрогена, да еще и усиливает метастатический потенциал», — отмечает доктор Браун.

Отметив влияние мутаций на живучесть рака, ученые обратились к современным инструментам редактирования генома — CRISPR-Cas9. Генетический анализ показал, что CDK7 (ген циклин-зависимой киназы 7 типа) может служить более надежной мишенью для лечения рака.

Более того, подходящее лекарство уже существует: несколько лет назад некий ученый Натаниэль Грей (Nathanael Grey) предлагал экспериментальный ингибитор CDK7 — THZ1.

Комбинация фулвестранта и THZ1 оказалась эффективной как в клеточных культурах ЭР-положительного рака молочной железы, так и на животных моделях. Два препарата существенно замедляли рост опухоли, а устойчивость практически не наблюдалась.

Доктор Браун и его коллеги полагают, что такая комбинированная терапия рака груди полностью решит вопрос устойчивости. Первые клинические испытания могут начаться уже в следующем году.

источник

Предсказание субстратов белка устойчивости к раку молочной железы человека с использованием метода машинной поддержки носителя

Белковый резистентный рак молочной железы (BCRP) представляет собой переносчик эффлюктов АТФ-связывающей кассеты (ABC), который обеспечивает множественную лекарственную устойчивость при раковых заболеваниях, а также играет важную роль в абсорбции, распределении и элиминации лекарств. Прогнозирование того, являются ли лекарственные средства или новые молекулярные сущности субстратами BCRP, должны обеспечить экономически эффективное средство, которое может помочь оценить фармакокинетические свойства, эффективность и безопасность этих препаратов или кандидатов на лекарства. В настоящее время были проведены ограниченные исследования для разработки моделей силиконных прогнозов для субстратов BCRP.

В этом исследовании мы разработали модели векторной машины поддержки (СВМ) для прогнозирования субстратов BCRP дикого типа на основе 263 известных субстратов BCRP и не-субстратов, собранных из литературы. Окончательная модель SVM была интегрирована в бесплатный веб-сервер.

Мы показали, что окончательная модель SVM имела общую точность предсказания

73% для независимого внешнего набора данных проверки 40 соединений. Точность предсказания для субстратов BCRP дикого типа составляла

76%, что выше, чем для не-субстратов. Бесплатный веб-сервер (http://bcrp.althotas.com) позволяет пользователям прогнозировать, является ли соединение запроса субстратом BCRP дикого типа и вычисляет его физико-химические свойства, такие как молекулярная масса, значение logP и поляризуемость.

Мы разработали модель прогнозирования СВМ для субстратов BCRP дикого типа на основе относительно большого количества известных субстратов BCRP дикого типа и не-субстратов. Эта модель может оказаться ценной для скрининга субстратов и не-субстратов BCRP, клинически важного транспортера наркотиков ABC efflux.

Белок устойчивости к раку молочной железы человека (BCRP, символ ABCG2) является АТФ-связывающей кассетной (ABC) транспортером лекарственного средства [1,2]. BCRP является одним из АВС-транспортеров, которые придают устойчивость к большому количеству структурно и химически несвязанных химиотерапевтических агентов с помощью АТФ, зависящего от гидролиза оттока этих препаратов [2]. Субстраты BCRP быстро расширяются, чтобы включать не только химиотерапевтические средства, такие как митоксантрон, топотекан и иматиниб, но также и нехимиотерапевтические лекарственные средства, такие как празозин, глибурид, нитрофурантоин и статины, а также нетерапевтические соединения, такие как диетические флавоноиды, порфирины, эстрон-3-сульфат и диетический канцероген 2-амино-1-метил-6-фенилимидазо [4,5-b] пиридин [1,2]. BCRP также высоко выражен в органах, важных для абсорбции (тонкой кишки), элиминации (печени и почек) и распространении (кроветворных и плацентарных барьерах) лекарств и ксенобиотиков [3], и недавно был признан FDA в качестве одного из самых важных наркоторговцев, участвующих в клинически значимом расположении лекарств и взаимодействиях с наркотиками [4]. Из-за клинической значимости BCRP в отношении лекарственной устойчивости и склонности к лекарственным средствам, должно быть очень важно разработать экономически эффективные методы оценки транспорта наркотиков или кандидатов на лекарственные средства BCRP, чтобы уровни фармакокинетики, эффективности, безопасности и ткани эти соединения могут быть предсказаны. Одним из таких методов будет разработка силиконовых моделей для прогнозирования субстратов BCRP.

Действительно, в последние годы модели силиконовского предсказания появились в трубопроводе открытия лекарств, которые позволяют осуществлять первоначальный скрининг и подбор перспективных соединений из химических библиотек и крупных баз данных. Кроме того, эти модели могли бы предоставить информацию о механизме взаимодействия белок-лиганд. В кремниевых методах предсказания взаимодействия белок-лиганд, включая транспортные характеристики, можно разделить на подходы на основе лигандов и на основе белков. С помощью методов, основанных на белковой структуре, таких как молекулярная стыковка, структуры и физико-химические характеристики межмолекулярного комплекса, образованного между взаимодействующим белком и лигандом, можно было бы предсказать, если будут доступны структуры с высоким разрешением как белка, так и лиганда. Структуры с высоким разрешением BCRP не были решены. Недавно были разработаны модели гомологии BCRP и ожидают дальнейшей экспериментальной валидации [1,5]. Хотя эти модели гомологии могут использоваться для расчетов стыковки и интерпретации биохимических данных, полученные результаты маловероятны для разработки и скрининга лекарств. Напротив, методы на основе лигандов, основанные на структурном сходстве лигандов с известными субстратами, обычно дают гораздо большую точность предсказания, чем методы на основе структуры белка.

Среди методов на основе лигандов один общий подход заключается в разработке моделей количественной структуры и активности (SAR и QSAR). Цель анализа SAR и QSAR заключается в установлении корреляции между дескрипторами, которые представляют информацию о молекулярных структурах лигандов и биологической активности для ряда биологически и структурно охарактеризованных соединений. Опубликованы различные модели SAR и QSAR для ингибиторов BCRP [6-8]. Несколько исследований SAR и QSAR показывают, что липофильность лигандов является хорошим предиктором ингибирования BCRP [9-11], но в других исследованиях утверждается, что это свойство малозначительно [12,13]. Кажется, что плоская структура ингибиторов необходима для связывания с активным центром BCRP [9,14,15]. Что касается предсказания субстратов BCRP, только одно исследование SAR аналогов камптотецина показало, что образование водородной связи может быть важным для распознавания субстрата BCRP [16]. Одной из общих черт этих моделей SAR и QSAR является то, что эти модели обычно строятся с использованием конгенериальной серии молекул и, следовательно, могут быть неприменимы для других классов соединений. По этой причине для классификации лигандов BCRP требуются более сложные методы.

Другой подход, основанный на лиганде, заключается в использовании статистических методов обучения для прогнозирования признаков, основанных на свойствах примеров, и могут быть использованы соединения любых химических структур. Из этих методов наиболее часто используется метод векторной машины поддержки (SVM) и оказался ценным в широком спектре приложений. SVM завоевала популярность в области химии и биоинформатики благодаря своей способности классифицировать объекты на два класса на основе их структурных особенностей. В частности, метод СВМ был полезен для классификации молекул в качестве субстратов или не-субстратов ферментов или транспортеров. Например, было предсказано несколько исследований для прогнозирования субстратов и не-субстратов P-гликопротеина (P-gp) с использованием SVM с точностью более 70% точности предсказания [17-20]. Zhong et al. недавно сообщила о процедуре генетического алгоритма-конъюгата с градиентом-носителем (GA-CG-SVM) для прогнозирования субстратов BCRP и не-подложек [21]. Хотя эти исследования очень ценны, научное сообщество не имеет открытого доступа к большинству из них, опубликованным в силиконовых моделях. Существует несколько веб-серверов, основанных на SVM, для прогнозирования субстратов и не-субстратов определенных ферментов и транспортеров. Например, Mishra et al. сообщил веб-сервер для ферментов цитохрома P450 [22], и наши лаборатории опубликовали бесплатный веб-сервер для прогнозирования субстратов и не-субстратов P-gp с использованием метода SVM (http://pgp.althotas.com) [20].

Поэтому в настоящем исследовании мы составили сравнительно большой набор данных субстратов BCRP и не-субстратов, собранных из литературы, и разработали SVM-основу в силиковой модели для прогнозирования субстратов BCRP дикого типа и не-субстратов. Эта модель прогнозирования была интегрирована в бесплатный веб-сервер (http://bcrp.althotas.com), который позволяет пользователям прогнозировать способность BCRP дикого типа транспортировать лиганды запроса и вычислять их физиологические свойства, включая молекулярный вес, logP значение и поляризуемость.

Все известные субстраты BCRP дикого типа и не-субстраты, используемые в этом исследовании, были взяты из опубликованных данных в литературе. Информация для некоторых из этих соединений в наборе данных была получена путем поиска в базе данных о взаимодействии с метаболизмом и транспортным препаратом Университета Вашингтона (http://www.druginteractioninfo.org/). Этот набор данных основан на результатах анализа in vitro-транспорта, таких как анализ поглощения пузырьковых пузырьков, анализ оттока с использованием интактных клеток млекопитающих, экспрессирующих BCRP, и анализ трансвельтерного транспорта с использованием клеток MDCKII / BCRP. Также использовались результаты исследований резистентности к лекарственным средствам in vitro. Однако результаты анализов АТФазы, стимулированных лекарственными средствами, не использовались, поскольку многие субстраты не стимулировали активность АТФазы BCRP. В случае противоречивых доказательств были приняты только результаты, подтвержденные по меньшей мере двумя независимыми исследованиями. Этот набор данных содержит 164 субстрата BCRP и 99 не-субстратов с очень разнообразными химическими структурами. Мы заметили, что 60 из 164 подложек имели несколько отчетов. Однако только около 9 из 99 не-субстратов имели несколько отчетов. Следует отметить, что выбранные на рецептуре мутанты BCRP с аминокислотными заменами в положении 482 демонстрируют измененную субстратную специфичность. Например, доксорубицин, родамин 123 и LysoTracker Green являются субстратами мутантного R482G или R482T, но не могут быть эффективно транспортированы BCRP дикого типа [23-25]. Поэтому такие соединения классифицировали как не-субстраты BCRP дикого типа, которые были предметом этого исследования. Из 263 соединений (164 субстрата и 99 не-субстратов) 223 соединения (139 субстратов и 84 не подложки) случайным образом использовались в обучающих и тестовых подмножествах в различных соотношениях тренировки / испытания и 40 соединений (25 субстратов и 15 не- -субстраты) были определены как независимое подмножество внешней проверки. Все соединения перечислены в дополнительном файле 1: Таблица S1. Химические структуры всех этих молекул показаны в двух файлах sdf, представленных в виде дополнительных файлов 2 и 3, которые можно просмотреть с помощью бесплатного программного обеспечения MarvinView (http://www.chemaxon.com/products/marvin/marvinview/).

Метод SVM, который мы использовали в этом исследовании, по существу тот же, что и ранее описанный [20]. Вкратце, стандартную процедуру классификации SVM можно разделить на четыре этапа. На первом этапе все соединения в наборе данных были определены как субстраты и не подложки BCRP дикого типа. Затем молекулы характеризовались с использованием молекулярных дескрипторов. Затем набор данных был разделен на обучающие и тестовые подмножества, а также было создано независимое подмножество внешней проверки. На втором этапе соединения в обучающем наборе были представлены как точки в высокоразмерном пространстве в соответствии с их молекулярными дескрипторами. В этом высокоразмерном пространстве определялась гиперплоскость для разделения объектов на субстратные и не-субстратные группы. Поскольку различные гиперплоскости позволяют разделять объекты, необходимо построить гиперплоскость, которая максимизирует запас. На третьем этапе модели, построенные с использованием набора данных обучения, были использованы для расчета точности прогнозирования для набора тестов для оценки моделей. Наконец, модели были проверены с использованием независимого внешнего набора данных.

источник

Ген, который, возможно, относится к целому новому семейству онкогенов, как полагают исследователи из национальной лаборатории Лоренса Беркли при министерстве энергетики США, имеет отношение к резистентности при лечении рака молочной железы хорошо известными и широко используемыми методами.

Одна из ведущих исследователей рака молочной железы в мире, Майна Бисселл, заслуженный деятель науки отделения исследований жизнеобеспечения в лаборатории Беркли, провела исследование, в ходе которого белок, известный как FAM83A, был ассоциирован с резистентностью к препаратам против рака, известным как EGFR-TKI ( рецептор эпидермального фактора роста — ингибиторы тирозинкиназы). Это открытие сможет не только объяснить клинические корреляции между высокой степенью выраженности FAM83A и неблагоприятным прогнозом для больных раком молочной железы, оно может также определить новые элементы, на которые будет направлено воздействие при разработке методов лечения в будущем.

« Резистентность к EGFR-TKI ограничивает их использование при лечении рака молочной железы и до сих пор механизмы, лежащие в основе этой резистентности, в значительной степени являются загадкой», — говорит Бисселл. „Мы продемонстрировали и в культуре клеток, и на мышах, что FAM83A имеет онкогенные свойства, и при избыточной его экспрессии в раковых клетках он обеспечивает резистентность к EGFR-TKI, что способствует расширению и инвазии опухолей“.

Бисселл является соавтором статьи вместе с Саори Фурута, также из отделения исследований жизнеобеспечения в лаборатории Беркли, описывающей данное исследование в издании „Journal of Clinical Investigation (JCI )“.

Терапевтическое воздействие на онкогены может оказаться эффективным способом борьбы с некоторыми видами рака, о чем свидетельствует успешное применение EGFR-TKI для борьбы с раком легких. В то же время, EGFR-TKI не эффективны при лечении рака молочной железы. EGFR-TKI действуют, блокируя добавление EGFR молекулы фосфата к нисходящим сигнальным белкам, этот процес называется фосфорилированием, что является необходимым этапом развития многих видов рака.

„ Мы предположили, что резистентность к EGFR-TKI возникает, по крайней мере, в части случаев, из-за молекулярных изменений, которые активированы процессом фосфорилирования нисходящей сигнализации EGFR“, — говорит Фурута.

Используя уникальную трехмерную клеточную культуру, основанную на фенотипической реверсии, которая первоначально была разработана Бисселл и ее исследовательской группой, соавторы статьи в JCI провели обследование на гены, участвующие в формировании резистентности к EGFR-TKI как в нормальных, так и раковых группах клеток, взятых из грудной железы человека. Они обнаружили, что, хотя нормальные ткани молочной железы человека не синтезируют FAM38A, этот белок присутствует в больших количествах в раковых тканях. Это было верно для каждой группы клеток рака молочной железы, которые они исследовали, и было особенно заметным в тех группах клеток, которые оказались наиболее резистентными к лечению с помощью EGFR-TKI. Дальнейшие исследования показали, что FAM83A вступает во взаимодействие и вызывает фосфорилирование особо важных сигнальных белков, находящихся после EGFR, как и предполагали исследователи. Эта нисходящее фосфорилирование и будет оказывать действие по ослаблению или сведению на нет какого бы то ни было терапевтического эффекта от лечения с помощью EGFR-TKI, который был достигнут перед этим этапом.

Правовая оговорка: редакция MedNovelty.ru не намеревается давать читателям советы или рекомендации медицинского характера. Помните, пожалуйста, что лишь врач может составить профессиональное мнение и дать квалифицированный совет по лечению вашей болезни. Содержание редакционных материалов чаще всего основано на исследованиях, результаты или конечные продукты которых могут быть не одобрены регулирующими органами ввиду незавершенности. Сайт может содержать материалы 12+, 16+, 18+

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова — единственное в России медицинское учреждение, использующее сочетание тандемной трансплантации костного мозга и иммунотерапии для лечения детей с нейробластомой группы высокого риска.

Ученые из Университета ИТМО вместе с зарубежными коллегами предложили наномашины на основе ДНК, которые можно применять для генной терапии рака.

В любом сражении важно предугадать ход противника, его тактические уловки и возможные маневры. Это как в любом противостоянии. В том числе, касающемся серьезных заболеваний, таких, как рак.

