Что такое дифференцировка клеток при раке молочной железы

Рак молочной железы – это злокачественное новообразование из железистых клеток груди. Среди женской онкологии рак груди является самым распространенным заболеванием.

По данным Всемирной Организации Здравоохранения ежегодно регистрируется до миллиона новых случаев диагностики новообразования. Показатель женской смертности от данной патологии занимает второе место среди всех смертей от онкологических заболеваний.

Рак груди обладает злокачественным ростом и малосимптомным течением, что характеризует заболевание как чрезвычайно опасное. По сути, он медленно убивает женский организм.

Первые симптомы данного заболевания обычно ограничиваются образованием безболезненного уплотнения в груди. Развернутые клинические проявления – это показатель распространенности и запущенности процесса.

Степень злокачественности рака зависит от степени дифференцировки клеток. Выделяют следующие степени:

Высоко дифференцированный рак. Он относится к первой степени озлокачествления. Среди всех видов обладает сравнительно благоприятным течением. Клетки опухоли максимально похожи на клетки здоровой железистой ткани;
Умеренно дифференцированный рак относится ко второй степени злокачественности. Клетки этого вида только некоторыми факторами схожи с нормальными клетками молочной железы;
Низко дифференцированный рак – самый агрессивный вид. Клетки опухоли, по своему строению, абсолютно утратили сходство с клетками непораженной железистой ткани груди.

По анатомо-морфологическим признакам выделяют такие формы рака молочной железы:

Узловой рак молочной железы — это когда в груди определяется один опухолевый очаг в форме узла;
Мультицентрический рак груди. Характеризуется образованием двух и более опухолевых узлов;
Диффузное поражение молочной железы. Может быть в виде рожистого поражения, мастита либо панциря.

Отдельно выделяют болезнь Педжета – это рак соска и околососковой зоны.

Первая и единственная обоснованная причина рака молочной железы – это гормональные нарушения, которые могут быть как последствием климакса, так и сбоем обменно-регуляторных процессов организма.

Первые роды после 30 лет;
Курение и злоупотребление алкоголем;
Появление первой менструации до 12 лет;
Сопутствующие обменные заболевания;
Злокачественные опухоли половых органов;
Злокачественные опухоли груди у родственников;

Длительное (около 10 лет) лечение гормональными препаратами.

Для того что бы успешно вылечить рак молочной железы применяют комплексную терапию по индивидуальному назначению. Необходимо не просто убрать симптомы заболевания и вырезать новообразование. Врач должен назначить такое лечение, которое точно предотвратит развитие рецидива и убьет абсолютно все опухолевые клетки в организме. Поэтому применяются различные комбинирования следующих видов терапии. Более подробно — рак молочной железы лечение.

Мастэктомия – это удаление молочной железы и некоторых тканей груди. В зависимости от степени поражения опухолевым процессом и развитии метастаз объем оперативного вмешательства составляет удаление молочной железы, пораженных мышц и лимфоузлов, при наличии в них метастаз. Мастэктомия – это вариант радикального хирургического лечения рака молочной железы. Естественно, что всех женщин пугает перспектива удаления этой части тела и из-за этого многие могут отказаться от операции, рискуя своей жизнью. Однако развитие современной пластической хирургии позволяет выполнить послеоперационную реконструкцию груди.
Лампэктомия – это менее радикальное хирургическое лечение. Лампэктомия является органосохраняющей операцией, то есть во время вмешательства удаляется не вся молочная железа. Однако при таком варианте лечения высокий риск развития рецидивов и лампэктомия обязательно дополняется лучевой терапией.

Ионизирующее действие губительно действует на опухолевые клетки. Лучевое лечение паталогии молочной железы используют перед хирургическим лечением, для уменьшения размеров опухоли, и после него, для разрушения метастаз. Так же применяется для уменьшения проявлений опухолевых процессов при неоперабельных раках груди. В таком случае лучевая терапия позволяет продлить жизнь пациенту.

Этот метод лечения паталогии молочной железы основан на разрушающем действии радиофармпрепаратов, которые либо помещаются внутрь опухоли, оказывая местное воздействие, либо вводятся в системный кровоток, оказывая общее действие на организм пациентки.

С каждым годом все больше и больше людей сталкиваются с онкологическими заболеваниями. Одним из наиболее распространенных является рак груди. Однако этот диагноз не означает приговор. Методы современной медицины позволяют добиться во многих случаях стойкой ремиссии болезни. Не все знают, что рак груди может проявляться по-разному. Подобрать адекватную терапию помогает классификация рака молочной железы. Ведь для каждого вида подбирается соответствующая тактика лечения. И именно знание формы заболевания позволяет специалисту сделать прогноз дальнейшего развития болезни.

Чаще всего, диагностируя рак молочной железы, врачи ориентируются на международную TNM-классификацию, при которой вид опухоли определяется в соответствии с восемью признаками:

Место локализации образования.
Величина опухоли.
Объем поражения лимфоузлов метастазами.
Наличие метастазов за пределами железы.
Стадия болезни.
Клеточный вид образования.
Гистопатологический уровень дифференцировки клеток.
Тип экспрессируемых специфических рецепторов образования.

Также важным фактом при определении вида образования становится его инвазивность (способность прорастать в соседние ткани и органы). Именно от этого зависят применяемые методы и объем лечения. Соответственно виды рака делятся на две группы:

Инвазивные. Для такого типа заболевания характерно наличие опухоли, вышедшей за пределы молочной железы и затронувшей здоровые ткани. Злокачественные клетки такого образования могут переноситься с кровью по организму пациента.
Неинвазивные. Опухоли подробного вида находятся в пределах молочной железы, не прорастая при этом в здоровые ткани. Однако они могут увеличиваться в размерах и переходить со временем в инвазивный рак.

Чаще всего опухоль находится или в верхней наружной части груди, или у соска и ареолы. Такое ее расположение диагностируется в 70% случаев. Для обозначения точного места дислокации образования врачи пользуются следующим шифром:

У соска (С50.0).
В центральной зоне либо у ареолы (С50.1).
В верхне-внутреннем квадранте (С50.2).
В нижне-внутреннем квадранте (С50.3).
В верхне-наружном квадранте (С50.4).
В нижне-наружном квадранте (С50.5).
В подмышечной части (С50.6).