Ученые из Северо-западного университета открыли две успешные терапии, которые замедляют прогрессию детской лейкемии, правда, пока у мышей.

Новое исследование подтверждает существующее доказательство того, что выжившие после диагноза детской лимфомы Ходжкина сталкиваются с повышенным риском развития разных типов твердых опухолей многие годы спустя.

Многие пациенты с диагнозом рака прибегают к хирургии как наиболее очевидному методу лечения: почти в 95% случаев раннего выявления опухоли молочной железы, к примеру, назначают именно хирургию.

Вообще-то оксидативный стресс способствует развитию опухоли, однако новый метод лечения доводит его до уровня, на котором вчерашний союзник превращается в палача.

Искусственный интеллект превосходит опытных дерматологов, когда дело доходит до диагностики рака кожи.

Ведущие диетологи советуют включить в ежедневный рацион овсяную кашу. Они уверены в том, что овсянка способна принести гораздо больше пользы, нежели другие виды пищевых продуктов.

Когда в следующий свой визит в супермаркет вы пойдете по овощным и фруктовым рядам, не проходите мимо красного лука.

Впервые ученые из университета штата Вашингтон продемонстрировали способ доставки лекарств к опухоли с помощью клеток крови.

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

В результате того, что раковые клетки становятся устойчивыми к лекарственным препаратам, ежегодно умирает сотни людей. Однако, новое открытие Сьюзан Линдквист способно кардинально изменить ситуацию. Ее исследовательская группа в процессе экспериментов выявили белок, способствующий развитию устойчивости рака молочной железы к гормональной терапии. Это так называемый белок теплового шока, о котором в кругах ученых говорят уже довольно долго. К примеру, известно, что этот белок HSP90 снижает эффективность лекарственных препаратов против грибка и участвует в развитии устойчивости грибков Aspergillus fumigatus и Candida albicans к препаратам.

При этом, если в сочетании с лекарственной противогрибковой терапией использовать препараты, подавляющие работу белка HSP90, то эффект от лечения будет гораздо выше.

Сейчас группа Сьюзан Линдквист говорит о способности белка влиять на процесс лечения раковых опухолей. Специалисты провели несколько исследований на лабораторных животных и культурах клеток. В результате удалось установить, что даже незначительные дозы веществ, тормозящих работу HSP90, позволяют противостоять развитию устойчивости рака к гормональному лечению.

После экспериментов, специалисты предложили сочетание ингибиторы белка и гормональные препараты для наиболее эффективного лечения раковых опухолей.

Сейчас специалисты поводят подготовку к клиническим испытаниям с использованием гормонального препарата фулвестранда и ингибитора белка генетеспиба.

Рак молочной железы наиболее распространенный вид онкологии среди женщин. В исследовательской лаборатории Вашингтонского университета группа ученых разработала вакцину от рака, которая поможет противостоять раку молочной железы. Как отмечают специалисты, вакцина безопасна при метастазировании. Препарат активирует белые кровяные тельца и заставляет их уничтожать раковые клетки, что в конечном итоге приостанавливает развитие ракового процесса.

Работа нового препарата основана на уничтожении белка маммаглобина-а, который ткани груди, пораженные раковыми клетками, вырабатывают в огромных количествах, в то время как в здоровых тканях других частей тела этого белка абсолютно нет.

За счет вакцинации иммунные клетки начинают воздействовать только на те клетки, где концентрация этого белка достигает высоких показателей. В результате препарат действует избирательно и имеет меньшее количество побочных реакций.

Стоит отметить, что вакцина эффективна только в тех случаях, когда при раковом процессе вырабатывается белок маммаглобин-а.

Новый препарат специалисты опробовали на 14 добровольцах (женщинах, у которых был диагностирован рак груди с метастатической формой). При тестировании вакцина могла спровоцировать побочные реакции, в частности, раздражение, сыпь, а также симптомы, напоминающие простуду или грипп. В половине случаев прогрессирование ракового процесса останавливалось в течение 12 месяцев после введения препарата. На данном этапе ученые планируют испытания с участием большего количества людей и на добровольцах с недавно выявленным раком молочной железы.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14]

источник

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

1. Производное дифенилакрилонитрила, представленное формулой (1), или его соль в качестве ингибитора белка резистентности рака молочной железы

где X₁ в кольце А является атомом водорода, гидроксильной группой, атомом галогена, нитрогруппой, аминогруппой, ацетиламиногруппой (-NHCOCH₃), С2-С8-ацилоксигруппой, метоксиэтоксиметоксигруппой или С1-С8-алкоксигруппой;

Х₂ является атомом водорода, гидроксильной группой, С1-С8-алкоксигруппой, атомом галогена, нитрогруппой, аминогруппой, ацетиламиногруппой (-NHCOCH₃), С2-С8-ацилоксигруппой, метоксиэтоксиметоксигруппой, метилендиоксигруппой или С1-С4-алкильной группой;

Х₃ является атомом водорода, гидроксильной группой, С2-С8-ацилоксигруппой, С1-С8-алкоксигруппой, атомом галогена, нитрогруппой, аминогруппой, ацетиламиногруппой (-NHCOCH₃), цианогруппой, формильной группой (-СНО), -COOR₁ (R₁ — атом водорода, С1-С4-алкильная группа),
-О(СН₂)_nCOOR₂ (n — 1-7; R₂ — атом водорода, С1-С4-алкильная группа), -OOCCH₂CH₂COOR₃ (R₃ — атом водорода, С1-С4-алкил, (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрил, гликопиранозильная группа), С2-С8-галогенацилоксигруппой, метилендиоксигруппой, фосфатной группой
(-ОР(О)(ОН)₂) и ее солью, сульфатной группой (-OSO₃H) и ее солью, гликопиранозильной группой и ее солью, фосфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, сульфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, пиперидинопиперидинокарбонилоксигруппой или метоксиэтоксиметоксигруппой,

Y₁ в кольце В является атомом водорода, С2-С8-ацилоксигруппой, трифторметильной группой или С1-С8-алкоксигруппой;

Y₂ является атомом водорода, гидроксильной группой, С2-С8 ацилоксигруппой, метоксиэтоксиметоксигруппой, -COOR₁ (R₁ — атом водорода, С1-С4-алкильная группа), -О(СН₂)_nCOOR₂ (n — 1-7; R₂ — атом водорода, С1-С4-алкильная группа), -OOCCH₂CH₂COOR₃ (R₃ — атом водорода, С1-С4-алкил, (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрил, гликопиранозильная группа), С2-С8-галогенацилоксигруппой, метилендиоксигруппой, фосфатной группой (-ОР(О)(ОН)₂) или ее солью, сульфатной группой (-OSO₃H) или ее солью, гликопиранозильной группой и ее солью, фосфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, сульфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, пиперидинопиперидинокарбонилоксигруппой или C1-С8-алкоксигруппой.

2. Производное дифенилакрилонитрила, представленное формулой (1), или его соль в качестве ингибитора белка резистентности рака молочной железы

где X₁ в кольце А является атомом водорода, гидроксильной группой, атомом галогена, нитрогруппой, аминогруппой, ацетиламиногруппой (-NНСОСН₃), С2-С8-ацилоксигруппой, метоксиэтоксиметоксигруппой или С1-С8-алкоксигруппой, метоксиэтоксиметоксигруппой или С2-С8-алкоксигруппой;

Х₂ является атомом водорода, гидроксильной группой, С1-С8-алкоксигруппой, атомом галогена, нитрогруппой, ацетиламиногруппой (-NHCOCH₃), С2-С8-ацилоксигруппой, метоксиэтоксиметоксигруппой, метилендиоксигруппой или С1-С4-алкильной группой;

Х₃ является атомом водорода, гидроксильной группой, С2-С8-ацилоксигруппой, С1-С8-алкоксигруппой, атомом галогена, нитрогруппой, аминогруппой, ацетиламиногруппой (-NHCOCH₃), цианогруппой, формильной группой (-СНО), -COOR₁ (R₁ — атом водорода, С1-С4-алкильная группа),
-О(СН₂)_nCOOR₂ (n — 1-7; R₂ — атом водорода, С1-С4-алкильная группа), -ООССН₂СН₂СОOR₃ (R₃ — атом водорода, С1-С4-алкил, (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрил, гликопиранозильная группа), С2-С8-галогенацилоксигруппой, метилендиоксигруппой, фосфатной группой
(-ОР(О)(OН)₂) и ее солью, сульфатной группой (-OSO₃H) и ее солью, гликопиранозильной группой и ее солью, фосфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, сульфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, пиперидинопиперидинокарбонилоксигруппой или метоксиэтоксиметоксигруппой,

Y₁ в кольце В является атомом водорода, С2-С8-ацилоксигруппой, трифторметильной группой или С1-С8-алкоксигруппой;

Y₂ является атомом водорода, гидроксильной группой,С2-С8-ацилоксигруппой, метоксиэтоксиметоксигруппой, -COOR₁ (R₁ — атом водорода, С1-С4-алкильная группа), -О(СН₂)_nCOOR₂ (n — 1-7; R₂ — атом водорода, С1-С4-алкильная группа), -ООССН₂СН₂СОOR₃ (R₃ — атом водорода, С1-С4-алкил, (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрил, гликопиранозильная группа), С2-С8-галогенацилоксигруппой, метилендиоксигруппой, фосфатной группой (-ОР(О)(OН)₂) или ее солью, сульфатной группой (-OSO₃H) или ее солью, гликопиранозильной группой и ее солью, фосфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, сульфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, пиперидинопиперидинокарбонилоксигруппой или С1-С8-алкоксигруппой.

3. Производное дифенилакрилонитрила по п.1 или 2 или его соль в качестве агента для преодоления резистентности к противораковым лекарственным средствам или агента, улучшающего действие противоракового лекарственного средства.

4. Производное дифенилакрилонитрила по п.1 или 2 или его соль в качестве противоракового лекарственного средства для лечения рака, причем указанное лекарственное средство содержит противораковое лекарственное средство, которое может служить в качестве субстрата для белка резистентности рака молочной железы, и производное дифенилакрилонитрила по п.1 или 2 или его соль.

5. Производное дифенилакрилонитрила или его соль, выбранное из группы, включающей в себя следующие соединения:

009048 Область техники Данное изобретение относится к ингибитору белка резистентности рака молочной железы (BCRP). Уровень техники Серьезные проблемы, связанные с химиотерапией рака, включают в себя природную резистентность к противораковым лекарственным средствам, что сводит на нет действие противоракового лекарственного средства с самого начала терапии рака и развитие приобретенной резистентности к противораковому лекарственному средству (например, снижение эффективности лекарственного средства, вызванное его долговременным непрерывным введением). Преодоление такой резистентности к противораковым лекарственным средствам рассматривается как средство улучшения эффективности химиотерапии рака, поэтому были предприняты попытки разъяснить различные механизмы резистентности. В частности, считается что экспрессия переносчика лекарственного средства, который активно переносит противораковое лекарственное средство из раковых клеток, тем самым снижая количество внутриклеточной аккумуляции лекарственного средства, играет важную роль в таком механизме резистентности. В частности, считается, что Р-гликопротеин, который представляет собой переносчик лекарственного средства, открытый в 1970-х гг., и который кодирован MDR1-геном, является мощной целевой молекулой агента преодоления мультилекарственной резистентности, так как этот белок вызывает перекрестную резистентность к множеству противораковых лекарственных средств, имеющих различные химические структуры и механизмы действия. Однако постепенно выяснили, что переносчик лекарственного средства, отличный от Р-гликопротеина, также связан с механизмом резистентности к противораковым лекарственным средствам, и возникла необходимость в развитии агента, преодолевающего резистентность, целью которого является такой переносчик лекарственного средства. В таких условиях в 1998 г. был открыт белок резистентности рака молочной железы (BCRP), который представляет собой переносчик лекарственного средства, принадлежащий к группе, которая называется надсемейство переносчиков кассеты АТФ-связывания (ABC), к которому также принадлежит Ргликопротеин (см. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 15665-15670 (1998. BCRP имеет структуру, включающую только одну кассету АТФ-связывания, в отличие от Р-гликопротеина или другого переносчика лекарственного средства, которые имеют две кассеты АТФ-связывания. BCRP глубоко вовлечен в механизм резистентности к ингибитору топоизомеразы I (например, иринотекану гидрохлориду (СРТ-11) или топотекану) или к ингибитору топоизомеразы II (например, митоксантрону). Между тем было выяснено,что BCRP имеет субстратную специфичность, отличную от специфичности Р-гликопротеина, так какBCRP не действует, например, на паклитаксел или винкристин, которые выделяются Р-гликопротеином,и BCRP вовлечен в выделение производного кампотецина (например, СРТ-11 или 7-этил-10 гидроксикампотецин (SN-38: активный метаболит СРТ-11, который редко выделяется внеклеточно Ргликопротеином (см. Cancer Res. 59, 5938-5946 (1999. Кроме того, считают, что BCRP вовлечен в ограничение биодоступности перорально вводимого противоракового лекарственного средства (см. J. ClinOncol. 20, 2943-2950 (2002. С учетом вышесказанного возникает необходимость в развитии ингибитораBCRP, который будет обладать эффектом преодоления резистентности к противораковым лекарственным средствам, которая не преодолевается обычными агентами преодоления резистентности, и улучшать биодоступность противоракового лекарственного средства. До настоящего времени было разработано множество ингибиторов Р-гликопротеина для целей преодоления резистентности к противораковым лекарственным средствам. Однако так как было представлено только несколько специфичных к BCRP ингибиторов, и считается, что такие ингибиторы имеют неудовлетворительное BCRP-ингибирующее действие, все еще существует необходимость в лекарственном средстве, которое обладает более мощным BCRP-ингибирующим действием (см. Mol. Cancer. Ther. 1, 427-434 (2002. Неожиданно было обнаружено, что некоторые производные дифенилакрилонитрила обладают противораковым действием (см. J. Med. Chem. 41, 3022-3032 (1998. Однако производные дифенилакрилонитрила, обладающие эффектом преодоления резистентности к противораковым лекарственным средствам или эффектом ингибирования BCRP, еще не известны. Объектом данного изобретения является ингибитор BCRP. Описание изобретения Для достижения указанной выше цели авторы данного изобретения исследовали множество соединений с помощью колонии раковых клеток, резистентность к противораковым лекарственным средствам которых была получена благодаря BCRP, и обнаружили, что производные дифенилакрилонитрила, представленные следующей формулой (1), обладают мощным BCRP-ингибирующим действием. Данное изобретение составлено на основе этого открытия. Таким образом, в данном изобретении представлен ингибитор BCRP, содержащий в качестве активного ингредиента производное дифенилакрилонитрила, представленное следующей формулой (1),или его соль[где каждый из 8 R, которые являются одинаковыми или разными, является атомом водорода, гидроксильной группой, нитрогруппой, аминогруппой, ацетиламиногруппой (-NHCOCH3-группой), цианогруппой (-CN-группой), формильной группой (-СНО-группой), -COOR1 (R1 является водородом или С 1 С 4-алкилом), -О(СН 2)nCOOR2 (n = 1-7; R2 является водородом или С 1-С 4-алкилом), -OOCCH2CH2COOR3(R3 является водородом, С 1-С 4-алкилом или гликопиранозилом), С 1-С 8-алкоксигруппой, С 1-С 4 алкильной группой, атомом галогена, С 1-С 4-алкоксигруппой, С 2-С 8-ацилоксигруппой, С 2-С 8 галогенацилоксигруппой, метилендиоксигруппой, трифторметильной группой, фосфатной группой (например, -OР(О)(ОН)2) или ее солью, сульфатной группой (например, -OSO3H) или ее солью, гликопиранозильной группой или ее солью, фосфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы или его солью, сульфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы или пиперидинопиперидинокарбонилоксигруппой]; агент для преодоления резистентности к противораковым лекарственным средствам; и агент, улучшающий действие противоракового лекарственного средства. В данном изобретении также представлено противораковое лекарственное средство, содержащее указанный выше ингибитор BCRP, и противораковое лекарственное средство, которое может служить в качестве субстрата для BCRP. Краткое описание чертежей На фиг. 1 представлен уровень резистентности линии клеток A549/SN-38-4 к SN-38 (А) или к митоксантрону (В); на фиг. 2 представлены результаты RT-PCR-анализа экспрессии мРНК различных переносчиков лекарственных средств в линии клеток А 549 и линии клеток A549/SN-38; на фиг. 3 показаны результаты количественного анализа RT-PCR в режиме реального времени экспрессии мРНК BCRP (А) и MRP2 (В) в линии клеток А 549 и линии клеток A549/SN-38; на фиг. 4 показано количество SN-38 (А) или SN-38-глюкуронида (В), аккумулированное в линии клеток А 549 и линии клеток A549/SN-38; на фиг. 5 показано действие производного дифенилакрилонитрила (соединение 1) по преодолению резистентности к SN-38 (А) и резистентности к митоксантрону (9 В) в линии клеток A549/SN-38-4; на фиг. 6 показано действие производных дифенилакрилонитрила [соединение 1 (А), соединение 3(В), соединение 4 (С), соединение 5 (D), соединение 7 (Е) и соединение 13 (F)] по преодолению резистентности к SN-38 в линии клеток P388/BCRP; на фиг. 7 показано действие производного дифенилакрилонитрила (соединение 1) в отношении повышения аккумуляции SN-38 в линии клеток P388/BCRP; на фиг. 8 показано действие различных производных дифенилакрилонитрила в отношении повышения аккумуляции SN-38 в линии клеток MFC-7. Наилучшие способы осуществления данного изобретения Используя действие по преодолению резистентности как показателя, авторы данного изобретения исследовали множество соединений в колониях раковых клеток, резистентность которых к противораковым лекарственным средствам вызвана BCRP, и обнаружили что производные дифенилакрилонитрила,представленные формулой (1), обладают сильным ингибирующим BCRP действием. В формуле (1) особые примеры С 1-С 4-алкильных групп, обозначенных R, включают в себя метил,этил, н-пропил, изопропил и н-бутил; где метил и этил являются особенно предпочтительными. Особые примеры С 1-С 8-алкоксигрупп включают в себя метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси и нбутоксигруппы; где особенно предпочтительными являются метокси, этокси и н-бутокси. Особые примеры атомов галогена включают в себя фтор, хлор, бром и йод; где особенно предпочтительными являются фтор, хлор и бром. С 1-С 4-Алкоксигруппы предпочтительно включают в себя С 1-С 2 алкоксигруппы; где особенно предпочтительной является метоксиэтоксиметоксигруппа. Особые примеры С 2-С 8-ацилоксигрупп включают в себя ацетокси, пропионилокси и бутилилокси. Особые примеры-COOR1-группы включают в себя карбокси, метоксикарбонил и этоксикарбонил; где особенно предпочтительным является метоксикарбонил. Особые примеры группы -О(СН 2)nCOOR2 (n = 1-7) включают в себя -ОСН 2 СООС 2 Н 5, -О(СН 2)2 СООС 2 Н 5 и -О(СН 2)6 СООС 2 Н 5. Особые примеры группы-OOССН 2 СН 2 СOO-тетраацетилглюкопиранозил. Особые примеры С 2-С 8-галогенацилоксигрупп вклю-2 009048 чают в себя Вr(СН 2)7 СОО-группу. Особые примеры гликопиранозильной группы включают в себя -Dглюкопиранозил, -мальтозил, -мальтотриозил и -D-2-деокси-2-аминоглюкопиранозил; где особенно предпочтительными являются -D-глюкопиранозил, -мальтозил и -мальтотриозил. Указанные выше производные дифенилакрилонитрила могут образовывать фармакологически приемлемые соли при добавлении, например, натрия, калия или гидрохлорида, и такие фармакологически приемлемые соли также попадают в объем данного изобретения. Производные дифенилакрилонитрила могут существовать в виде сольватов, и такие сольваты также попадают в объем данного изобретения. Более того, производные дифенилакрилонитрила могут иметь изомеры, и такие изомеры и смеси, содержащие любые из изомеров, также попадают в объем данного изобретения. В одном из предпочтительных вариантов данного изобретения производное дифенилакрилонитрила представлено формулой (1 а)(-ОР(О)(OН)2) или ее солью, сульфатной группой (-OSO3H) или ее солью, гликопиранозильной группой или солью сложного эфира, фосфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы или его солью,сульфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, пиперидинопиперидинокарбонилоксигруппой или метоксиэтоксиметоксигруппой;Y1 в кольце В является атомом водорода, С 2-С 8-ацилоксигруппой, трифторметильной группой или С 1-С 8-алкоксигруппой;Y2 является атомом водорода, гидроксильной группой, С 2-С 8-ацилоксигруппой, метоксиэтоксиметоксигруппой, -COOR1 (R1 = атом водорода, С 1-С 4-алкильная группа), -О(СН 2)nCOOR2 (n = 1-7; R2 = атом водорода, С 1-С 4-алкильная группа), -ООССН 2 СН 2 СОOR3 (R3 = атом водорода, С 1-С 4-алкил, (Z)-2(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрил, гликопиранозильная группа), С 2-С 8-галогенацилоксигруппой, метилендиоксигруппой, фосфатной группой (-ОР(О)(OН)2) или ее солью, сульфатной группой (-OSO3H) или ее солью, гликопиранозильной группой или солью сложного эфира, фосфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы или его солью, сульфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, пиперидинопиперидинокарбонилоксигруппой или С 1-С 8 алкоксигруппой]. В особенно предпочтительном варианте соединения формулы (1 а)X1 в кольце А является атомом водорода, гидроксильной группой, ацетоксигруппой, атомом галогена, нитрогруппой, аминогруппой, ацетиламиногруппой (-NНСОСН 3) или метоксигруппой; Х 2 является атомом водорода, гидроксильной группой, метоксигруппой, этоксигруппой, ацетоксигруппой, атомом галогена, нитрогруппой, ацетиламиногруппой (-NНСОСН 3), метилендиоксигруппой или метильной группой; Х 3 является атомом водорода, гидроксильной группой, ацетоксигруппой, метоксигруппой, атомом галогена, нитрогруппой, аминогруппой, ацетиламиногруппой (-NHCOCH3), метилендиоксигруппой, гликопиранозильной группой и ее солью, фосфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы или его солью, сульфатным сложным эфиром гликопиранозильной группы и солью сложного эфира, фосфатной группой (-ОР(О)(ОН)2) или ее солью, сульфатной группой (-OSO3H) или ее солью, гликопиранозильной группой или солью сложного эфира, пиперидинопиперидинокарбонилоксигруппой или метоксиэтокси-3 009048 метоксигруппой,Y1 в кольце В является атомом водорода, трифторметильной группой или метоксигруппой;Y2 является атомом водорода, гидроксильной группой, метоксиэтоксиметоксигруппой, ацетоксигруппой или метоксигруппой. Кольцо А предпочтительно является моно- — тризамещенным кольцом. Если кольцо А является монозамещенным кольцом, замещение предпочтительно во 2, 3 или 4 положении; если оно является дизамещенным кольцом, замещение предпочтительно во 2,3, 3,4 или 3,5 положениях и для тризамещенного кольца замещение предпочтительно в 3,4,5 положениях. Кольцо В предпочтительно является моно- — тризамещенным кольцом. Если кольцо В является монозамещенным кольцом, замещение предпочтительно в 4 положении; если оно является дизамещенным кольцом, замещение предпочтительно в 3,4 положениях и для тризамещенного кольца замещение предпочтительно в 3,4,5 положениях. Предпочтительные с другой точки зрения соединения, представленные формулой (1 а) в соответствии с данным изобретением, в качестве кольца А содержат следующее: 4-гидроксифенил, 2 гидроксифенил, 4-пиперидинопиперидинокарбонилоксифенил, 4-ацетоксифенил, 4-метоксиэтоксиметоксифенил, 4-гидрокси-3-метоксифенил, 3,4-дигидроксифенил, 3-гидрокси-2-метоксифенил, 3,5 диметил-4-гидроксифенил, 4-гидрокси-3-этоксифенил, 4-бромфенил, 2-фторфенил, 3-фторфенил, 4 фторфенил, 2,3-дифторфенил, 2,4-дифторфенил, 2,5-дифторфенил, 2,6-дифторфенил, 3,4-дифторфенил,3,5-дифторфенил, 2,3,4-трифторфенил, 2,3,5-трифторфенил, 2,3,6-трифторфенил, 2,4,5-трифторфенил,3,4,5-трифторфенил, 4-нитрофенил, 3-нитрофенил, 2-нитрофенил, 4-цианофенил, 4-аминофенил, 3 аминофенил, 4-метоксикарбонилфенил, 4-хлор-3-нитрофенил, 2-фтор-5-нитрофенил, 3-этокси-4-нитрофенил, 4-ООССН 2 СН 2 СООСН 3-фенил, 4-ООССН 2 СН 2 СООС 2 Н 5-фенил, 4D-глюкопиранозилфенил, 4 гидрокси-3-нитрофенил, 3,4-метилендиокси-6-нитрофенил, 3,4-диметоксифенил, 4 мальтозилфенил, 4-мальтотриозилфенил, 2-этокси-5-нитрофенил, 3-гидрокси-4-нитрофенил, 3-фтор-2-гидроксифенил, 3 фтор-4-метоксиэтоксиметоксифенил, 3-фтор-4-гидроксифенил, 4-ОР(О)(ONa)2-фенил, 4-формилфенил,4-ацетокси-3-этоксифенил, 4-ацетокси-3-фторфенил, 4-OOС(СН 2)7 Вr-фенил, 3-метокси-4-ОР(О)(ONa)2 фенил, 4-ОР(О)(ОН)2-фенил, 3-метокси-4-ОР(О)(ОН)2-фенил, 4-ацетиламинофенил, 4D-глюкозо-6’OР(О)(ONa)2)фенил, 4-OSO3H-N(С 2 Н 5)3-фенил, 4-(-D-глюкозо-6′-ОР(О)(ОН)2)фенил. 2-гидрокси-5 нитрофенил и 4-фтор-3-нитрофенил; и в качестве кольца В содержат следующее: 4-н-бутоксифенил, 3,4 диметоксифенил, 3,4,5-триметоксифенил, 4-гидроксифенил, 4-метоксиэтоксиметоксифенил, 4-ацетоксифенил и 3,5-бис-трифторметилфенил при условии, что соединения, в которых оба кольца А и В являются 4-гидроксифенилом, исключены. Среди таких соединений особенно предпочтительными являются следующие соединения:(Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)акрилонитрил. Производные дифенилакрилонитрила (1) или их соли в соответствии с данным изобретением могут,например, быть получены по следующей схеме реакции. где R имеет значения, описанные выше. То есть бензальдегид (2) и бензилцианид (3) подвергают реакции конденсации с получением производного дифенилакрилонитрила (1). Однако если целевым соединением является производное дифенилакрилонитрила (1), в котором R является гидроксильной группой, R-защищенный бензальдегид (2) и Rзащищенный бензилцианид (3) (где защитная группа может быть, например, метоксиметоксигруппой,метоксиэтоксиметоксигруппой, метилтиометоксигруппой, тетрагидропиранилоксигруппой, циклопропилметоксигруппой, бензилоксигруппой, триметилсилилоксигруппой или трет-бутилдиметилсилилоксигруппой) подвергают реакции конденсации с последующим удалением защитных групп. Реакцию конденсации предпочтительно проводят в присутствии основания, такого как алкоксид натрия, гидроксид натрия или гидроксид калия. Если применяется алкоксид натрия, реакцию конденсации проводят в спиртовом растворителе, таком как метанол или этанол, при температуре от комнатной до температуры кипения, если применяется гидроксид натрия, реакцию конденсации проводят в смеси воды и инертного растворителя, такого как метиленхлорид или хлороформ, с добавлением четвертичной аммониевой соли или подобного соединения. После завершения реакции конденсации защитную группу гидроксигруппы удаляют. Удаление предпочтительно проводят гидролизом в присутствии, например, хлористо-водородной кислоты, серной кислоты, уксусной кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты или трифторуксусной кислоты. Также защиту с бензилоксигруппы предпочтительно снимают каталитическим гидрированием в присутствии катализатора, такого как палладий на угле или оксид платины. Соединение дифенилакрилонитрила в соответствии с данным изобретением может вводиться как таковое. Альтернативно, если не снижается эффект в соответствии с данным изобретением, соединение дифенилакрилонитрила может быть смешано с носителем, который обычно применяют для получения лекарственных средств, таким как диспергирующая добавка или наполнитель, и может применяться в виде инъекции или пероральной формы, такой как порошок, раствор, капсулы, суспензия, эмульсия, сироп, эликсир, гранулы, пилюли, таблетки, пастилки или лимонад. Примеры таких носителей включают растворимые в воде моносахариды, олигосахариды и полисахариды, такие как маннит, лактоза и декстрин; гелеобразующие или растворимые в воде целлюлозы, такие как гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза и метилцеллюлоза; абсорбирующие воду и плохо растворяемые в воде целлюлозы, такие как кристаллическая целлюлоза, -целлюлоза, поперечно-сшитая натрий карбоксиметилцеллюлоза и их производные; абсорбирующие воду и плохо растворяемые в воде полисахариды, такие как гидроксипропиловый крахмал, карбоксиметиловый крахмал,поперечно-сшитый крахмал, амилоза, амилопектин, пектин и их производные; абсорбирующие воду и плохо растворяемые в воде смолы, такие как гуммиарабик, трагакантовая смола, глюкоманнан и их производные; поперечно-сшитые виниловые полимеры, такие как поливинилпирролидон, поперечно-сшитая полиакриловая кислота и их соли; поперечно-сшитый поливиниловый спирт, полигидроксиэтилметакрилат и их производные; и жиры, образующие молекулярный агрегат (например, липосомы), такие как фосфолипид и холестерин. Если соединение дифенилакрилонитрила в соответствии с данным изобретением имеет низкую растворимость, соединение может быть подвергнуто солюбилизации. Примеры методик солюбилизации включают методики, которые обычно применяются к лекарственным средствам, такие как методика, в которой поверхностно-активное вещество (например, простой эфир полиоксиэтилена и спирта, сложный эфир полиоксиэтилена и ацила, сложный эфир сорбитана и ацила или эфир полиоксиэтилена, сорбитана и ацила) добавляют к соединению дифенилакрилонитрила, и методика, в которой применяют растворимый в воде полимер (например, полиэитиленгликоль). При желании может применяться, например, методика получения растворимой соли соединения дифенилакрилонитрила или методика получения клатратного соединения с применением циклодекстрина или подобного материала. Методики солюбилизации могут быть соответствующим образом выбраны согласно целевому соединению дифенилакрилонитрила. Ингибитор BCRP может применяться в качестве агента преодоления резистентности к противораковым лекарственным средствам при злокачественных заболеваниях, в которых BCRP-опосредованная резистентность возникает вследствие введения противоракового лекарственного средства. В то же время,ингибитор BCRP может применяться в качестве агента, улучшающего эффективность противоракового-6 009048 лекарственного средства при злокачественных заболеваниях, в которых экспрессируется BCRP и которые имеют низкую чувствительность к противораковым лекарственным средствам. Никаких определенных ограничений не существует для целевого противоракового лекарственного средства агента преодоления резистентности к лекарственному средству или агента, улучшающего эффективность противоракового лекарственного средства, содержащего ингибитор BCRP в качестве активного ингредиента, при условии, что противораковое лекарственное средство может применяться в качестве субстрата для BCRP(далее может быть обозначено как BCRP субстрат). Примеры таких противораковых лекарственных средств включают в себя ингибиторы топоизомеразы I, такие как иринотекан гидрохлорид/СРТ-11 (активный метаболит: SN-38) и топотекан; ингибиторы топоизомеразы II, такие как митоксантрон, доксорубицин, даунорубицин, бизантрен и этопозид; и антифолаты, такие как метотрексат. Доза ингибитора BCRP в соответствии с данным изобретением может быть соответствующим образом определена в соответствии, например, со способом введения или симптомами пациента. Ежедневная доза для взрослого пациента предпочтительно составляет от 1 мг до 10 г, более предпочтительно от 100 мг до 10 г, особенно предпочтительно от 500 мг до 10 г. Никаких определенных ограничений не наложено на соотношение между противораковым лекарственным средством и ингибитором BCRP, предпочтительные соотношения варьируются в зависимости, например, от типа применяемого противоракового лекарственного средства и ингибитора. Если, например, в качестве противоракового лекарственного средства применяется иринотекан гидрохлорид, массовое соотношение противоракового лекарственного средства к ингибитору BCRP предпочтительно составляет от 1:1 до 1:500, особенно предпочтительно от 1:1 до 1:100, более предпочтительно от 1:1 до 1:10. В табл. 1 показаны некоторые особые примеры производных дифенилакрилонитрила, которые могут применяться в соответствии с данным изобретением. Таблица 1 Примеры Далее изобретение более подробно объясняется с помощью примеров, которые не должны считаться ограничивающими данное изобретение. Пример 1. Получение производного дифенилакрилонитрила. Если производное дифенилакрилонитрила синтезируют из исходного материала, имеющего гидроксильную группу (производного бензальдегида или производного бензилцианида), во-первых, гидроксильную группу защищают, используя описанную ниже методику защиты; далее, полученный продукт подвергают процессу конденсации и, наконец, защитную группу удаляют по методике снятия защиты. Если применяется исходный материал, не имеющий гидроксильной группы, исходный материал подвергают процессу конденсации без защиты. Процесс получения 1. Процесс защиты гидроксильной группы производного бензальдегида или производного бензилцианида.MEM = метоксиэтоксиметил Х=-СНО, CH2CN В реакционном сосуде производное бензальдегида или производное бензилцианида, имеющее гидроксильную группу, растворяют в тетрагидрофуране при перемешивании. Реакционный сосуд охлаждают на льду и постепенно добавляют гидрид натрия (содержание: 60%, суспендированный в масле) в количестве, зависящем от числа гидроксильных групп (например, 1,2 экв. (в расчете на -ОН) для одной гидроксильной группы или 2,4 экв. для двух гидроксильных групп). Затем на реакционный сосуд помещают трубку с хлоридом кальция. После прекращения образования водорода добавляют 2 метоксиэтоксиметилхлорид в количестве, зависящем от числа гидроксильных групп (например, 1 экв. (в- 11009048 расчете на -ОН) для одной гидроксильной группы или 2 экв. для двух гидроксильных групп). Далее добавляют диизопропиламин в количестве, стехиометрически эквивалентном добавленному 2 метоксиэтоксиметилхлориду. Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч, при этом трубка с хлоридом кальция находится на реакционном сосуде. После охлаждения полученного продукта нерастворимое вещество удаляют фильтрованием. Полученный раствор в тетрагидрофуране концентрируют досуха при пониженном давлении. Концентрированный продукт разделяют между хлороформом и насыщенным раствором соли. В слой хлороформа добавляют водный раствор гидроксида натрия и полученную смесь разделяют. Полученный слой хлороформа дважды промывают водой. Слой хлороформа сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют досуха при пониженном давлении. С помощью хроматографии на колонке с силикагелем концентрированный продукт элюируют гексаном/хлороформом — хлороформом. Полученную фракцию концентрируют с получением маслянистого продукта. Процесс получения 2. Процесс конденсации производного бензальдегида и производного бензилцианида. Процесс А. Производное бензальдегида и производное бензилцианида в стехиометрически эквивалентных количествах помещают в реакционный сосуд и в него добавляют этанол. Далее на контейнер помещают трубку с хлоридом кальция и производные растворяют в этаноле при перемешивании. Отдельно в контейнере, содержащем н-гексан, взвешивают металлический натрий, постепенно добавляют натрий в контейнер, содержащий этанол, и на него помещают трубку с хлоридом кальция. После полного растворения натрия в этаноле полученный раствор этоксида натрия добавляют в реакционный сосуд. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение одного часа. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и к смеси добавляют воду с последующим удалением этанола выпариванием при пониженном давлении. Полученный остаток разделяют между хлороформом и насыщенным раствором соли. К отделенному слою хлороформа добавляют насыщенный раствор соли и полученную смесь разделяют. Отделенный слой хлороформа сушат над безводным сульфатом натрия, с последующей фильтрацией. К полученному фильтрату добавляют незначительное количество силикагеля для проведения хроматографии на колонке, встряхивают и фильтруют. Растворитель удаляют выпариванием при пониженном давлении. Полученный продукт растворяют в этаноле и к полученному раствору добавляют соответствующее количество активированного угля. Полученную смесь фильтруют с помощью слоя целлита и фильтрат концентрируют. Осажденные кристаллы производного дифенилакрилонитрила фильтруют при пониженном давлении. Эту процедуру повторяют три раза и полученные кристаллы отделяют. Осажденные кристаллы дважды перекристаллизовывают из изопропанола. Полученные кристаллы промывают гексаном и затем сушат. Процесс В. Производное бензальдегида и производное бензилцианида в стехиометрически эквивалентных количествах помещают в реакционный сосуд и растворяют в количестве метиленхлорида, достаточном для растворения сырого материала. К полученному раствору добавляют воду (от 10 до 20 мл),гидроксид натрия (1,2 экв.), вместе с хлоридом метилтриоктиламмония (1,5 экв.), с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 4 ч. После завершения реакции к полученной реакционной смеси добавляют метиленхлорид и рассол, смесь разделяют на фазы и органический слой сушат над безводным сульфатом натрия и затем фильтруют с последующим концентрированием фильтрата. Полученный остаток перекристаллизовывают из изопропанола. Процесс получения 3. Процесс снятия защиты с ОН-защищенного производного дифенилакрилонитрила. Производное дифенилакрилонитрила, имеющее защищенную гидроксильную группу, растворяют в этаноле и к полученному раствору добавляют незначительное количество концентрированной соляной кислоты с последующим перемешиванием в течение целого дня и ночи. Осажденные кристаллы отделяют при пониженном давлении. Полученные кристаллы перекристаллизовывают из изопропанола. Далее подробно описано получение производных дифенилакрилонитрила и результаты их анализа. Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрила (соединение 1).- 12009048 Гидроксильную группу 4-гидроксибензальдегида (24,9 г) защищают с помощью 2-метоксиэтоксиметилхлорида (24,4 г) согласно процессу получения 1 с получением 4-метоксиэтоксиметоксибензальдегида (33,5 г, выход 80%). Полученный таким образом 4-метоксиэтоксиметоксибензальдегид (21,0 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (17,7 г) подвергают конденсации согласно процессу А процесса получения 2 с получением (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-[4-(2-метоксиэтоксиметокси)фенил]акрилонитрила (29,1 г, выход 86%). Отдельно 4-метоксиэтоксиметоксибензальдегид (4,1 г), который получен по описанной выше методике, и 3,4-диметоксибензил цианид (3,4 г) подвергают конденсации согласно процессу В процесса получения 2 с получением (Z)-2-(3,4 диметоксифенил)-3-[4-(2-метоксиэтоксиметокси)фенил]акрилонитрила (5,2 г, выход 73%). Полученный таким образом (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-[4-(2-метоксиэтоксиметокси)фенил]акрилонитрил (10,2 г) подвергают снятию защиты согласно процессу получения 3 с получением целевого продукта (6,22 г, выход 74%). Бледно-желтый кристаллический порошок, МС (APCI, m/z): 282 (МН+),1(Z)-2-(3,4-Диметоксифенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрил (соединение 1) (0,28 г) и 4-пиперидинопиперидинокарбонилхлорид (0,23 г) растворяют в пиридине (5 мл) и полученный раствор перемешивают в течение дня и ночи. После завершения реакции полученную реакционную смесь добавляют в воду (200 мл) и осажденный продукт очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол с получением целевого продукта (0,38 г, выход 79%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 476 (МН+),1 Н-ЯМР (ДМСО-d6)1,47 (3 Н, м), 1,75 (2 Н, м), 2,49 (5 Н, м), 2,85 (1 Н, ушир.т), 3,01 (1 Н, ушир.т),3,71 (1 Н, м), 3,79 (3 Н, с), 3,84 (3 Н, с), 4,03 (1 Н, ушир.д), 4,17 (1 Н, ушир.д), 6,89 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,07 (1 Н,д, J=8 Гц), 7,26 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,27 (2 Н, д, J=8 Гц), 7,33 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,91 (2 Н, д, J=8 Гц), 7,95(1 Н, с). Получение 4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенилацетата (соединение 3). Соединение 1 (0,28 г) ацетилируют уксусным ангидридом с пиридином обычным методом с получением целевого продукта (0,30 г, выход 95%). Белые кристаллы, МС (APCI, m/z): 324 (МН+),1H-ЯМР (CDCl3)2,33 (3 Н, с), 3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,92 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,14 (1 Н, д, J=9 Гц),7,20 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,25 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,40 (1 Н, с), 7,89 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-[4-(2-метоксиэтоксиметокси)фенил]акрилонитрила (соединение 4). Указанное в заголовке соединение получают конденсацией по методике получения соединения 1. Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 370 (МН+),1 Н-ЯМР (ДMCO-d6)3,40 (3 Н, с), 3,56 (2 Н, т, J=8 Гц), 3,84 (2 Н, т, J=8 Гц), 3,88 (3 Н, с), 3,92 (3 Н, с),5,35 (2 Н, с), 6,87 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,14 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,28 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,29 (2 Н, д, J=8 Гц), 7,40(1 Н, д, J=2 Гц), 7,92 (2 Н, д, J=8 Гц), 7,99 (1 Н, с). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(3-гидроксифенил)акрилонитрила (соединение 5). Гидроксильную группу 3-гидроксибензальдегида (1,5 г) защищают с помощью 2-метоксиэтоксиметилхлорида (1,4 г) в соответствии с процессом получения 1 с получением 3-метоксиэтоксиметоксибензальдегида (2,0 г, выход 76%). Полученный 3-метоксиэтоксиметоксибензальдегид (1,9 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (1,6 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением метоксиэтоксиметоксиформы (далее обозначенной как МЭМ-форма) целевого продукта. Далее защитную группу удаляют из МЭМ-формы в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (1,2 г выход 48%). Бледно-желтый кристаллический порошок, МС (APCI, m/z): 282 (МН+),1 Н-ЯМР (ДMCO-d6)3,82 (3 Н, с), 3,87 (3 Н, с), 5,35 (2 Н, с), 6,89 (1 Н, дд, J=8 Гц, 3 Гц), 7,07 (1 Н, д,J=8 Гц), 7,25-7,37 (5 Н, перекрывающийся м), 7,87 (1 Н, с). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(2-гидроксифенил)акрилонитрила (соединение 6). Гидроксильную группу 2-гидроксибензальдегида (3,0 г) защищают с помощью 2-метоксиэтоксиметилхлорида (3,1 г) в соответствии с процессом получения 1 с получением 2-метоксиэтоксиметоксибензальдегида (3,7 г, выход 70%). Полученный 2-метоксиэтоксиметоксибензальдегид (2,0 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (1,7 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением МЭМ-формы целевого продукта. Далее защитную группу удаляют из МЭМ-формы в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (1,4 г, выход 52%). Бледно-желтый кристаллический порошок, МС (APCI, m/z): 282 (МН+),1 Н-ЯМР (ДМСО-d6)3,81 (3 Н, с), 3,85 (3 Н, с), 7,87 (1 Н, дд, J=8 Гц, 1 Гц), 7,92 (1 Н, ушир.с), 6,93J=7 Гц, 1 Гц), 7,87 (1 Н, дд, J=8 Гц, 2 Гц), 7,93 (1 Н, с). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидрокси-3-метоксифенил)акрилонитрила (соединение 7). Гидроксильную группу 4-гидрокси-3-метоксибензальдегида (1,4 г) защищают с помощью 2 метоксиэтоксиметилхлорида (1,7 г) в соответствии с процессом получения 1 с получением 3-метокси-4 метоксиэтоксиметоксибензальдегида (0,8 г, выход 31%). Полученный 3-метокси-4-метоксиэтоксиметоксибензальдегид (0,8 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (0,6 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением МЭМ-формы целевого продукта. Далее защитную группу удаляют из МЭМ-формы в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (0,5 г, выход 51%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 312 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,92 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 3,99 (3 Н, с), 5,94 (1 Н, с), 6,90 (1 Н, д, J=8 Гц), 6,96 (2 Н, д,J=8 Гц), 7,12 (1 Н, с), 7,22 (2 Н, перекрывающийся м), 7,33 (1 Н, с), 7,73 (1 Н, с). Получение (Z)-3-(3,4-дигидроксифенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 8). Гидроксильную группу 3,4-дигидроксибензальдегида (2,0 г) защищают с помощью 2 метоксиэтоксиметилхлорида (3,6 г) в соответствии с процессом получения 1 с получением 3,4 бис(метоксиэтоксиметокси)бензальдегида (3,6 г, выход 89%). Полученный 3,4-бис(метоксиэтоксиметокси)бензальдегид (3,5 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (2,0 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением МЭМ-формы целевого продукта. Далее защитную группу удаляют из МЭМ-формы в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (1,6 г, выход 50%). Желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 298 (МН+),1 Н-ЯМР (ДМСО-d6)3,85 (3 Н, с), 3,92 (3 Н, с), 6,85 (1 Н, д, J=8 Гц), 6,94 (2 Н, д, J=8 Гц), 7,22 (3 Н, м),7,48 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,49 (1 Н, с), 7,70 (1 Н, с), 9,33 (1 Н, с), 7,69 (1 Н, с). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(3-гидрокси-2-метоксифенил)акрилонитрила (соединение 9). Гидроксильную группу 2-метокси-3-гидроксибензальдегида (2,0 г) защищают с помощью 2 метоксиэтоксиметилхлорида (3,6 г) в соответствии с процессом получения 1 с получением 2,4 бис(метоксиэтоксиметокси)бензальдегида (4,5 г, количественный выход). Полученный 2,4 бис(метоксиэтоксиметокси)бензальдегид (4,0 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (2,2 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением МЭМ-формы целевого продукта. Далее защитную группу удаляют из МЭМ-формы в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (2,5 г, выход 67%). Желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 312 (МН+),1H-ЯMP (ДМСО-d6)3,32 (3 Н, с), 3,80 (3 Н, с), 3,84 (3 Н, с), 7,05 (2 Н, м) , 7,24 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц),7,28 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,38 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,49 (1 Н, с), 7,76 (1 Н, с), 9,36 (2 Н, ушир.с). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)акрилонитрила (соединение 10). Гидроксильную группу 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида (2,3 г) защищают с помощью 2 метоксиэтоксиметилхлорида (3,4 г) в соответствии с (процессом получения 1) с получением 3,5-диметил 4-метоксиэтоксиметоксибензальдегида (2,7 г, выход 62%). Полученный 3,5-диметил-4-метоксиэтоксиметоксибензальдегид (2,0 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (1,5 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением МЭМ-формы целевого продукта. Далее защитную группу удаляют из МЭМ-формы в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (1,5 г, выход 57%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 310 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)2,30 (6 Н, с), 3,92 (3 Н, с), 3,95 (3 Н, с), 6,89 (2 Н, д, J=8 Гц), 7,12 (1 Н, с), 7,20 (1 Н,дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,27 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,56 (2 Н, с). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(3-этокси-4-гидроксифенил)акрилонитрила (соединение 11). Гидроксильную группу 3-этокси-4-гидроксибензальдегида (2,0 г) защищают с помощью 2-метоксиэтоксиметилхлорида (1,5 г) в соответствии с процессом получения 1 с получением 3-этокси-4-метоксиэтоксиметоксибензальдегида (2,8 г, выход 91%). Полученный 3-этокси-4-метоксиэтоксиметоксибензальдегид (2,8 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (2,0 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением МЭМ-формы целевого продукта. Далее защитную группу удаляют из МЭМ-формы в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (1,35 г, выход 37%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 326 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)1,49 (3 Н, т, J=8 Гц), 3,92 (3 Н, с), 3,95 (3 Н, с), 4,22 (2 Н, д, J=8 Гц), 6,90 (2 Н, дд,J=2 Гц, 8 Гц), 6,96 (2 Н, д, J=8 Гц), 7,11 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,22 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,32 (1 Н, с), 7,72 (2 Н, д,J=2 Гц). Получение (Z)-3-(4-бромфенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 12).- 14009048 4-Бромбензальдегид (2,0 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (1,9 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (2,9 г, выход 78%). Желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 346 (МН 2), 344 (МН+); 1 Н-ЯМР (CDCl3)3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,92 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,26 (2 Н, перекрывающийся м), 7,35(1 Н, с), 7,59 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,73 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(3-фторфенил)акрилонитрила (соединение 13). 3-Фторбензальдегид (2,0 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (2,9 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (0,7 г, выход 15%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 284 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,92 (1 Н, д, J=10 Гц), 7,11 (1 Н, дд, J=2 Гц, 14 Гц), 7,24(1 Н, д, J=2 Гц), 7,27 (1 Н, дд, J=2 Гц, 10 Гц), 7,38 (1 Н, с), 7,42 (1 Н, дд, J=8 Гц, 14 Гц), 7,60 (1 Н, дд, J=8 Гц,14 Гц). Получение (Z)-2-(4-бутоксифенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрила (соединение 14). 4-Гидроксибензил цианид (5,0 г) и 1-бромбутан (5,7 г) растворяют в диметилформамиде (100 мл) и к полученному раствору добавляют карбонат калия (6,2 г) с последующим нагреванием при температуре 80 С в течение 1 ч, тем самым давая осуществиться реакции. После завершения реакции полученную реакционную смесь охлаждают и затем разделяют между насыщенным раствором соли и этилацетатом. Полученный слой этилацетата сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют. Концентрированный продукт очищают хроматографией на колонке с силикагелем, применяя гексан/этилацетат (4:1), с получением 4-бутоксибензил цианида (5,1 г, выход 70%). Полученный 4-бутоксибензил цианид (2,0 г) и 4-метоксиэтоксиметоксибензальдегид (2,2 г), полученный в процессе получения соединения 1, конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением МЭМ-формы целевого продукта. Далее защитную группу удаляют из МЭМ-формы в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (0,7 г, выход 23%). Бледно-желтый кристаллический порошок, МС (APCI, m/z): 294 (МН+),1H-ЯМР (ДMCO-d6)0,94 (3 Н, т, J=10 Гц), 1,44 (2 Н, секстет, J=10 Гц), 1,71 (2 Н, квинтет, J=10 Гц),4,00 (2 Н, т, J=10 Гц), 6,88 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,03 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,62 (2 Н, д, J=2 Гц), 7,73 (1 Н, с), 7,82 (2 Н,д, J=9 Гц). Получение (Z)-3-(4-гидроксифенил)-2-(3,4,5-триметоксифенил)акрилонитрила (соединение 15). 3,4,5-Триметоксибензил цианид (1,9 г) и 4-метоксиэтоксиметоксибензальдегид (2,0 г), полученный в процессе получения соединения 1, конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением МЭМ-формы целевого продукта. Далее защитную группу удаляют из МЭМ-формы в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (1,2 г, выход 41%). Желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 312 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,89 (3 Н, с), 3,93 (6 Н, с), 6,06 (1 Н, ушир.с), 6,84 (2 Н, с), 6,94 (2 Н, д, J=12 Гц), 7,39(1 Н, с), 7,82 (2 Н, д, J=12 Гц). Получение (Z)-2,3-бис-(4-гидроксифенил)акрилонитрила (соединение 16). 4-Гидроксибензилцианид (4,3 г) и 2-метоксиэтоксиметилхлорид (4,1 г) подвергают реакции в соответствии с процессом получения 1 с получением 4-метоксиэтоксиметоксибензил цианида (5,4 г, выход 75%). Полученный 4-метоксиэтоксиметоксибензил цианид (2,1 г) и 4-метоксиэтоксиметоксибензальдегид (2,0 г), полученный в процессе получения соединения 1, конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением МЭМ-формы целевого продукта. Далее защитную группу удаляют из МЭМ-формы в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (1,1 г, выход 49%). Бледные желто-зеленые кристаллы, МС (APCI, m/z): 238 (МН+),1 Н-ЯМР (ДМСО-d6)6,87 (1 Н, д, J=9 Гц), 6,89 (1 Н, д, J=2 Гц, 9 Гц), 7,53 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,67 (1 Н,с), 7,79 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрила, натриевой соли (соединение 17). Соединение 1 (281 мг) растворяют в этаноле. К полученному раствору добавляют водный раствор гидроксида натрия (в количестве, стехиометрически эквивалентном количеству соединения 1) с последующим перемешиванием при комнатной температуре. Полученную смесь концентрируют при пониженном давлении и осажденные кристаллы отделяют фильтрацией с последующей перекристаллизацией с получением целевого продукта (270 мг, выход 90%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 280 (M-Na+),1 Н-ЯМР (ДMCO-d6)3,76 (3 Н, с), 3,82 (3 Н, с), 6,19 (1 Н, д, J=9 Гц), 6,96 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,05 (1 Н, дд,J=2 Гц, 9 Гц), 7,11 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,41 (1 Н, с), 7,58 (1 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-фторфенил)акрилонитрила (соединение 18). 