Для обозначения величины образования врачи применяют литеру «Т» в соответствии с такой схемой:

Первичная опухоль не подлежит оценке (ТХ).
Признаков первичного образования не обнаружено (Т0).
Карцинома in situ, то есть опухоль без признаков метастаз (Тis). К этому виду относят дольковую карциному in situ, внутрипротоковую карциному и болезнь Педжета без карциномы.
Размер образования не превышает 2 сантиметров (Т1).
Микропрорастание (микроинвазия). Такой диагноз ставится при обнаружении прорастания опухоли за базальную мембрану эпителия в окружающие ткани на участки не более 0,1 см (Т1mic).
Величина образования от 0,1 до 0,5 см (Т1а).
Размер опухоли от 0,5 до 1 см (Т1b).
Образование от 1 до 2 см (Т1c).
Опухоль от 2 до 5 см (Т2).
Размер образования превышает 5 см (Т3).
Опухоль любого размера, проросшая в кожу и грудную клетку (Т4). При этом при прорастании в грудную стенку используются обозначение Т4а, в случае отека, изъязвления груди или наличия симптома апельсиновой корки — Т4b и Т4с. При воспалительной карциноме — Т4d.

Степень поражения регионарных лимфоузлов оценивают так:

Лимфоузлы оценить нельзя (NX).
Регионарные метастазы в лимфоузлы отсутствуют (NO).
Наблюдаются метастазы в ипсилатеральные (находящиеся с пораженной стороны) подмышечные лимфоузлы, сами лимфоузлы отличаются подвижностью (N1).
Обнаруживаются метастазы, находящиеся в неподвижных ипсилатеральных лимфоузлах (N2).
Есть метастазы в ипсилатеральных внутренних лимфоузлах (N3).

В случае обнаружения отдаленных метастазов врачами предлагаются такие обозначения:

Отдаленные метастазы нельзя оценить (МХ).
Отдаленных метастазов нет (МО).
Есть отдаленные метастазы в разных органах (М1).

Определить стадию опухоли можно только после проведения ряда долговременных исследований, опираясь при этом на размер образования, объем поражения регионарных лимфоузлов и наличие отдаленных метастазов. Данные параметры диктуют выбор методов лечения и определяют пятилетний прогноз выживаемости больных. В онкологии принято выделять 4 стадии заболевания, но при классификации рака молочной железы используют 5. Наиболее благоприятен прогноз при раннем обнаружении болезни – на первых стадиях.

Согласно гистологической классификации рака груди принято выделять следующие виды заболевания.

Это неинвазивное образование, то есть оно не затрагивает ткани, расположенные рядом. Данный вид часто называют «предраком», так как существует возможность перерождения опухоли в инвазивную. Современные методы диагностики позволяют обнаружить его на ранней стадии. Обычно эта форма никак не беспокоит больную и не имеет внешних признаков. Лишь у очень небольшого количества пациенток наблюдаются выделения из соска или прощупывается новообразование. Если после проведения маммографии у врача возникает подозрение о наличии злокачественного протокового поражения, назначается малоинвазивная биопсия. Протоковая карцинома – наиболее распространённая форма неинвазивного образования.

Следует отметить, что при ранней диагностике опухоли и ее удалении остается риск появления инвазивного образования в будущем. Вероятность рецидива составляет 25-50%, причем произойти он может как через 5, так и через 25 лет.

Этот вид рака также относится к неинвазивным. Раковые клетки находятся в дольках железы. Чаще всего данная форма диагностируется у женщин 44-47 лет. При дольковой карциноме злокачественные клетки обнаруживаются по всей груди, причем поражаются обе железы одновременно. Эта форма занимает 5,3-25% от общего количества случаев заболевания. Обнаружить ее удается обычно совершенно случайно или в ходе проведения операции по поводу доброкачественного заболевания. У четверти больных дольковая карцинома перерождается в инвазивное образование в течение 25 лет.

Отличие этого вида от аналогичной in situ – образование не ограничивается грудной железой и поражает близлежащие ткани. Среди всех случаев инвазивного поражения эта форма наиболее распространена – 70-80% от общего количества случаев.

Одним из симптомов, позволяющих диагностировать подобную опухоль, является наличие припухлости, спаянной с близлежащими тканями. Она очень твердая наощупь и имеет обычно или овальную, или неровную со звездчатыми границами форму. Размер такой опухоли может колебаться от 1 до 10 сантиметров. Часто кожа рядом с соском и сам сосок втягиваются.

Такое образование может прорастать в кровеносные и лимфатические сосуды, находящиеся в жировой ткани, в области подмышек или в жировой клетчатке. Могут появиться метастазы в регионарных лимфоузлах.

Опухоль этого вида является инвазивной и встречается в большинстве случаев у женщин в возрасте от 45 до 56 лет. На нее приходится около 5% всех случаев заболевания. Маммография обычно не способна выявить подобное новообразование. Один из характерных симптомов этой формы рака – уплотнение, находящееся в верхней наружной четверти груди. Размер опухоли обусловлен степенью проникновения через стенки долек. При таком виде болезни поражение обычно бывает многоочаговым, поражая как одну, так и обе железы. Поздние стадии такого рака в большинстве случаев приводят к сморщиванию или втягиванию кожи, расположенной над проблемным местом. Данная опухоль относится к метастазирующим, часто затрагивая матку и яичники.

Чаще всего такая форма болезни поражает женщин молодого возраста или пациенток старше 50 лет. Врачам редко удается поставить диагноз сразу же, поэтому больных лечат от мастита, псориаза, экземы и так далее. Точный диагноз ставится по результатам биопсии тканей проблемного участка. Число заболевших — около 2 % от общего количества больных. Данная форма рака по своим симптомам очень напоминает мастит, так как при ней происходит подъем температуры, железа краснеет, в ней прощупывается уплотнение. В ряде случаев кожа на груди становится похожей на апельсиновую корку. Данный вид рака принято относить к 3 стадии онкозаболевания. Продолжительность жизни больных составляет около 3 лет.

На эту форму рака приходится от 3 до 10% всех случаев болезни. При такой карциноме основным симптомом становится наличие объемной опухоли, имеющей четкие границы между здоровой и пораженной тканями. Степень проникновения и инвазивности в иные органы и ткани крайне невысока.

Инвазивность роста опухоли зависит от уровня гистопатологической дифференцировки опухолевой ткани. Оценить его можно при выполнении микроскопического исследования материала, взятого посредством биопсии. Онкологи дифференцируют полученный результат следующим образом:

Уровень дифференцировки оценить невозможно (GX).
Обнаружено высоко дифференцированное образование (G1).
Опухоль умеренно дифференцирована (G2).
Наблюдается низко дифференцированное образование (G3).
Опухоль не дифференцирована (G4).

Наибольшая инвазивность роста выявлена у G3 и G4.

Тип экспрессируемых рецепторов крайне важен для осуществления гормонотерапии рака груди. На поверхности злокачественных клеток могут находиться рецепторы половых гормонов. Поскольку молочная железа – это орган, зависящий от эстрогена и прогестерона, клетки опухоли, образовавшейся в ней, также могут обладать рецепторами к этим гормонам. Если же эти рецепторы отсутствуют (при негативной карциноме), опухоль обычно бывает низкодифференцированной и бороться с ней гораздо сложнее.

Таким образом, классификация рака груди основывается на различных признаках заболевания. Все вместе они дают возможность специалисту увидеть всю картину в целом и не только подобрать индивидуальное лечение для каждой больной, но и сделать дальнейший прогноз развития заболевания.

Как я избавилась от мастопатии? Просто каждый день носила… Читать далее

Сегодня для каждой женщины одним из самых страшных диагнозов является карцинома молочной железы. Это заболевание многие знают, как рак груди, которое ежегодно поражает тысячи женских организмов. Если женщина не следит за своим здоровьем и не реагирует на сигналы своего тела, болезнь прогрессирует и в большинстве случаев приводит к смерти. Чаще всего карцинома молочной железы встречается у более зрелых женщин (45-55 лет), но есть много факторов, которые провоцируют заболевание и в более раннем возрасте (курение, длительное кормление грудным молоком, генетика, ушибы груди и т.д.).

Каждый организм имеет свои неповторимый индивидуальный характер, именно поэтому признаки болезни могут отличаться. Симптомы карциномы молочной железы будут зависеть от возраста, стадии заболевания, размера опухоли, а также метастазирования.

Распространенные симптомы карциномы:

утолщение в груди или под мышкой;
кровавые выделения из соска;
сосок покрывается коркой или изменяется в структуре;
сосок впячивается в молочную железу;
покраснение и увеличение молочной железы;
рябь на коже груди с оранжевым оттенком;
изменение контуров груди, например, одна грудь выше другой;
боль или язвы на коже груди, которые не заживают.

Всеми этими симптомами организм женщины дает понять, что пришло время обратиться к врачу, который в свою очередь проведет диагностику, чтобы узнать неинвазивная форма или инвазивная (инфильтрующая карцинома молочной железы) у пациентки, и назначить лечение.

От вида заболевания будет отталкиваться и лечение, поэтому так важно, вовремя провести диагностику, пока рак не начал прогрессировать. Специалисты различают неинвазивную и инвазивную карциному молочной железы. Неинвазивная форма характерна только на ранних стадиях рака (поэтому легко лечится) и наблюдается в проке или же в самой дольке молочной железы. Инвазивная карцинома считается более агрессивной формой рака, так как врастает в ткани молочной железы. Инвазивную форму делят несколько подвидов, а именно:

Дольковая карцинома молочной железы. Данная форма также известна, как лобулярная карцинома молочной железы, и она бывает, как инвазивной, так и неинвазивной. Характерна тем, что очень быстро развивается и распространяется по всей ткани груди. Достаточно часто обнаруживают одновременно в обеих молочных железах. Сложно поддается лечению.
Проточная карцинома молочной железы. Данный тип карциномы является наиболее распространенной формой рака молочной железы. Он развивается в протоках, которые несут молоко от долек (молочных желез) к соску. Бывает неивазивная и инвазивная форма. Инвазивная проточная карцинома молочной железы встречается у женщин в 78% всех случаев.
Муцинозная карцинома молочной железы. Этот вид рака чаще диагностируется у женщин в возрасте 67-70 лет. Развитие характерно тем, что раковые клетки начинают вырабатывать аномальную слизь, которой наполняются все протоки и дольки – это приводит к опухоли.

Важно отметить, что лобулярная стадия подразделяется на две формы: железистая и солидная карцинома молочной железы, что немало важно знать при назначении лечения. Карцинома молочной железы является злокачественной опухолью. Выживаемость в 5 лет варьирует в разных странах по-разному. Эти различия объясняются различиями в диагностике и терапии. Лечение рака будет зависеть от степени дифференцирования злокачественных клеток.

Высоко дифференцированная степень – это первая и легкая стадия рака, которая легко поддается лечению;
Умеренно дифференцированная карцинома молочной железы – это уже более агрессивная степень рака. Клетки этой ІІ стадии практически не похожи на здоровые, в отличие от прошлой стадии, где аномальные клетки максимально схожи со здоровыми. Лечение усложняется;
Низко дифференцированная степень – самая злокачественная и последняя стадия, на которой аномальные раковые клетки абсолютно не похожи на здоровые, да и к тоже еще и убивают их.

Не редко женщины диагностируют свое заболевание, как раз на последней стадии. Почему так бывает? Все просто. Боязнь врачей, не хочется тратить время, все само пройдет. Знакомые выражения? Женщины, берегите свое здоровье, советуйтесь с близкими людьми, говорите вслух о своих симптомах.

Лечение зависит от размера опухоли, возможных метастазов в лимфоузлы, подмышки или другие органы и стадии заболевания. Часто назначается комбинированная терапия, которая включает хирургию, химиотерапию или лучевую терапию.

Если у женщины обнаружили лобулярную карциному молочной железы, важно понимать, что аномальные клетки быстро разрастаются и лечебную терапию нужно начинать немедленно после обнаружения.

В случае рака молочной железы, должен быть рассмотрен вариант резекции опухоли (чего так опасаются все женщины). Даже если удаление всей молочной железы не всегда необходимо, все равно при удалении опухоли будут затронуты и здоровые ткани. Часто, во время операции удаляют и близлежащие лимфатические узлы (подмышечные). Решение будет зависеть от диагностики и хирурга.

Химиотерапия при карциноме молочной железы – это один из важных способов лечения болезни. Цель данного метода лежит в приеме препаратов (Авастин, Адрибластин, Кселод, Циклофосфан, Герцептин), которые притормаживают рост и развитие опухоли, которая разрушает здоровые клетки. Химиотерапия может быть назначена врачом, как самостоятельный метод лечения, так и до или после операции. Препараты препятствуют метастазированию, сохраняют и оберегают здоровые клетки, а также предупреждают рецидивы рака.

Это один из методов эффективного лечения, когда при воздействии ионизирующего излучения погибают аномальные клетки и сохраняются здоровые.

Важно! Берегите свое здоровье, ведь лечение рака всегда было есть и будет дорогостоящим и не каждому по карману. Обращайтесь вовремя к врачу по всем своим подозрениям, чтобы лечение прошло быстро и безболезненно.

Под аденокарциномой понимается новообразование разной степени злокачественности, которое развивается из клеток железистого типа, входящих в молочную железу. Этот вид патологии является основным в структуре злокачественных образований груди.