4-Фторбензальдегид (620 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (880 мг) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (1,02 г, выход 72%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 283 (М-),- 15009048 1 Н-ЯМР (CDCl3)3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,92 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,11-7,18 (2 Н, м), 7,13 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,25 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,39 (1 Н, с), 7,84-7,90 (2 Н, м). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-нитрофенил)акрилонитрила (соединение 19). 4-Нитробензальдегид (760 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (890 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (1,31 г, выход 85%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 310 (М-),1H-ЯMP (CDCl3)3,95 (3 Н, с), 3,98 (3 Н, с), 6,95 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,17 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,32 (1 Н, дд,J=2 Гц, 9 Гц), 7,47 (1 Н, с), 8,01 (2 Н, д, J=9 Гц), 8,32 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(2-фторфенил)акрилонитрила (соединение 20). 2-Фторбензальдегид (620 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (880 мг) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (562 мг, выход 40%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 283 (М-),1H-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,93 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,11-7,18 (1 Н, м), 7,17 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,23-7,29 (1 Н, м), 7,29 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,37-7,45 (1 Н, м), 7,66 (1 Н, с), 8,20-8,25 (1 Н, м). Получение 4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]бензонитрила (соединение 21). 4-Цианобензальдегид (1,97 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (1,80 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (3,33 г, выход 77%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 290 (М-),1H-ЯМР (CDCl3)3,95 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,94 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,16 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,30 (1 Н, дд,J=2 Гц, 9 Гц), 7,43 (1 Н, с), 7,75 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,95 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-3-(2,3-дифторфенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 22). 2,3-Дифторбензальдегид (426 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (532 мг) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (813 мг, выход 90%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 301 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,94 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,17 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,17-7,28 (2 Н,м), 7,31 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,62 (1 Н, с), 7,95-8,01 (1 Н, м). Получение (Z)-3-(2,4-дифторфенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 23). 2,4-Дифторбензальдегид (142 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (177 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (92 мг, выход 31%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 301 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,94, (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,88-6,94 (1 Н, м), 6,93 (1 Н, д, J=8 Гц), 6,98-7,04 (1 Н, м),7,15 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,28 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,57 (1 Н, с), 8,21-8,28 (1 Н, м). Получение (Z)-3-(2,5-дифторфенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 24). 2,5-Дифторбензальдегид (1,42 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (1,77 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (2,20 г, выход 73%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 301 (M-),1H-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,93 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,07-7,14 (2 Н, м), 7,16 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,30 (1 Н, д, J=2 Гц, 9 Гц), 7,58 (1 Н, с), 7,92-7,98 (1 Н, м). Получение (Z)-3-(3,4-дифторфенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 25). 3,4-Дифторбензальдегид (426 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (532 мг) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (780 мг, выход 86%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 301 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,93 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,13 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,25 (1 Н, дд,J=2 Гц, 8 Гц), 7,21-7,29 (1 Н, м), 7,32 (1 Н, с), 7,57-7,62 (1 Н, м), 7,71-7,78 (1 Н, м). Получение (Z)-3-(3,5-дифторфенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 26). 3,5-Дифторбензальдегид (1,42 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (1,77 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (2,10 г, выход 69%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 301 (М-),1H-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,84-6,91 (1 Н, м), 6,93 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,13 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,27 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,32 (1 Н, с), 7,36-7,43 (1 Н, м). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(2,3,4-трифторфенил)акрилонитрила (соединение 27). 2,3,4-Трифторбензальдегид (160 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (177 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (90 мг, выход 30%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 319 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,94 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,05-7,14 (1 Н, м), 7,15 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,29 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,52 (1 Н, с), 7,93-8,02 (1 Н, м). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(2,3,5-трифторфенил)акрилонитрила (соединение 28). 2,3,5-Трифторбензальдегид (320 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (354 мг) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (536 мг, выход 84%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 319 (M-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,95 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,94 (1 Н, д, J=8 Гц), 6,95-7,05 (1 Н, м), 7,16 (1 Н, д, J=2- 16009048 Гц), 7,31 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,56 (1 Н, с), 7,71-7,77 (1 Н, м). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(2,3,6-трифторфенил)акрилонитрила (соединение 29). 2,3,6-Трифторбензальдегид (320 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (354 мг) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (549 мг, выход 86%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 319 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,94 (1 Н, д, J=9 Гц), 6,93-6,99 (1 Н, м), 7,17 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,17 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,18-7,26 (1 Н, м), 7,27 (1 Н, с), 7,32 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(2,4,5-трифторфенил)акрилонитрила (соединение 30). 2,4,5-Трифторбензальдегид (160 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (177 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (80 мг, выход 26%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 319 (М-),1H-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,93 (1 Н, д, J=9 Гц), 6,99-7,06 (1 Н, м), 7,14 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,28 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,51 (1 Н, с), 8,07-8,16 (1 Н, м). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(3,4,5-трифторфенил)акрилонитрила (соединение 31). 3,4,5-Трифторбензальдегид (160 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (177 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (60 мг, выход 19%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 319 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,93 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,11 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,25 (1 Н, с),7,26 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,48-7,56 (1 Н, м). Получение (Z)-3-(2,6-дифторфенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 32). 2,6-Дифторбензальдегид (284 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (354 мг) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (358 мг, выход 40%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 301 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,93 (1 Н, д, J=9 Гц), 6,98-7,05 (2 Н, дд, м), 7,17 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,31 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,32 (1 Н, с), 7,33-7,42 (1 Н, м). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(3-нитрофенил)акрилонитрила (соединение 33). 3-Нитробензальдегид (3,02 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (3,54 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (6,01 г, выход 97%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 310 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,95 (3 Н, с), 3,98 (3 Н, с), 6,95 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,17 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,31 (1 Н, дд,J=2 Гц, 9 Гц), 7,49 (1 Н, с), 7,68 (1 Н, т, J=8 Гц), 8,27 (1 Н, ддд, J=1 Гц, 2 Гц, 8 Гц), 8,33 (1 Н, ддд, J=1 Гц, 2 Гц, 8 Гц), 8,56 (1 Н, т, J=2 Гц). Получение (Z)-3-(4-аминофенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 34). Соединение 19 растворяют в уксусной кислоте. К полученному раствору добавляют порошок цинка и полученную смесь перемешивают в течение 4 ч. Смесь концентрируют досуха при пониженном давлении с последующей очисткой с применением колонки с силикагелем с получением целевого продукта(760 мг, выход 95%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 281 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,91 (3 Н, с), 3,95 (3 Н, с), 6,71 (2 Н, д, J=9 Гц), 6,90 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,11 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,20 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,29 (1 Н, с), 7,75 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение этил-[4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенокси]ацетата (соединение 35). Соединение 1 (281 мг) и этилхлорацетат (245 мг) растворяют в ацетоне и к полученному раствору добавляют карбонат калия с последующим кипячением с обратным холодильником в течение 3 ч. Полученную смесь фильтруют и нерастворенное вещество удаляют из смеси. Полученный фильтрат концентрируют досуха при пониженном давлении с последующей перекристаллизацией с получением целевого продукта (124 мг, выход 34%). Белые кристаллы, МС (APCI, m/z): 368 (МН+),1(2 Н, д, J=9 Гц). Получение метил-4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]бензоата (соединение 36). Метил-4-формилбензоат (1,64 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (1,77 г) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (0,97 г, выход 30%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 323 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,95 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,94 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,16 (1 Н, д, J=2 Гц),7,30 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,46 (1 Н, с), 7,92 (2 Н, д, J=9 Гц), 8,12 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(2-нитрофенил)акрилонитрила (соединение 37). 2-Нитробензальдегид (1,51 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (1,77 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (2,59 г, выход 84%). Желто-оранжевые кристаллы, МС (APCI, m/z): 310 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,95 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,95 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,19 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,33 (1 Н, дд,- 17009048J=2 Гц, 9 Гц), 7,62 (1 Н, ушир.т), 7,78 (1 Н, ушир.т), 7,93 (1 Н, с), 7,94 (1 Н, д, J=8 Гц,), 8,24 (1 Н, д, J=8 Гц). Получение (Z)-3-(4-хлор-3-нитрофенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 38). 4-Хлор-3-нитробензальдегид (557 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (532 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (372 мг, выход 36%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 343 (М-Н-),1H-ЯMP (CDCl3)3,95 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,95 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,14 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,29 (1 Н, дд,J=2 Гц, 9 Гц), 7,38 (1 Н, с), 7,66 (1 Н, д, J=9 Гц), 8,15 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц) , 8,23 (1 Н, д, J=2 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(2-фтор-5-нитрофенил)акрилонитрила (соединение 39). 2-Фтор-5-нитробензальдегид (85 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (89 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (24 мг, выход 15%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 328 (М-),1H-ЯМР (CDCl3)3,95 (3 Н, с), 3,98 (3 Н, с), 6,95 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,18 (1 Н, дд, J=2 Гц), 7,31 (1 Н, д,J=9 Гц), 7,34 (1 Н, д, J=2 Гц, 9 Гц), 7,57 (1 Н, с), 8,32 (1 Н, ддд, J=3 Гц, 4 Гц, 9 Гц), 9,08 (1 Н, дд, J=3 Гц, 6 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-этокси-3-нитрофенил)акрилонитрила (соединение 40). 4-Этокси-3-нитробензальдегид (586 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (532 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (425 мг, выход 40%). Желто-оранжевые кристаллы, МС (ESI, m/z): 354 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)1,52 (3 Н, т, J=7 Гц), 3,95 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 4,27 (2 Н, кв., J=7 Гц), 6,94 (1 Н, д,J=9 Гц), 7,12 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,16 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,25 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,34 (1 Н, с), 8,16 (1 Н, д, J=2 Гц), 8,26 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц). Получение 4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенилметилсукцината (соединение 41). Соединение 1 (50 мг) и хлорид монометилового эфира янтарной кислоты (44 мкл) растворяют в пиридине (1 мл) с последующим перемешиванием в течение дня и ночи. После завершения реакции полученную реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении, очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол с получением целевого продукта (63 мг, выход 90%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 396 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)2,77 (2 Н, дд, J=6 Гц, 7 Гц), 2,92 (2 Н, дд, J=6 Гц, 7 Гц), 3,74 (3 Н, с), 3,93 (3 Н, с),3,96 (3 Н, с), 6,92 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,14 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,21 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,26 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,40(1 Н, с), 7,89 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение 4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенилэтилсукцината (соединение 42). Соединение 1 (50 мг) и хлорид моноэтилового эфира янтарной кислоты (51 мкл) растворяют в пиридине (1 мл) с последующим перемешиванием в течение дня и ночи. После завершения реакции полученную реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении с последующей очисткой хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол с получением целевого продукта (73 мг, выход 90%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 410 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)1,29 (3 Н, т, J=7 Гц), 2,75 (2 Н, дд, J=6 Гц, 8 Гц), 2,91 (2 Н, дд, J=6 Гц, 8 Гц), 3,93(3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 4,20 (2 Н, дд, J=7 Гц, 14 Гц), 6,92 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,14 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,21 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,26 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,40 (1 Н, с), 7,90 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение бис 4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенилсукцината (соединение 43). Соединение 1 (50 мг) и сукцинилдихлорид (20 мкл) растворяют в пиридине (1 мл) с последующим перемешиванием в течение дня и ночи. После завершения реакции полученную реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении, очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол с получением целевого продукта (56 мг, выход 98%). Бледно-желтые кристаллы, МС (EI, m/z): 644 (М+),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,05 (4 Н, с), 3,93 (6 Н, с), 3,96 (6 Н, с), 6,92 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,14 (2 Н, д, J=2 Гц),7,23 (4 Н, д, J=9 Гц), 7,26 (2 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,41 (2 Н, с), 7,91 (4 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4D-глюкопиранозилфенил)акрилонитрила (соединение 44). Соединение 1 (1,71 г) растворяют в ацетоне и к полученному раствору добавляют -Dацетобромглюкозу (10,0 г) и карбонат калия (3,57 г) с последующим кипячением/нагреванием с обратным холодильником в течение дня и ночи при энергичном перемешивании. Полученную смесь фильтруют, удаляя нерастворимое вещество. Фильтрованный продукт промывают хлороформом и смешивают с полученным выше фильтратом, и полученную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем, применяя систему хлороформ/метанол. Очищенный продукт суспендируют в безводном метаноле и к полученной суспензии по каплям добавляют 28% NaOMe с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 0,5 ч. К полученной смеси добавляют воду и смесь нейтрализуют ионообменной смолой (сульфоновая кислота — +Н тип). Смолу удаляют фильтрацией и смесь концентрируют досуха при пониженном давле- 18009048 нии с последующей очисткой хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол с получением целевого продукта (696 мг, выход 26%). Бледно-желтые кристаллы, МС (EI, m/z): 443 (М+),1 Н-ЯМР (ДМСО-d6)3,21 (1 Н, т, J=9 Гц), 3,31 (1 Н, т, J=9 Гц), 3,35 (1 Н, т, J=9 Гц), 3,44 (1 Н, м), 3,50(140 мг) снимают защиту в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (72 мг, выход 60%). Желто-оранжевые кристаллы, МС (APCI, m/z): 327 (МН+),1H-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,94 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,13 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,27 (1 Н, дд,J=2 Гц, 9 Гц), 7,28 (1 Н, д, J=9 Гц) , 7,36 (1 Н, с), 8,29 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 8,51 (1 Н, д, J=2 Гц), 10,77 (1 Н,с). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(6-нитробензо[1,3]диоксол-5-ил)акрилонитрила (соединение 46). 6-Нитропиперонал (195 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (177 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (124 г, выход 35%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 354 (M-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,21 (2 Н, с), 6,94 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,17 (1 Н, д, J=2 Гц),7,28 (1 Н, с), 7,30 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,72 (1 Н, с), 7,88 (1 Н, с). Получение (Z)-3-(3,4-диметоксифенил)-2-[4-(2-метоксиэтоксиметокси)фенил]акрилонитрила (соединение 47). Гидроксильную группу 4-гидроксибензил цианида (26,63 г) защищают с применением 2-метоксиэтоксиметилхлорида (24,42 г) в соответствии с процессом получения 1 с получением МЭМ-формы (24,39 г, выход 55%). Полученную МЭМ-форму (22,13 г) и 3,4-диметоксибензальдегид (16,62 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (29,79 г, выход 81%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 370 (МН+),1(2 Н, с), 6,92 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,11 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,34 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,38 (1 Н, с), 7,58 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,69 (1 Н, д, J=2 Гц). Получение (Z)-3-(3,4-диметоксифенил)-2-(4-гидроксифенил)акрилонитрила (соединение 48). Защитную группу соединения 47 (18,45 г) удаляют в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (8,38 г, выход 60%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 282 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,94 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,90 (1 Н, д, J=9 Гц), 6,92 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,33 (1 Н, дд,J=2 Гц, 8 Гц), 7,34 (1 Н, с), 7,54 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,67 (1 Н, д, J=2 Гц). Получение (Z)-2-(3,5-бис(трифторметил)фенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрила (соединение 49). 4-Метоксиэтоксиметоксибензальдегид (420 мг) и 3,5-бис(трифторметил)фенилацетонитрил (506 мг) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 и с полученного продукта снимают защиту в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (122 мг, выход 17%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 356 (М-Н-),1 Н-ЯМР (CDCl3)6,96 (2 Н, ушир.