Нельзя с полной уверенностью назвать специфические причины, приводящие к этому заболеванию. Но все же существует ряд факторов, способствующих развитию этого заболевания:

Наследственность. Учеными доказано, что в организме человека есть ген, который увеличивает риск возникновения карциномы.
Систематические сильные травмы железы.
Фактор бесплодия.
Наличие в молочной железе опухоли доброкачественного характера.
Разного рода онкологические процессы в других органах.
Наличие у женщины мастопатии фиброзно-кистозной формы.
В случаях, если в железе уже присутствуют скопления атипичных клеток.
Нарушение баланса гормонального фона женщины. Такое нарушение может быть спровоцировано разнообразными факторами, например, если женщина родила в возрасте старше 30 лет, если было раннее половое созревание, может быть вызвано окончанием менструации позже 50 лет, а так же употреблением гормональных средств в значительных дозировках, используемых в лечении различных патологий.

Нельзя не отметить и факторы, провоцирующие болезнь.

Наличие вредных привычек у женщины, в частности пристрастия к сигаретам и алкогольным напиткам.
Нарушения рациона питания, в том числе употребление продуктов, в составе которых достаточно много жиров животного характера, красителей и других токсичных продуктов.

На самых ранних этапах болезни появляется высоко дифференцированная аденокарцинома молочной железы, при которой клетки изменены лишь немного, они практически ничем не отличаются от нормальных структур. Выраженных проявлений заболевания нет.

Через некоторое время симптомы становятся более значительными.

Постепенно впадает сосок.
Кожа груди становится измененной на некоторых участках.
Сама железа меняет форму и размер.
В области патологии появляется отек.
Из соска можно заметить появление патологических выделений, например, крови и гноя.
Лимфатические узлы над и под ключицей увеличиваются.
На поздних стадиях болезни появляется боль в месте образования.

Это основные проявления рака груди. Как уже стало понятно, они развиваются в зависимости от стадии болезни. Степень выраженности проявлений так же зависит от запущенности процесса.

В связи со значительным ростом онкопатологии в последнее время, всем женщинам рекомендовано регулярно проходить онкологический осмотр. Это делается для того, чтобы стало возможным обнаружить болезнь уже на самой ранней стадии.

Вся диагностика включает в себя несколько основных этапов.

Визуальный осмотр онкологом молочной железы, ее пальпация. В случае возникновения каких-либо подозрений, врач назначает дополнительные важные диагностические процедуры.
Ультразвуковое исследование, являющееся одним из достоверных способов обнаружения опухоли, определения ее размеров и примерной структуры.
Маммография, позволяющая при помощи рентгенологического обследования сделать снимок, отличающийся высокой четкостью и позволяющий хорошо рассмотреть все структуры железы. Нужно отметить, что маммография может быть выполнена еще и магнитно-резонансным способом. Кроме того, есть еще несколько вариантов проведения данной процедуры, каждый из которых имеет свои плюсы и минусы.
Биопсия. Данный этап диагностики состоит во взятии биологического материала, то есть кусочка измененной ткани. Полученный фрагмент направляется на гистологическое и цитологическое исследование, где определяется точно источник происхождения опухоли и степень ее дифференцировки.
Такие методы обследования как МРТ и КТ делают возможным обнаружение подобных опухолей в других органах, например, при подозрении на ее метастазирование.

к оглавлению ↑

Что касается разновидности опухоли, то ее можно разделить, например, по степени опухолевой зрелости, клиническим проявлениям, а так же по расположению опухоли.

Начать следует с классификации по степени дифференциации опухоли.

Высокодифференцированная аденокарцинома молочной железы. Ее клетки почти ничем не отличаются от нормальных, строение самой опухоли практически идентично строению железы. Такая опухоль лучше всех других поддается лечению на начальных этапах болезни.
Умеренно-дифференцированная аденокарцинома груди. По клинике очень похожа на высоко дифференцированную форму. Особенность ее в том, что при цитологическом исследовании отмечается явное различие между патологическими клетками и здоровыми. Заболевание, как правило, протекает как среднетяжелое. Риск развития каких-либо осложнений и прочих сопутствующих патологий довольно велик. Опухоль склонна распространяться большим количеством метастазов.
Недифференцированная форма заболевания. Все новообразование в значительной степени отличается от здоровой железы как на клеточном, так и на тканевом уровне. Клетки опухоли очень примитивны, их нельзя отнести определенно к какому-то конкретному виду тканей, именно по этому не получается установить собственно структуру и изначальное происхождение опухоли. Данная форма является самой неблагоприятной, так как выживаемость при ней очень низкая.

Что касается локализации опухоли, то процесс можно разделить на следующие группы.

Протоковая форма, когда опухоль произрастает и расположена в протоках железы.
Лобулярная форма, когда опухоль затрагивает ткани долек.

В зависимости от клиники выделяют следующие формы.

Воспалительная форма, схожая с маститом. Характеризуется явным покраснение кожных покровов, ее уплотнением, у пациентки повышается температура тела.
Медуллярная форма. Является злокачественной очень инвазивной опухолью достаточно больших размеров, метастазы появляются редко.
Протоковая форма инфильтративного характера. В данной ситуации образуются очаги и тяжи из злокачественных клеток, которые окружены плотной стромой из коллагена.
Папиллярная форма. Является неинвазивным внутрипротоковым образованием с низкой степенью злокачественности. Очень редко встречается.
Рак Педжета. Поражает только сосок и ареолу.

На сегодняшний день есть несколько методов лечения рака молочной железы. Естественно у каждого из методов есть свои плюсы и минусы, показания и противопоказания.

Это самый радикальный способ терапии, который может проводиться одним из двух способов.

Мастэктомия – оперативно удаляется вся железа целиком, лимфатические узлы и прилегающая клетчатка. При этом возможно проведение и пластики груди, с ее восстановлением.

Лампэктомия – удаляется только опухоль, а здоровая ткань остается, что позволяет сохранить саму железу. К сожалению, к проведению оперативного лечения есть ряд противопоказаний:

наличие карциномы лимфатической системы воспалительного характера;
значительный отек молочной железы;
отек всей верхней конечности;
наличие даже мельчайших метастазов в регионарных узлах;
наличие отдаленных метастазов.

к оглавлению ↑

Такой вид лечения применяется в ситуации, когда имеются рецепторы на железе, чувствительные к половым гормонам.

Вещества-антагонисты таких гормонов очень плохо действуют на злокачественные клетки, что дает положительный эффект в состоянии пациентов. Выбор препарата зависит от близости менопаузы.

Больным в пре-менопаузе назначаются такие средства как Тамоксифен, Гидрокортизол и прочие.
Больным в постменопаузе назначают Мегестрол и Аминоглютетимид.

к оглавлению ↑

На этом этапе лечения используются средства, обладающие цитостатическим действием. Такие препараты воздействуют на клетки, после чего те уменьшаются в размерах или совсем погибают. Подобная терапия в значительной мере снижает риск появления метастаз и возобновления болезни.

Наиболее часто используется комбинированный тип химиолечения, который подразумевает использование лекарств в течение 6 месяцев. Схема лечения зависит от типа опухоли и ее осложнений.