д), 7,57 (1 Н, с), 7,87 (1 Н, с), 7,91 (2 Н, ушир.д), 8,06 (2 Н, с). Получение (Е)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидроксифенил)акрилонитрила (соединение 50). Соединение 1 (100 мг) растворяют в ацетонитриле и полученный раствор подвергают фотореакции с применением ртутной лампы высокого давления. Полученную реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении с последующей очисткой на колонке с силикагелем с получением целевого продукта (41 мг, выход 41%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 282 (МН+),1- 19009048 Соединение 1 (224 мг) растворяют в ацетоне и к полученному раствору добавляют -D-ацетоброммальтозу (2,23 г) и карбонат калия (468 мг) с последующим кипячением/нагреванием с обратным холодильником в течение дня и ночи при энергичном перемешивании. Полученную смесь фильтруют с удалением нерастворимого вещества. Фильтрованный продукт промывают хлороформом и смешивают с полученным выше фильтратом, полученную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением хлороформа/метанола. Очищенный продукт суспендируют в безводном метаноле и к полученной суспензии по каплям добавляют 28% NaOMe с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 0,5 ч. К полученной смеси добавляют воду и смесь нейтрализуют ионообменной смолой (сульфоновая кислота-+Н тип). Смолу удаляют фильтрацией, смесь концентрируют досуха при пониженном давлении и очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол с получением целевого продукта (195 мг, выход 27%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 604 (М-Н-),1 Н-ЯМР (ДMCO-d6)3,11 (1 Н, т, J=9 Гц), 3,28 (1 Н, дд, J=4 Гц, 10 Гц), 3,81 (3 Н, с), 3,86 (3 Н, с), 5,05(1 Н, д, J=8 Гц), 5,09 (1 Н, д, J=3 Гц), 7,07 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,18 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,25 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц),7,29 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,84 (1 Н, с), 7,89 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(2-этокси-5-нитрофенил)акрилонитрила (соединение 52). 2-Этокси-5-нитробензальдегид (390 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (354 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (319 мг, выход 45%). Желто-оранжевые кристаллы, МС (ESI, m/z): 354 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)1,52 (3 Н, т, J=7 Гц), 3,95 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 4,24 (2 Н, кв., J=7 Гц), 6,95 (1 Н, д,J=9 Гц), 7,00 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,17 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,30 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,70 (1 Н, с), 8,29 (1 Н, дд, J=3 Гц, 9 Гц), 8,92 (1 Н, дд, J=3 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(3-гидрокси-4-нитрофенил)акрилонитрила (соединение 53). Гидроксильную группу 3-гидрокси-4-нитробензальдегида (0,67 г) защищают с применением 2 метоксиэтоксиметилхлорида (0,50 г) в соответствии с процессом получения 1 с получением МЭМ-формы(0,97 г, выход 95%). Полученную МЭМ-форму (944 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (673 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3[3-(2-метоксиэтоксиметокси)-4-нитрофенил]акрилонитрила (515 мг, выход 34%). С полученного (Z)-2(3,4-диметоксифенил)-3-[3-(2-метоксиэтоксиметокси)-4-нитрофенил]акрилонитрила (350 мг) снимают защиту в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (267 мг, выход 97%). Желто-оранжевые кристаллы, МС (ESI, m/z): 325 (М-Н-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,95 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,95 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,16 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,321 (1 Н, дд,J=2 Гц, 9 Гц), 7,37 (1 Н, с), 7,52 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,56 (1 Н, д, J=2 Гц), 8,12 (1 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4 мальтотриозилфенил)акрилонитрила (соединение 54). Соединение 1 (791 мг) растворяют в ацетоне, к полученному раствору добавляют -Dацетоброммальтотриозу (11,1 г) и карбонат калия (1,11 г) с последующим кипячением/нагреванием с обратным холодильником в течение дня и ночи при энергичном перемешивании. Полученную смесь фильтруют с удалением нерастворимого вещества. Фильтрованный продукт промывают хлороформом и смешивают с полученным выше фильтратом и полученную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол. Очищенный продукт суспендируют в безводном метаноле и к полученной суспензии по каплям добавляют 28% NaOMe с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 0,5 ч. К полученной смеси добавляют воду и смесь нейтрализуют ионообменной смолой (сульфоновая кислота-+Н тип). Смолу удаляют фильтрацией и смесь концентрируют досуха при пониженном давлении и очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол с получением целевого продукта (368 мг, выход 17%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 766 (М-Н-),1 Н-ЯМР (ДМСO-d6)3,07 (1 Н, т, J=9 Гц), 3,25 (1H, дд, J=4 Гц, 9 Гц), 3,81 (1 Н, с), 3,86 (1 Н, с), 5,02- 20009048 снимают защиту в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (140 мг, выход 29%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 300 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,92 (1 Н, д, J=9 Гц), 6,93-6,99 (1 Н, м), 7,12-7,17 (1 Н, м),7,18 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,30 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,80 (1 Н, с), 7,93 (1 Н, д, J=8 Гц). Получение (Z)-2,3-бис-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 56). 3,4-Диметоксибензальдегид (1,00 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (1,07 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (1,75 г, выход 89%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 326 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,93 (3 Н, с), 3,95 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 3,98 (3 Н, с), 6,91 (1 Н, д, J=9 Гц), 6,93 (1 Н, д,J=9 Гц), 7,13 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,24 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,35 (1 Н, с), 7,36 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,67 (1 Н,д, J=2 Гц). Получение (Z)-3-(3-аминофенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 57). Соединение 33 (1,80 г) растворяют в уксусной кислоте. К полученному раствору добавляют порошок цинка и смесь перемешивают в течение 4 ч. Смесь концентрируют досуха при пониженном давлении и очищают на колонке с силикагелем с получением целевого продукта (1,30 г, выход 80%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 281 (МН+),1 Н-ЯMP (CDCl3)3,81 (2 Н, ушир.с), 3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,75 (1 Н, ддд, J=1 Гц, 2 Гц, 9 Гц), 6,92(4,98 г, выход 78%). Полученную МЭМ-форму (4,98 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (3,87 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением целевого продукта (6,55 г, выход 78%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 284 (М-СН 2 ОСН 2 СН 2 ОСН 3-),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,38 (3 Н, с), 3,56-3,60 (2 Н, м), 3,87-3,91 (2 Н, м), 3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,92 (1 Н,д, J=8 Гц), 7,12 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,24 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,30 (1 Н, т, J=9 Гц), 7,31 (1 Н, с), 7,56 (1 Н, дд,J=2 Гц, 9 Гц), 7,60 (1 Н, дд, J=2 Гц, 12 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(3-фтор-4-гидроксифенил)акрилонитрила (соединение 59). С соединения 58 (6,00 г) снимают защиту в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (4,44 г, выход 96%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 298 (М-Н-),1 Н-ЯМР (CDCl3+CD3OD)3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,93 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,01 (1 Н, т, J=9 Гц), 7,12(1 Н, д, J=2 Гц), 7,22 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,32 (1 Н, с), 7,51 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,69 (1 Н, дд, J=2 Гц, 12 Гц). Получение моно-4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенилфосфата натрия (соединение 60). Соединение 70 (103 мг) растворяют в этаноле и к полученному раствору добавляют метоксид натрия с последующим перемешиванием в течение 12 ч. Полученную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении и затем полученный продукт растворяют в воде. Полученный раствор промывают этилацетатом и полученный водный слой сушат вымораживанием с получением целевого продукта (112 мг, выход 97%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 360 (M-2Na+H-),1H-ЯМР (D2O)3,71 (3 Н, с), 3,75 (3 Н, с), 6,88 (1 Н, д, J=8 Гц), 6,99 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,07 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,22 (2 Н, д, J=8 Гц), 7,43 (1 Н, с), 7,70 (2 Н, д, J=8 Гц). Получение 4-[(Z)-1-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенилацетата (соединение 61). Соединение 48 (1,41 г) ацетилируют уксусным ангидридом и пиридином обычным способом с получением целевого продукта (1,52 г, выход 94%). Белые кристаллы, МС (APCI, m/z): 324 (МН+),1H-ЯМР (CDCl3)2,33 (3 Н, с), 3,95 (3 Н, с), 3,98 (3 Н, с), 6,93 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,18 (2 Н, д, J=9 Гц),7,35 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,42 (1 Н, с), 7,67 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,71 (1 Н, д, J=2 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-формилфенил)акрилонитрила (соединение 62). 4-Диэтоксиметилбензальдегид (4,16 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (3,54 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением (Z)-3-(4-диэтоксиметилфенил)-2-(3,4 диметоксифенил)акрилонитрила (6,54 г, выход 89%). Полученный (Z)-3-(4-диэтоксиметилфенил)-2-(3,4 диметоксифенил)акрилонитрил (1,84 г) растворяют в метаноле и к полученному раствору добавляют воду и 2 н. серную кислоту с последующим перемешиванием, с получением целевого продукта (1,20 г, вы- 21009048 ход 82%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 294 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,95 (3 Н, с), 3,98 (3 Н, с), 6,95 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,17 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,32 (1 Н, дд,J=2 Гц, 9 Гц), 7,48 (1 Н, с), 7,97 (2 Н, д, J=9 Гц), 8,02 (2 Н, д, J=9 Гц), 10,06 (1 Н, с). Получение 4-[(Z)-1-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]-2-этоксифенилацетата (соединение 63). Соединение 11 (1,30 г) ацетилируют уксусным ангидридом и пиридином обычным способом с получением целевого продукта (1,19 г, выход 81%). Белые кристаллы, МС (APCI, m/z): 368 (МН+),1H-ЯМР (CDCl3)1,44 (3 Н, т, J=7 Гц), 2,34 (3 Н, с), 3,94 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 4,16 (2 Н, кв., J=7 Гц),6,93 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,11 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,13 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,26 (1 Н, дд, J=2 Гц, 8 Гц), 7,31 (1 Н, д, J=2 Гц, 8 Гц), 7,37 (1 Н, с), 7,69 (1 Н, д, J=2 Гц). Получение 4-[(Z)-1-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]-2-фторфенил ацетата (соединение 64). Соединение 59 (1,20 г) ацетилируют уксусным ангидридом и пиридином обычным способом с получением целевого продукта (1,26 г, выход 92%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 298 (М-СОСН 3-),1 Н-ЯМР (CDCl3)2,37 (3 Н, с), 3,94 (3 Н, с), 3,97 (3 Н, с), 6,93 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,13 (1 Н, д, J=2 Гц),7,22 (1 Н, д, J=8 Гц), 7,27 (1 Н, д, J=2 Гц, 9 Гц), 7,35 (1 Н, с), 7,62-7,67 (1 Н, м), 7,72 (1 Н, дд, J=2 Гц, 11 Гц). Получение 4-[(Z)-2-циано-2-(3,4,5-триметоксифенил)винил]фенилацетата (соединение 65). Соединение 15 (1,20 г) ацетилируют уксусным ангидридом и пиридином обычным способом с получением целевого продукта (1,27 г, выход 93%). Белые кристаллы, МС (APCI, m/z): 352 (М-Н-),1H-ЯМР (CDCl3)2,34 (3 Н, с), 3,89 (3 Н, с), 3,94 (6 Н, с), 6,87 (2 Н, с), 7,22 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,43 (1 Н,с), 7,91 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение этил-7-[4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенокси]гептаноата (соединение 66). Соединение 1 (200 мг) растворяют в диметилсульфоксиде и к полученному раствору добавляют безводный карбонат калия с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем к полученной смеси добавляют этил-7-бромгептаноат (169 мг) и смесь перемешивают. Карбонат калия отфильтровывают и полученный фильтрат выливают в ледяную воду. К полученной смеси добавляют соляную кислоту для доведения рН до 3, затем дважды смесь экстрагируют хлороформом. Полученный слой хлороформа промывают насыщенным раствором соли и затем сушат над безводным сульфатом натрия. Сульфат натрия отфильтровывают, фильтрат концентрируют досуха при пониженном давлении с последующей перекристаллизацией с получением целевого продукта (223 мг, выход 72%). Желтоватые кристаллы, МС (ESI, m/z): 437 (М-),1 Н-ЯМР (CDCl3)1,26 (3 Н, т, J=7 Гц), 1,37-1,45 (2 Н, м), 1,46-1,55 (2 Н, м), 1,63-1,71 (2 Н, м), 1,781,86 (2 Н, м), 2,32 (2 Н, т, J=7 Гц), 3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 4,02 (2 Н, т, J=7 Гц), 4,13 (2 Н, кв., J=7 Гц), 6,91(1 Н, д, J=9 Гц), 6,95 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,13 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,23 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,36 (1 Н, с), 7,85 (2 Н,д, J=9 Гц). Получение 4-[(Z)-1-циано-2-(3,4-триметоксифенил)винил]фенил-8-бромоктаноата (соединение 67). Соединение 1 (1,41 г), 8-бромоктановую кислоту (1,78 г) и п-толуолсульфоновую кислоту (1,90 г) растворяют в толуоле и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 10 ч. Раствор концентрируют, затем очищают хроматографией на колонке с силикагелем с получением целевого продукта (0,72 г, выход 34%). Бледно-желтые кристаллы, МС (APCI, m/z): 486 (МН+),1H-ЯМР (CDCl3)1,35-1,55 (6 Н, м), 1,74-1,82 (2 Н, м), 1,84-1,92 (2 Н, м), 2,59 (2 Н, т), 3,42 (2 Н, т),3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,93 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,14 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,19 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,26 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,41 (1 Н, с), 7,90 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-3-(3-аминофенил)-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила, гидрохлорида (соединение 68). Соединение 57 (500 мг) суспендируют в хлористо-водородной кислоте (1,1 экв.), к полученной суспензии добавляют и растворяют в ней 1,4-диоксан и ацетонитрил. Реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении с последующей перекристаллизацией с получением целевого продукта(соединение 69). Соединение 71 (119 мг) растворяют в этаноле, к полученному раствору добавляют метоксид натрия с последующим перемешиванием в течение 12 ч. Смесь концентрируют досуха при пониженном давлении и затем полученный продукт растворяют в воде. Раствор промывают этилацетатом и полученный- 22009048 водный слой сушат вымораживанием с получением целевого продукта (130 мг, выход 98%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 390 (M-2Na+H-),1 Н-ЯМР (D2O)3,64 (3 Н, с), 3,67 (3 Н, с), 3,69 (3 Н, с), 6,83 (1 Н, д, J=9 Гц), 6,97 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,02(1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,14 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,36 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,39 (1 Н, с), 7,43 (1 Н, д, J=2 Гц). Получение моно-4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенилфосфата (соединение 70). Соединение 1 (100 мг) и 4-(диметиламино)пиридин (5 мг) растворяют в ацетонитриле (700 мкл) и затем охлаждают до температуры -10 С. Затем к полученному раствору добавляют четыреххлористый углерод (171 мкл) и диизопропилэтиламин (129 мкл) и полученную смесь перемешивают в течение 0,5 ч. Затем к смеси добавляют дибензилфосфит (117 мкл) с последующим перемешиванием в течение 12 ч. После завершения реакции к полученной реакционной смеси добавляют 0,5 М дигидрофосфат калия и затем промывают этилацетатом. Полученный органический слой концентрируют досуха при пониженном давлении и очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол. Очищенный продукт растворяют в дихлорметане и к полученному раствору добавляют бромтриметилсилан с последующим перемешиванием при температуре 0 С в течение 2 ч. После завершения реакции к полученной реакционной смеси добавляют воду и смесь перемешивают в течение 1 ч. Смесь промывают этилацетатом и полученный водный слой сушат вымораживанием с получением целевого продукта (103 мг, выход 80%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 360 (М-Н-),1 Н-ЯМР (ДМСО-d6)3,81 (3 Н, с), 3,86 (3 Н, с), 7,06 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,25 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,30(2 Н, д, J=8 Гц), 7,31 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,88 (1 Н, с), 7,89 (2 Н, д, J=8 Гц). Получение моно-4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]-2-метоксифенилфосфата (соединение 71). Соединение 7 (111 мг) и 4-(диметиламино)пиридин (5 мг) растворяют в ацетонитриле (700 мкл) и охлаждают до температуры -10 С. К полученному раствору добавляют четыреххлористый углерод (171 мкл) и диизопропилэтиламин (129 мкл) и смесь перемешивают в течение 0,5 ч. Затем к смеси добавляют дибензилфосфит (117 мкл) с последующим перемешиванием в течение 12 ч. После завершения реакции к полученной реакционной смеси добавляют 0,5 М дигидрофосфат калия и затем промывают этилацетатом. Полученный органический слой концентрируют досуха при пониженном давлении и очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол. Очищенный продукт растворяют в дихлорметане и к полученному раствору добавляют бромтриметилсилан с последующим перемешиванием при температуре 0 С в течение 2 ч. После завершения реакции к полученной реакционной смеси добавляют воду и смесь перемешивают в течение 1 ч. Полученную смесь промывают этилацетатом и водный слой сушат вымораживанием с получением целевого продукта (119 мг, выход 85%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 390 (М-Н-),1 Н-ЯМР (ДМСО-d6)3,81 (3 Н, с), 3,85 (3 Н, с), 3,86 (3 Н, с), 7,08 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,26 (1 Н, дд, J=2 Гц,9 Гц), 7,33 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,42 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,48 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,66 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,93 (1 Н, с). Получение N-[3-[2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенил]ацетамида (соединение 72). Соединение 57 (50 мг) ацетилируют уксусным ангидридом и пиридином обычным методом с получением целевого продукта (48 мг, выход 84%). Желтоватые кристаллы, МС (ESI, m/z): 323 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)2,21 (3 Н, с), 3,93 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,92 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,14 (1 Н, д, J=2 Гц),7,25 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,40 (1 Н, т, J=8 Гц), 7,41 (1 Н, с), 7,52 (1 Н, ушир.д), 7,61 (2 Н, ушир.д), 8,01 (1 Н,ушир.с). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-[4-(6-фосфоD-глюкопиранозил)фенил]акрилонитрила(соединение 73). Соединение 44 (100 мг) и (2,2,2-трихлорэтил)фосфорхлоридат (256 мг) растворяют в пиридине (2 мл) и полученный раствор перемешивают в течение 2 ч. После завершения реакции полученную реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении и очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол. Очищенный продукт растворяют в смеси пиридин-уксусная кислота (4:1) и к полученному раствору добавляют порошок цинка (140 мг) с последующим перемешиванием в течение 2 ч. После завершения реакции полученную реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении и очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол, с получением целевого продукта (83 мг, выход 70%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 522 (МН+),1 Н-ЯМР (ДМСО-d6)3,80 (3 Н, с), 3,83 (3 Н, с), 4,98 (1 Н, д, J=7 Гц), 7,05 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,14 (2 Н, д,J=9 Гц), 7,22 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,29 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,85 (1 Н, с), 7,88 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение серной кислоты моно-4-[(Z)-2-циано-2-(3,4-диметоксифенил)винил]фенилэфира триэтиламмониевой соли (соединение 74). Соединение 1 (100 мг) супендируют в хлороформе (10 мл), к полученной суспензии добавляют триэтиламин (516 мкл) и комплекс триоксид серы-пиридин (588 мг) с последующим перемешиванием в течение 2 ч. После завершения реакции полученную реакционную смесь концентрируют досуха при пони- 23009048 женном давлении и очищают хроматографией на колонке с силикагелем с применением системы хлороформ/метанол, получая целевой продукт (160 мг, выход 97%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 360 (М-(С 2 Н 5)3NH-),1(1 Н, д, J=9 Гц), 7,27 (2 Н, м), 7,39 (2 Н, д, J=9 Гц), 7,69 (1 Н, с), 7,90 (2 Н, д, J=9 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-[4-(6-фосфоD-глюкопиранозил)фенил]акрилонитрила,натриевой соли (соединение 75). Соединение 73 (83 мг) растворяют в этаноле и к полученному раствору добавляют метоксид натрия с последующим перемешиванием в течение 12 ч. Полученную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении и затем полученный продукт растворяют в воде. Полученный раствор промывают этилацетатом и полученный водный слой сушат вымораживанием с получением целевого продукта (81 мг, выход 90%). Бледно-желтые кристаллы, МС (ESI, m/z): 522 (M-2Na+H-),1(1,10 г, выход 65%). Полученную МЭМ-форму (510 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (354 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3[2-(2-метоксиэтоксиметокси)-5-нитрофенил]акрилонитрила (330 мг, выход 40%). С полученного (Z)-2(3,4-диметоксифенил)-3-[2-(2-метоксиэтоксиметокси)-5-нитрофенил]акрилонитрила (200 мг) снимают защиту в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (87 мг, выход 55%). Желто-оранжевые кристаллы, МС (ESI, m/z): 327 (М-Н-),1H-ЯМР (CDCl3)3,95 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 6,97 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,31 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,32 (1 Н, дд,J=2 Гц, 9 Гц), 7,49 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,85 (1 Н, с), 8,38 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 8,49 (1 Н, д, J=2 Гц). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-фтор-3-нитрофенил)акрилонитрила (соединение 77). 4-Фтор-3-нитробензальдегид (507 мг) и 3,4-диметоксибензил цианид (532 мг) конденсируют в соответствии с процессом В процесса получения 2 с получением целевого продукта (485 мг, выход 30%). Желто-оранжевые кристаллы, МС (ESI, m/z): 325 (М-Н-),1(1,60 г) снимают защиту в соответствии с процессом получения 3 с получением дешевого продукта (0,74 г, выход 56%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 342 (МН+),1 Н-ЯМР (CDCl3)3,93 (3 Н, с), 3,95 (3 Н, с), 3,96 (3 Н, с), 3,98 (3 Н, с), 6,92 (1 Н, д, J=9 Гц), 6,97 (1 Н, д,J=2 Гц), 7,13 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,24 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,27 (1 Н, д, J=2 Гц), 7,29 (1 Н, с). Получение (Z)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)акрилонитрила (соединение 79). Гидроксильную группу 4-гидрокси-3,5-диметоксибензальдегида (2,44 г) защищают с применением 2-метоксиэтоксиметилхлорида (1,67 г) в соответствии с процессом получения 1 с получением МЭМформы (3,40 г, выход 94%). Полученную МЭМ-форму (3,40 г) и 3,4-диметоксибензил цианид (2,23 г) конденсируют в соответствии с процессом А процесса получения 2 с получением (Z)-3-[3,5-диметокси-4(2-метоксиэтоксиметокси)фенил]-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила (3,53 г, выход 65%). С полученного (Z)-3-[3,5-диметокси-4-(2-метоксиэтоксиметокси)фенил]-2-(3,4-диметоксифенил)акрилонитрила(0,35 г) снимают защиту в соответствии с процессом получения 3 с получением целевого продукта (0,25 г, выход 90%). Желтоватые кристаллы, МС (APCI, m/z): 342 (МН+),1H-ЯМР (CDCl3)3,93 (3 Н, с), 3,97 (ЗН, с), 3,97 (6 Н, с), 6,92 (1 Н, д, J=9 Гц), 7,13 (1 Н, д, J=2 Гц),7,22 (2 Н, с), 7,24 (1 Н, дд, J=2 Гц, 9 Гц), 7,32 (1 Н, с). Пример 2. Получение линии клеток А 549 с резистентностью к SN-38.- 24009048 Линию клеток А 549 — немелкоклеточного рака легких человека — субкультивируют при 5% СО 2 и температуре 37 С с применением среды Ham F-12, содержащей 10% FBS, 100 Ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (10% FBS/Ham F-12). Резистентные к SN-38 клетки А 549 выбирают субкультивированием клеток А 549 в среде в течение двух месяцев, постепенно повышая концентрацию SN-38 в среде(от 4 до 10 нг/мл). Затем полученные клетки А 549 с резистентностью к SN-38 клонируют путем ограниченного разбавления с получением шести клонированных линий клеток А 549 с резистентностью к SN-38(A549/SN-38-1 до 6). Пример 3. Тест на чувствительность к противораковому лекарственному средству линии клетокA549/SN-38. Линию клеток А 549 и каждую из A549/SN-38-1 до 6 суспендируют в 10% FBS/Ham F-12 и полученную суспензию инокулируют в 96-луночный микропланшет с последующим культивированием при 5%CO2 и температуре 37 С в течение ночи. Затем в каждую лунку добавляют раствор противоракового лекарственного средства в FBS/Ham F-12 (50 мкл) с последующим культивированием при 5% CO2 и температуре 37 С в течение 48 ч. После завершения культивирования количество жизнеспособных клеток подсчитывают с применением реагента для подсчета жизнеспособных клеток [TetraColor ONE (торговое наименование), продукт Seikagaku Corporation] согласно инструкции по применению. В табл. 2 и на фиг. 1 представлена чувствительность линии клеток А 549 и шести линий клеток A549/SN-38 к различным противораковым лекарственным средствам. IC50 соответствует концентрации противоракового лекарственного средства, требуемой для 50% ингибирования роста клеток. Относительное значение резистентности получают делением IС 50 для линии клеток A549/SN-38 на IС 50 для линии клеток А 549. Чем больше относительное значение резистентности, тем выше уровень приобретенной резистентности. Линии клетокA549/SN-38 демонстрируют особенно сильную резистентность к SN-38 и митоксантрону, которые являются субстратами BCRP. Таблица 2 Пример 4. RT-PCR-анализ линии клеток A549/SN-38. Проводили RT-PCR для анализа экспрессии мРНК переносчика лекарственного средства в клетках линии А 549, шести линий клеток A549/SN-38 и линии клеток рака молочной железы человека MCF-7,которые, как известно, экспрессируют BCRP. Общее количество РНК экстрагировали из клеток с применением реагента экстракции РНК [ISOGEN (торговое наименование), продукт Nippon Gene Co., Ltd.] и проводили RT-PCR с применением реагента RT-PCR [Ready To Go RT-PCR Beads (торговое наименование), продукт Amersham pharmacia biotech] и теплового датчика циклов [iCycler (торговое наименование), продукт BIO-RAD] согласно прилагаемой инструкции по применению (общее количество РНК: 0,5 мкг). Полученный продукт PCR подвергали электрофорезу с применением 2% геля агарозы и затем окрашивали бромидом этидия для последующего определения на трансиллюминаторе. Кроме того, проводили RT-PCR в режиме реального времени с применением реагента для проведения RT-PCR в режиме реального времени [SYBR Green RT-PCR reagents (торговое наименование), продукт Applied Biosystems] и системы определения последовательности [ABI PRISM 7000 (торговое наименование), продукт AppliedBiosystems] согласно прилагаемой инструкции по применению для количественного анализа (общее количество РНК: 0,1 мкг). PCR-праймеры, соответствующие BCRP, MDR1, MRP1, MRP2, MRP3 и G3PDH(эндогенные контрольные гены), создавали на основе следующих известных базовых последовательностей мРНК (инвентарные номера AF098951, AF016535, L05628, U63970, AF009670 и М 33197) соответственно. На фиг. 2 показаны результаты RT-PCR, а на фиг. 3 показаны результаты RT-PCR в режиме ре- 25009048 ального времени. Экспрессия BCRP значительно повышается во всех шести линиях клеток A549/SN-38 по сравнению с линией клеток А 549. Наоборот, никакой значительной разницы не отмечено в уровне экспрессии MPR2 (субстратом которого является SN-38, который также является субстратом BCRP) между линией клеток А 549 и линиями клеток A549/SN-38. Также никакой значительной разницы не отмечено между уровнем экспрессии других переносчиков лекарственных средств между линией клеток А 549 и линией клеток A549/SN-38. Эти результаты позволят предположить, что BCRP вовлечен в механизм резистентности к противораковым лекарственным средствам в линиях клеток A549/SN-38. С помощью указанного выше анализа RT-PCR экспрессия BCRP была обнаружена в линии клеток рака молочной железы человека MCF-7. Кроме исследований экспрессии указанных выше переносчиков лекарственных средств изучали экспрессию топоизомеразы-I, топоизомеразы-II, Всl-2, Вах или IB С помощью вестерн-блоттинга, и изучали активность топоизомеразы-I на основе реакции релаксации ДНК. Однако не было получено данных, позволяющих предположить, что эти белки вовлечены в механизм резистентности к противораковым лекарственным средствам в линиях клеток A549/SN-38. Пример 5. Количество противоракового лекарственного средства, аккумулирующееся в линии клеток A549/SN-38. Линию клеток А 549 или линию клеток A549/SN-38 (4106 клеток/мл) суспендировали в 10%FBS/RPMI1640 (1 мл) и к полученной суспензии добавляли раствор SN-38 в ДМСО (1 мкл, конечная концентрация 300 нг/мл) с последующей инкубацией при температуре 37 С в течение 60 мин. Затем проводили центрифугирование (2 С, 1400xg, 1 мин), и полученную надосадочную жидкость удаляли. К осажденным таким образом клеткам добавляли охлажденный на льду PBS и клетки повторно в нем суспендировали с последующим центрифугированием (2 С, 1400 хg, 1 мин) для промывания клеток. Снова проводили промывание с последующим добавлением PBS (375 мкл) и клетки обрабатывали ультразвуком. К обработанным ультразвуком клеткам добавляли метанол (375 мкл) и 10% раствор сульфата цинка (15 мкл) и полученную смесь перемешивали с последующим центрифугированием (2 С, 12500 хg, 5 мин) и сбором надосадочной жидкости. Собранную надосадочную жидкость распределяли в белом 96-луночном микропланшете для измерения интенсивности флуоресценции (200 мк/лунку) и затем определяли количество SN-38 и SN-38-глюкуронида, содержащегося в надосадочной жидкости, с применением микропланшетного флуориметра [SPECTRA max GEMINI XS (торговое наименование), продукт Molecular Devices] (SN-38: длина волны возбуждения 380 нм, длина волны эмиссии 560 нм; SN-38-глюкуронид: длина волны возбуждения 370 нм, длина волны эмиссии 430 нм), тем самым получая количество внутриклеточной аккумуляции SN-38 и глюкуронида. Как понятно из результатов, представленных на фиг. 4, количество SN-38, аккумулированного в клетках линии A549/SN-38-4, составляет около 1/5 от количестваSN-38, аккумулированного в клетках линии А 549. Результаты показывают, что BCRP вовлечен в механизм резистентности к противораковым лекарственным средствам в линиях клеток A549/SN-38. Наоборот, SN-38-глюкуронид практически не был обнаружен в клетках обеих линий А 549 и A549/SN-38-4, что показывает, что глюкуронидирование не вовлечено в механизм резистентности противораковым лекарственным средствам. Пример 6. Действие производного дифенилакрилонитрила по преодолению резистентности к противораковым лекарственным средствам в линии клеток A549/SN-38-4. Действие производного дифенилакрилонитрила на BCRP-опосредованную резистентность противораковым лекарственным средствам изучали с применением линии клеток рака легких человекаA549/SN-38-4, которая приобрела резистентность к противораковым лекарственным средствам через экспрессию BCRP. Линию клеток рака легких человека А 549 или линию клеток рака легких человекаA549/SN-38-4 суспендировали в 10% FBS/Han F-12 и полученную суспензию инокулировали в 96 луночный микропланшет с последующим культивированием при 5% CO2 и температуре 37 С в течение ночи (2103 клеток/50 мкл/лунка). Затем в каждую лунку добавляли раствор 10% FBS/Ham F-12 (25 мкл),содержащий производное дифенилакрилонитрила и SN-38 или митоксантрон, с последующим культивированием при 5% СО 2 и температуре 37 С в течение 48 ч. После завершения культивирования количество жизнеспособных клеток рассчитывали с применением TetraColor ONE согласно прилагаемой инструкции по применению. На фиг. 5 показано действие производного дифенилакрилонитрила (соединение 1) по преодолению резистентности SN-38 или резистентности митоксантрону, и в табл. 3 показано действие по преодолению резистентности к SN-38 каждого тестированного производного дифенилакрилонитрила, выраженное как EC50. EC50 соответствует концентрации производного дифенилакрилонитрила,требуемой для 50% снижения значения относительной резистентности. Значение относительной резистентности получали делением IC50 (например, концентрации противоракового лекарственного средства,требуемой для 50% ингибирования роста клеток) для линии клеток A549/SN-38-4 на IC50 для линии клеток А 549. Чем больше значение относительной резистентности, тем выше уровень приобретенной резистентности. Результаты показывали, что каждое из производных дифенилакрилонитрила обладает мощным действием по преодолению резистентности к SN-38 или резистентности митоксантрону в линии клеток A549/SN-38. Когда концентрация производного дифенилакрилонитрила попадает в интервал, где наблюдается зависимость преодоления резистентности к противораковому лекарственному средству от- 26009048 концентрации производного, производное дифенилакрилонитрила само по себе не влияет на рост линии клеток А 549 и линии клеток A549/SN-38. Результаты позволяли предположить, что производное дифенилакрилонитрила в соответствии с данным изобретением ингибирует BCRP и преодолевает резистентность раковых клеток к противораковым лекарственным средствам. Таблица 3 Пример 7. Действие производного дифенилакрилонитрила по улучшению чувствительности линии клеток MCF-7 к противораковому лекарственному средству. Действие производного дифенилакрилонитрила на чувствительность раковых клеток к противораковому лекарственному средству изучали с применением линии клеток рака молочной железы человекаMCF-7, которая, как известно, экспрессирует BCRP (Blood 99, 3763-3770 (2002. Линию клеток MCF-7 суспендировали в 10% FBS/RPMI1640 и полученную суспензию инокулировали в 96-луночный микропланшет с последующим культивированием при 5% СО 2 и температуре 37 С в течение ночи (3103 клеток/50 мкл/лунка). Затем в каждую лунку добавляли раствор производного дифенилакрилонитрила и SN38 в 10% FBS/RPMI1640 (25 мкл) с последующим культивированием при 5% CO2 и температуре 37 С в течение 48 ч. После завершения культивирования количество жизнеспособных клеток рассчитывали с применением TetraColor ONE согласно прилагаемой инструкции по применению. В табл. 4 показано изменение чувствительности линии клеток MCF-7 к SN-38, вызванное производным дифенилакрилонитрила, выраженное через значения IС 50 (т.е. концентрации SN-38, требуемой для 50% ингибирования роста клеток). Результаты показывают, что каждое из производных дифенилакрилонитрила улучшает чувствительность линии клеток MCF-7 к SN-38. Когда концентрация производного дифенилакрилонитрила попадает в интервал, где наблюдается зависимость улучшения чувствительности к SN-38 от концентрации производного, производное дифенилакрилонитрила само по себе не влияет на рост линии клеток MCF-7. Результаты позволяют предположить, что производное дифенилакрилонитрила в соответствии с данным изобретением ингибирует BCRP и улучшает чувствительность раковых клеток к противораковым лекарственным средствам. Пример 8. Действие производного дифенилакрилонитрила по преодолению резистентности к противораковому лекарственному средству в линии клеток трансдуцированной человеческим BCRP лейкемии мышей Р 388. Линию клеток лейкемии мышей Р 388 или линию клеток, трансдуцированных человеческим BCRPfor Cancer Research), суспендировали в 10% FBS/RPMI1640 и полученную суспензию инокулировали в 96-луночный микропланшет (1104 клеток/50 мкл/лунка). Затем в каждую лунку добавляли раствор производного дифенилакрилонитрила и SN-38 в 10% FBS/RPMI1640 (25 мкл) с последующим культивированием при 5% CO2 и температуре 37 С в течение 48 ч. После завершения культивирования количество жизнеспособных клеток рассчитывали с применением TetraColor ONE согласно прилагаемой инструкции по применению. Результаты показаны на фиг. 6. Результаты показывают, что каждое из тестируемых производных дифенилакрилонитрила обладает мощным действием по преодолению резистентности кSN-38 в линии клеток P388/BCRP. Наоборот, производное дифенилакрилонитрила не влияет на чувствительность линии клеток Р 388 к SN-38. Результаты демонстрируют, что производное дифенилакрилонитрила в соответствии с данным изобретением обладает BCRP ингибирующим действием. Пример 9. Действие производного дифенилакрилонитрила на мультилекарственную резистентность линии клеток MES-SA/Dx5. Линию клеток рака матки человека MES-SA или линию клеток MES-SA/Dx5, которые получили мультилекарственную резистентность посредством чрезмерной экспрессии Р-гликопротеина [Cancer Res. 45, 4091-4096 (1985)], суспендировали в 10% FBS/DMEM и полученную суспензию инокулировали в 96 луночный микропланшет с последующим культивированием при 5% CO2 и температуре 37 С в течение ночи (3103 клеток/50 мкл/лунка). Затем в каждую лунку добавляли раствор производного дифенилакрилонитрила и паклитаксела в 10% FBS/DMEM (25 мкл), с последующим культивированием при 5% СО 2 и температуре 37 С в течение 48 ч. После завершения культивирования количество жизнеспособных клеток рассчитывали с применением TetraColor ONE согласно прилагаемой инструкции по применению. В табл. 5 показано действие каждого из тестированных производных дифенилакрилонитрила на мультилекарственную резистентность, выраженное в EC50. EC50 соответствует концентрации производного дифенилакрилонитрила, требуемой для 50% снижения значения относительной резистентности. Результаты показывают, что если концентрация производного дифенилакрилонитрила попадает в интервал, применяемый при тестировании, производное не влияет на резистентность к паклитакселу в линии клетокMES-SA/Dx5. Кроме того, производное дифенилакрилонитрила само по себе не влияет на рост линии клеток MES-SA и линии клеток MES-SA/Dx5. Результаты показывают, что производное дифенилакрилонитрила в соответствии с данным изобретением не воздействует на Р-гликопротеин и имеет специфичность к BCRP. Пример 10. Действие производного дифенилакрилонитрила на количество противоракового лекарственного средства, аккумулирующееся в линиях клеток, экпрессирующих BCRP. Линию клеток Р 388, или линию клеток P388/BCRP (1107 клеток/мл), или линию клеток MCF-7(3106 клеток/мл) суспендировали в 10% FBS/RPMI1640 (1 мл) и к полученной суспензии добавляли производное дифенилакрилонитрила и SN-38 (конечная концентрация 500 нг/мл) с последующим инкубированием при температуре 37 С в течение 60 мин. Затем проводили центрифугирование (2 С, 1400 хg,1 мин), и полученную надосадочную жидкость удаляли. К осажденным таким образом клеткам добавляли охлажденный на льду 10% FBS/RPMI1640 и клетки повторно в нем суспендировали с последующим центрифугированием (2 С, 1400xg, 1 мин) для промывания клеток. Снова проводили промывание с последующим добавлением PES (375 мкл) и клетки обрабатывали ультразвуком. К обработанным ультразвуком клеткам добавляли метанол (375 мкл) и 10% раствор сульфата цинка (15 мкл) и полученную смесь перемешивали с последующим центрифугированием (2 С, 12500 хg, 5 мин) и сбором надосадочной жидкости. Собранную надосадочную жидкость распределяли в белом 96-луночном микропланшете для измерения интенсивности флуоресценции (200 мк/лунку) и затем определяли количество SN-38, содержащегося в надосадочной жидкости с применением микропланшетного флуориметра (SN-38: длина волны возбуждения 380 нм, длина волны эмиссии 560 нм), тем самым получая количество внутриклеточной аккумуляции SN-38. Как понятно из результатов, представленных на фиг. 7, производное дифенилакрилонитрила в соответствии с данным изобретением увеличивает количество SN-38, аккумулированное в клетках линии P388/BCRP. Кроме того, из результатов, представленных на фиг. 8, видно, что производное дифенилакрилонитрила в соответствии с данным изобретением увеличивает количество SN-38, аккумулированное в клетках линии MCF-7. Результаты позволяли предположить, что производное дифенилакрилонитрила в соответствии с данным изобретением ингибирует BCRP и повышает количество аккумулированного внутри клетки противоракового лекарственного средства. Пример 11. Действие производного дифенилакрилонитрила по преодолению резистентности к противораковым лекарственным средствам in vivo. Применяли группы шестинедельных самок мышей CDF1, каждая из которых состоит из 5 мышей. Линию клеток Р 388 или линию клеток P388/BCRP (1106 клеток/мышь) имплантировали в полость брюшины каждой мыши. Начиная с одного дня и до десяти дней после имплантации опухоли, вводят производное дифенилакрилонитрила и иринотекан гидрохлорид (СРТ-11) внутрибрюшинно один раз в день(общее количество введений 10). До введения производное дифенилакрилонитрила растворяли или суспендировали в физиологическом растворе или смеси этанола, полиоксиэтилен (20) сорбитанмоноолеата[Tween 80 (торговое наименование), продукт Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.] и 5% глюкозы (этанол/Tween 80/5% глюкоза = 5:5:90 или 5:7,5:87,5), а СРТ-11 растворяли в физиологическом растворе. Контрольной группе мышей вводят только растворитель. Для оценки противоракового действия производного дифенилакрилонитрила рассчитывали степень выживания Т/С (%), исходя из продолжительности жизни мышей в днях с имплантированной опухолью, с применением следующей формулы: Степень выживания Т/С (%)=(средняя продолжительность жизни мышей в днях в группе с лечением) (средняя продолжительность жизни мышей в днях в контрольной группе)100 Результаты показаны в табл. 6, 7 и 8. Результаты показывают, что производное дифенилакрилонитрила в соответствии с данным изобретением ингибирует BCRP in vivo и обладает эффектом преодоления резистентности противораковым лекарственных средствам.