Золотым стандартом является назначение Циклофосфана, Фторугацила и Метотрексата.
Если есть большая вероятность рецидива опухоли лучше назначить комбинацию Циклофосфана, Фторурацила и Доксорубцина.
При наличии метастазирующей опухоли лучше всего подойдет Винбластин, Тиофосфамид, Доксорубцин и Таксол. Препараты назначаются обязательно в максимальных терапевтических дозах, конечно при отсутствии у пациентки признаком токсического поражения.

к оглавлению ↑

На сегодняшний день становится возможным облучить опухоль, не задевая при этом здоровую железу. После такой процедуры рак значительно уменьшается в размерах. Наиболее часто лучевое лечение сочетается с операцией. Это делается для большей эффективности терапии.

В случае рака молочной железы прогноз строится исходя из пятилетней выживаемости пациенток. Плюс ко всему эффект на прогноз могут оказать множество факторов. Самым основным является способность давать метастазы. Важно наличие у пациентки сопутствующих патологий.

Если опухоль маленькая (менее 2х см) и диагностирована своевременно, то лечение даст неплохой результат. Хороший эффект от лечения отмечается в терапии опухолей, не врастающих в окружающие ткани, а так же имеет высокую степень дифференцировки.

В любом случае данная проблема остается достаточно актуальной и опасной.

Лечить рак молочной железы трудно и очень травматично для всего организма, но отпускать на «самотек» проблему тоже нельзя. Это может иметь самые негативные последствия.

Дайте нам об этом знать — поставьте оценку (No Ratings Yet) Загрузка.

источник

Злокачественные опухоли выглядят под микроскопом по-разному. В одних случаях они напоминают нормальную ткань, а в других сильно от неё отличаются. В зависимости от этого, патологоанатомы и врачи условно делят злокачественные новообразования на два типа:

Высокодифференцированные опухоли сохраняют многие черты нормальных клеток и тканей. Они прорастают в соседние органы и метастазируют достаточно медленно.
Низкодифференцированные опухоли содержат клетки и ткани, которые сильно отличаются от нормальных. Они ведут себя намного агрессивнее, быстрее распространяются по организму.

От степени дифференцировки рака зависит то, насколько быстро он способен распространяться по организму. А это, в свою очередь, напрямую влияет на прогноз для пациента. Кроме того, низкодифференцированные опухоли хуже реагируют на лучевую терапию и химиотерапию. Врач-онколог учитывает это, составляя программу лечения.

Сами по себе термины «высокодифференцированный» и «низкодифференцированный» — достаточно общие и мало о чем говорят. Для более точной оценки врачи-онкологи выделяют 4 степени дифференцировки.

Показатель степени дифференцировки опухоли в онкологии принято обозначать латинской буквой G. Возможны пять вариантов:

Gx — степень дифференцировки определить не удается.
G1 — высокодифференцированные злокачественные новообразования.
G2 — средняя степень дифференцировки.
G3 — низкодифференцированные опухоли.
G4 — недифференцированный рак. Опухолевые клетки утратили все внешние признаки и функции нормальных клеток. Они похожи друг на друга, как две капли воды, их единственными занятиями становятся рост и размножение.

Так выглядит общая схема, но для разных видов рака степень дифференцировки определяют по-разному. Например, во время осмотра под микроскопом опухолевой ткани из молочной железы учитывают наличие молочных канальцев, форму и размеры клеточных ядер, активность деления клеток. Каждый из трех признаков оценивают в баллах, затем подсчитывают их общее количество.

При раке простаты используют специальную систему Глисона. В ней предусмотрено 5 градаций, каждой из которых присвоено определенное количество баллов, в соответствии с нумерацией, от 1 до 5:

В состав опухоли входят однородные железы, ядра клеток изменены в минимальной степени.
В состав опухоли входят скопления желез, которые разделены перегородками из соединительной ткани, но расположены друг к другу ближе, чем в норме.
В состав опухоли входят железы, имеющие разное строение и размеры, опухолевая ткань прорастает в перегородки из соединительной ткани и в соседние структуры.
В состав опухоли входят клетки, которые сильно отличаются от нормальных. Опухоль прорастает в соседние ткани.
Опухоль состоит из недифференцированных клеток.

Обычно рак простаты имеет неоднородное строение, поэтому врач должен выбрать из списка две градации, которые встречаются в большей части опухоли. Складывают баллы, по полученной цифре определяют степень дифференцировки.

Для описания злокачественной опухоли используют разные показатели. Деление в зависимости от степени дифференцировки — лишь одна из возможных классификаций.

Стадию рака определяют в зависимости от трех параметров, которые обозначают аббревиатурой TNM: насколько сильно опухоль проросла в соседние ткани, успела ли распространиться в лимфоузлы и дать метастазы.

В настоящее время всё большее значение приобретает классификация опухолей в зависимости от их «молекулярного портрета», особенно на поздних стадиях.

Однозначно на этот вопрос ответить не получится, так как рак бывает очень разным. Для одних злокачественных опухолей (например, рак молочной железы, рак простаты) степень дифференцировки имеет особенно важное значение, в случаях с другими онкологическими заболеваниями данный показатель отходит на второй план.

В целом можно сказать, что низкодифференцированные опухоли более агрессивны и нуждаются в более агрессивном лечении.

При составлении плана лечения врач-онколог ориентируется на многие показатели: стадию рака, степень дифференцировки, вид и локализацию опухоли, её «молекулярный портрет», состояние здоровья и сопутствующие заболевания пациента. Ранняя диагностика сильно повышает шансы на успешное лечение, но даже в запущенных случаях всегда можно помочь, существенно продлить жизнь пациента.

источник

Поиск и подбор лечения в России и за рубежом

Лечение во Франции // МАММОЛОГИЯ // Протоковый рак груди — дифференцировка клеток

Однако выяснить степень изменений в клетках протоков молочных желез иногда бывает трудно. Например, иногда патолог (специалист, изучающий полученные при биопсии образцы тканей) затрудняется выявить разницу между атипичной протоковой гиперплазией – состоянием, когда клетки протоков выглядят отлично от нормальных, но пока еще нет их неконтролируемого роста – и ПКИС – состоянием, при котором рост клеток уже неконтролируем. В такoм случае патолог может описать изменения со стороны клеток, как пограничная ПКИС.

Знание типа и степени дифференцировки протокового рака (ПКИС) может помочь в подборе наиболее адекватного лечения.

Патолог, изучая биопсийный материал, описывает как тип клеточных изменений, так и степень их дифференцировки. Степень зависит от того, насколько измененные клетки отличаются от нормальных.

Выделяют три степени протокового рака (ПКИС):

Обычно средняя степень сочетается с низкой.

По типу изменений различают следующие типы клеток:

Нормальные клетки ткани протоков молочной железы.

Cлишком большое количество клеток

Атипичная протоковая гиперплазия

Cлишком большое количество клеток, которые начинают выглядеть аномально

Протоковый рак (протоковая карцинома in situ)

Неконтролируемое разрастание клеток, которые, однако, не выходят за пределы протока (ПКИС). ПКИС с микроинвазией — некоторые типы ПКИС, при котором отмечаются признаки прорастания клеток в окружающие ткани.

Низкая и средняя степень дифференцировки

Низкая степень означает, что клетки ПКИС очень похожи на нормальные клетки протоков молочных желез либо схожи с атипичной протоковой гиперплазией.

Средняя степень дифференцировки иногда обозначается как умеренная.

Эти две степени отличаются тенденцией к низкой скорости роста клеток.

У женщин с низкой или средней степенью дифференцировки ПКИС отмечается высокий риск развития инвазивного рака молочной железы в будущем (через 5 лет), по сравнению с женщинами, не страдающими ПКИС. Но по сравнению с женщинами с высокой степенью дифференцировки ПКИС, у них первых риск развития нового рака или его рецидива намного меньше.

Низкая степень дифференцировки может проявляться несколькими видами структур:

Солидная (сплошная) структура – раковые клетки полностью заполняют просвет молочного протока.

Решетчатая структура – между скоплениями раковых клеток имеются промежутки (наподобие дырочек в швейцарском сыре).

Сосочковая структура – клетки в протоке расположены в виде листа папоротника.

Высокая степень дифференцировки

Протоковый рак (протоковая карцинома – ПКИС) высокой степени дифференцировки отличается быстрым ростом клеток.

Женщины с ПКИС с высокой степенью дифференцировки имеют очень высокий риск развития инвазивного рака молочной железы либо во время обнаружения ПКИС, либо в будущем.

Кроме того, у таких пациенток повышен риск раннего рецидивирования опухоли (в течение 5 лет). Иногда ПКИС с высокой степенью дифференцировки называется «комедо» (угорь) из-за внешнего вида. Они представляют собой омертвевшие раковые клетки, которые образуются внутри опухоли. Причина этого — быстрый рост опухоли, в результате чего некоторые клетки «недополучают» питательные вещества.

(495) 51-722-51 — лечение во Франции — лучшие клиники Парижа

источник

Поиск и подбор лечения в России и за рубежом

Пластическая хирургия, косметология и лечение зубов в Германии. подробнее.

MedTravel Лечение за рубежом » Маммология » Тип и степень дифференцировки клеток протокового рака

Степень дифференцировки клеток

Возможно, Вы слышали такие термины, как низкая дифференцировка карциномы или высокая дифференцировка. Этими терминами обозначается степень отличия раковых клеток от нормальных тканей. Однако выяснить степень изменений в клетках протоков молочных желез иногда бывает трудно. Например, иногда патолог (специалист, изучающий полученные при биопсии образцы тканей) затрудняется выявить разницу между атипичной протоковой гиперплазией – состоянием, когда клетки протоков выглядят отлично от нормальных, но пока еще нет их неконтролируемого роста – и ПКИС – состоянием, при котором рост клеток уже неконтролируем. В таком случае патолог может описать изменения со стороны клеток, как пограничная ПКИС.

Выделяют три степени протокового рака (ПКИС):

Низкая степень.
Средняя степень.
Высокая степень.

Обычно средняя степень сочетается с низкой.

По типу изменений различают следующие типы клеток:

Нормальные клетки ткани протоков молочной железы.
Протоковая гиперплазия. Cлишком большое количество клеток.
Атипичная протоковая гиперплазия. Cлишком большое количество клеток, которые начинают выглядеть аномально.
Протоковый рак (протоковая карцинома in situ). Неконтролируемое разрастание клеток, которые не выходят за пределы протока (ПКИС). ПКИС с микроинвазией — некоторые типы ПКИС, при котором отмечаются признаки прорастания клеток в окружающие ткани.

Низкая и средняя степень дифференцировки

Эта степень означает, что клетки ПКИС очень похожи на нормальные клетки протоков молочных желез либо схожи с атипичной протоковой гиперплазией. Средняя степень дифференцировки иногда обозначается как умеренная. Эти две степени отличаются тенденцией к низкой скорости роста клеток. У женщин с низкой или средней степенью дифференцировки ПКИС отмечается высокий риск развития инвазивного рака молочной железы в будущем (через 5 лет), по сравнению с женщинами, не страдающими ПКИС. Но по сравнению с женщинами с высокой степенью дифференцировки ПКИС, у них первых риск развития нового рака или его рецидива намного меньше.

Низкая степень дифференцировки может проявляться несколькими видами структур:

Солидная (сплошная) структура – раковые клетки полностью заполняют просвет молочного протока.
Решетчатая структура – между скоплениями раковых клеток имеются промежутки (наподобие дырочек в швейцарском сыре).
Сосочковая структура – клетки в протоке расположены в виде листа папоротника.

Высокая степень дифференцировки

Протоковый рак (протоковая карцинома – ПКИС) высокой степени дифференцировки отличается быстрым ростом клеток. Женщины с ПКИС с высокой степенью дифференцировки имеют очень высокий риск развития инвазивного рака молочной железы либо во время обнаружения ПКИС, либо в будущем. Кроме того, у таких пациенток повышен риск раннего рецидивирования опухоли (в течение 5 лет). Иногда ПКИС с высокой степенью дифференцировки называется «комедо» (угорь) из-за внешнего вида. Они представляют собой омертвевшие раковые клетки, которые образуются внутри опухоли. Причина этого — быстрый рост опухоли, в результате чего некоторые клетки «недополучают» питательные вещества.

(495) 50-253-50 — бесплатная консультация по клиникам и специалистам

источник

Поиск и подбор лечения в России и за рубежом

Маммология — Болезни молочной железы — Mammalogy.su

Возможно Вы слышали такие термины, как низкая дифференцировка карциномы или высокая дифференцировка. Этими терминами обозначается степень отличия раковых клеток от нормальных тканей. Однако выяснить степень изменений в клетках протоков молочных желез иногда бывает трудно. Например, иногда патолог (специалист, изучающий полученные при биопсии образцы тканей) затрудняется выявить разницу между атипичной протоковой гиперплазией – состоянием, когда клетки протоков выглядят отлично от нормальных, но пока еще нет их неконтролируемого роста – и ПКИС – состоянием, при котором рост клеток уже неконтролируем. В такoм случае патолог может описать изменения со стороны клеток, как пограничная ПКИС.

Выделяют три степени протокового рака (ПКИС):

Низкая степень,
Средняя степень,
Высокая степень.

Обычно средняя степень сочетается с низкой.