1. Способ профилактики (предотвращения) рака молочной железы у человека, который включает введение упомянутому человеку в течение достаточного периода времени эффективной дозы соединения формулы или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, причем указанный период времени составляет, по меньшей мере, один год. 2. Способ по п.1, где упомянутая эффективная доза составляет от около 30 мг до около 200 мг/день. 3. Способ по п.1, где.

1. Способ профилактики (предотвращения) рака молочной железы у человека, который включает введение упомянутому человеку в течение периода, составляющего по меньшей мере шесть месяцев, соединения формулы (ралоксифена) или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата в эффективной дозе, составляющей от 60 до 120 мг/день. 2. Способ по п.1 для снижения вероятности возникновения рака молочной железы у человека. 3. Способ по п.1 для снижения.

1. Применение эксеместана при изготовлении фармацевтической композиции для использования при лечении первой линии метастатического, запущенного, гормонально зависимого рака молочной железы. 2. Применение по п.1 для использования при лечении первой линии метастатического, запущенного, гормонально зависимого рака молочной железы у женщины в постменопаузе. 3. Применение по п.1 или 2, где фармацевтическая композиция предназначена для орального.

Последовательность кднк , кодирующая полипептид маммаглобина, и её производное, полипептид маммаглобина, способы диагностики рака молочной железы и наборы для осуществления способов

1. Последовательность кДНК кодирующая полипептид маммаглобина, или ее производное, обладающее аналогичной функцией. 2. Производное последовательности по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой последовательность, комплементарную SEQ ID NO: 1 или ее производному. 3. Полипептид маммаглобина с аминокислотной последовательностью: или его производное. 4. Способ диагностики рака молочной железы у пациента, предусматривающий выявление.

1. Конъюгат, применяемый в лечении рака предстательной железы, который включает в себя цитотоксический агент, связанный с олигопептидом, где олигопептид включает в себя последовательность аминокислот, которая избирательно расщепляется посредством протеолитического действия свободного специфического антигена простаты, и где средствами связывания является ковалентная связь или связывание осуществляется через химический линкер, причем указанная.

источник