По типу изменений различают следующие типы клеток:

Нормальные клетки ткани протоков молочной железы.

Cлишком большое количество клеток

Атипичная протоковая гиперплазия

Cлишком большое количество клеток, которые начинают выглядеть аномально

Протоковый рак (протоковая карцинома in situ)

Неконтролируемое разрастание клеток, которые однако не выходят за пределы протока (ПКИС). ПКИС с микроинвазией — некоторые типы ПКИС, при котором отмечаются признаки прорастания клеток в окружающие ткани.

Низкая и средняя степень дифференцировки

Низкая степень дифференцировки может проявляться несколькими видами структур:

Солидная (сплошная) структура – раковые клетки полностью заполняют просвет молочного протока.
Решетчатая структура – между скоплениями раковых клеток имеются промежутки (наподобие дырочек в швейцарском сыре).
Сосочковая структура – клетки в протоке расположены в виде листа папоротника.

Высокая степень дифференцировки

Протоковый рак (протоковая карцинома – ПКИС) высокой степени дифференцировки отличается быстрым ростом клеток. Женщины с ПКИС с высокой степенью дифференцировки имеют очень высокий риск развития инвазивного рака молочной железы либо во время обнаружения ПКИС, либо в будущем. кроме того, у таких пациенток повышен риск раннего рецидивирования опухоли (в течение 5 лет). Иногда ПКИС с высокой степенью дифференцировки называется «комедо» (угорь) из-за внешнего вида. Они представляют собой омертвевшие раковые клетки, которые образуются внутри опухоли. Причина этого — быстрый рост опухоли, в результате чего некоторые клетки «недополучают» питательные вещества.

источник

MYB высоко экспрессируется в опухолях молочной железы (ER + ve) с рецепторами эстрогена и опухолевых клеточных линиях. Недавно мы продемонстрировали, что MYB необходим для пролиферации клеток рака молочной железы ER + ve и теперь изучил его роль в дифференцировке эпителия молочной железы.

Клетки рака молочной железы MCF-7 обрабатывали бутиратом натрия, сукцинатом витамина Е или 12-О-тетрадеканоилфорбор-13-ацетатом, чтобы индуцировать дифференцировку, как было определено окрашиванием краской Нила, липидных капель и экспрессией β-казеина. Ненукогенные мышиные линии эпителиальных клеток молочной железы (MEC), HC11, были индуцированы для дифференциации с лактогенными гормонами. Уровни MYB манипулировали индуцируемым lentiviral shRNA-опосредованным нокдауном и ретровирусной избыточной экспрессией.

Мы обнаружили, что экспрессия MYB снижается после химически индуцированной дифференциации линии клеток рака молочной железы человека MCF-7 и гормонально-индуцированной дифференцировки линии опухолегенной мышиной эпителиальной клетки молочной железы (MEC), HC11. Мы также обнаружили, что спРНК-опосредованный нокдаун MYB инициировал дифференцировку клеток рака молочной железы и значительно сенсибилизировал их к дифференцирующим и проапоптотическим эффектам индуцирующих дифференцировку агентов (ДИА). Сенсибилизация к проапоптотическим эффектам DIA опосредуется уменьшенной экспрессией BCL2, которую мы показываем здесь, является прямой мишенью MYB в клетках рака молочной железы. И наоборот, принудительная экспрессия MYB приводила к тому, что клетки оставались в недифференцированном состоянии с одновременным подавлением апоптоза при наличии DIA.

В совокупности эти данные предполагают, что функция MYB имеет решающее значение для регулирования баланса между пролиферацией, дифференцировкой и апоптозом в MEC. Более того, наши данные показывают, что MYB может быть жизнеспособной терапевтической целью при раке молочной железы и предложить конкретные подходы к использованию этой возможности.

Существует критический баланс между пролиферацией, дифференцировкой и апоптозом в клеточном составе каждой ткани. В кроветворной системе MYB явно играет определенную роль в поддержании этого баланса. MYB необходим для гемопоэза [1], высоко экспрессируется в незрелых кроветворных клетках, а его экспрессия снижается при дифференцировке [2,3]. Более того, принудительная экспрессия нормальных и активированных форм MYB может подавлять дифференцировку и поддерживать пролиферацию гемопоэтических клеток [4-6].

По этим причинам большинство работ по MYB сосредоточено на его роли в нормальном и лейковом гематопоэзе. Тем не менее, все больше доказательств роли MYB в дифференцировке кишечных клеток и гомеостаза, особенно в раке толстой кишки [7]. Характер экспрессии MYB в обычных склепах толстой кишки предполагает, что, подобно гемопоэтической системе, экспрессия высока в незрелых, быстро пролиферирующих клетках и уменьшается с дифференциацией и созреванием [8,9], тогда как уменьшенная активность MYB нарушает диффузию кишечной эпителии, дифференцировку и жизнеспособность [8,9]. Участие MYB в эпителиальных опухолях было впервые предложено усилением MYB в определенных клеточных линиях, полученных из карциномы толстой кишки [10], и его экспрессией в значительной доле опухолей [7,11]. Кроме того, экспрессия MYB в опухолях толстой кишки коррелирует с плохим клиническим прогнозом [12], и в этом заболевании часто мутируется важный регуляторный регуляторный уровень MYB [13,14]. Кроме того, MYB требуется для пролиферации клеток карциномы толстой кишки [7,15] и не регулируется во время дифференцировки этих клеток [9], тогда как, наоборот, эктопическая экспрессия MYB может подавлять их дифференцировку [16].

Напротив, гораздо меньше известно о функциях MYB в эпителиальных клетках молочной железы. Тем не менее, было показано, что MYB экспрессируется на относительно высоких уровнях в положительных раковых опухолях рака эстрогена (ER) и линиях опухолевых клеток [17]. Более того, мы и другие [18] ранее показали, что MYB является прямой мишенью передачи сигналов эстрогена / ER и что экспрессия MYB в клетках рака молочной железы регулируется затуханием транскрипции в пределах ее первого интрона [19]. Важно отметить, что мы также недавно показали, что MYB необходим для распространения ER-положительных, но не ER-негативных, линий рака молочной железы [19], впервые определяющих функциональную роль MYB при раке молочной железы. Кроме того, Fang и др. [20] сообщили о пролактин-индуцируемой ассоциации между MYB и Stat5a и что ряд стимулирующих Stat5a промоторов, таких как ген CISH, дополнительно стимулируется MYB. Их результаты показали, что MYB может действовать как коактиватор для Stat5a, а также поддерживает пролиферативную функцию MYB при раке молочной железы человека.

Чтобы в дальнейшем понять функцию MYB при раке молочной железы и в эпителиальных клетках молочной железы (MEC), мы теперь исследовали его роль в дифференцировке этих клеток. Дифференциация клеточных линий рака молочной железы человека (MCF-7 и ZR-75-1) и немеклоригенного MEC (HC11) может быть индуцирована химическими агентами или лактогенными гормонами соответственно и приводит к морфологическим и молекулярным свойствам, которые характерны для зрелых протоковые эпителиальные клетки. Мы обнаружили, что линии клеток карциномы молочной железы, в которых экспрессия MYB была «сбита» с помощью shRNA, показывают изменения, которые указывают на то, что дифференцировка произошла в некоторых из этих клеток. Более того, эти выбиваемые клетки MYB более чувствительны к дифференцировке после воздействия малых доз индуцирующих дифференцировку агентов и могут быть введены в апоптоз с дозами, которые обычно только индуцируют дифференцировку. Напротив, эктопическая экспрессия MYB подавляла дифференцировку и апоптоз, индуцированные агентами, индуцирующими дифференцировку (DIAs). Взятые вместе, наши данные показывают, что MYB играет важную роль в регулировании баланса между пролиферацией, дифференцировкой и апоптозом как в нормальных, так и в злокачественных эпителиальных клетках молочной железы, и что эта роль удивительно похожа на то, что она играет в гемопоэтических и кишечных эпителиальных клетках. Наконец, наше наблюдение за тем, что ингибиторы ДИ и ингибирования MYB синергируют при убийстве опухолевых клеток молочной железы, предлагает подход к разработке новых методов лечения ER / MYB-положительного рака молочной железы.

Линии клеток рака молочной железы MCF-7 и ZR-75-1 культивировали в DMEM (Invitrogen, Mount Waverley, Vic, Australia) с добавлением 10% FBS, l-глутамина, пенициллина G и сульфата стрептомицина (все из GIBCO / BRL , Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США). Все клеточные линии поддерживали при 37 ° С в увлажненном 5% -ном углекислотном / 95% -ном инкубаторе воздуха. До достижения слияния клетки трипсинизировали раствором 0,05% трипсина / 0,53 мМ ЭДТА и ресуспендировали в свежей среде для выращивания до нанесения на новую поверхность роста.

Бутират натрия, сукцинат витамина Е и 12-O-тетрадеканоилфорбор-13-ацетат были приобретены у Invitrogen (Mount Waverley, Vic, Australia).

HC11 клетки выращивали в среде среды Roswell Park Memorial Institute (RPMI) -1640 (Invitrogen, Mount Waverley, Vic, Australia), содержащей 10% FBS, 5 мкг / мл инсулина и 10 нг / мл эпидермального фактора роста (как от Sigma- Aldrich, Castle Hill, NSW, Австралия). Дифференцирование индуцировали через три дня после достижения слияния в среде, содержащей 5 мкг / мл инсулина, 1 мкг / мл гидрокортизона и 5 мкг / мл пролактина (Sigma-Aldrich, Castle Hill, NSW, Australia).

Для окрашивания липидных капель клетки, выращенные на стеклянных чехлах, дважды промывали PBS и фиксировали в течение 20 минут PBS, содержащим 4% параформальдегида при 20 ° C. После еще одного PBS промывают и окрашивают в течение 15 минут с помощью Nile Red и 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI) (Sigma-Aldrich, Castle Hill, NSW, Australia) клетки промывают и монтируют PBS. Флуоресцентную визуализацию выполняли с использованием автоматических колес возбуждения и эмиссионного фильтра флуоресцентного AxioSkop 2 plus Microscope (Carl Zeiss Pty Ltd, Новый Южный Уэльс, Австралия). Для проточного цитометрического анализа клетки, не выращенные на стеклянном покрытии, промывали в PBS и ресуспендировали в PBS, содержащем 0,01% Нил-красного в течение 15 минут при 37 ° C. После трех промывок в PBS их анализировали с помощью проточной цитометрии с использованием прибора FACS Calibur (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA), и первичные данные затем обрабатывались с использованием программного обеспечения CellQuest (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) ,

Для экспериментов по трансфекции siRNA клетки MCF-7 высевали и трансфектировали на следующий день 100 нМ специфических специфических BCL2 или контрольных siRNAs (Dharmacon Research, Lafayette, CO, USA) с использованием липофектамина 2000 (Invitrogen, Mount Waverley, Vic, Australia ). Вкратце, все трансфекции проводили в смеси Opti-MEM и полной среды без антибиотиков, как описано ранее [21]. Время инкубации трансфекции для комплексов siRNA / lipofectamine 2000 составляло 24 часа.

Клетки MCF-7 выращивали до 95% слияния в DMEM, не содержащем фенол-красный цвет, с добавлением 10% фракции FBS на 72 часа; в это время добавляли 10 нМ b-эстрадиола в течение 12 часов. Хроматин-иммунопреципитацию (ChIP) проводили, как описано ранее [22], используя кроличьего иммуноглобулина (Ig) G (Sigma, Castle Hill, NSW, Australia) и 1.1 анти-Myb / 5.1 анти-Myb или 1.1 анти-Myb / Thelma anti- Mybl моноклональные антитела [23]. Полученные образцы использовали в качестве шаблонов ПЦР в реальном времени для количественного определения связывания MYB с различными областями BCL2, MYC или GAPDH. Последовательности праймеров, используемых в ПЦР, были: сайты связывания Myb (MBS) 1 F 5′-GCTCAGAGGAGGGCTCTTTC-3 ‘, MBS 1 R 5′-TTTCTCCTCCTCCTGGTCCT-3′, MBS 2 F 5’-CCCGCCTCTTCACCTTTCAG-3 ‘, MBS 2 R 5 ‘-CAATGGCACTTCAAGTCCCGA, MBS 3 F-5′-GGTCAGGTGGACCACAGGT-3′, MBS 3 R 5’-GTCCAAGAATGCAAAGCACA-3 ‘, MBS 4 F 5′-CACAGCGCCAACAGAACTAC-3′, MBS 4 R 5’-ACAGGCCAGATGCCAGATAC-3 ‘, MYC F 5’-GCCTGCGATGATTTATACTCACAG-3 ‘, MYC R 5′-CGGAGATTAGCGAGAGAGGATC-3′, GAPDH F 5’-ATCAATGGAAATCCCATCACCATCT-3 ‘, GAPDH R 5′-GGTTTTTCTAGACGGCAGGTCAG-3′, контроль восходящего потока F 5’-GCAGGTGCTCAACAGATGAA-3 ‘, Контроль восходящего потока R 5’-GGGATTGCCTTACAGGTGAA-3 ‘.

Аппотоз-индуцированная фрагментация ядерной ДНК была обнаружена с использованием набора для обнаружения смертельных явлений в клетках TMR Red In Situ (Roche Diagnostics Corp, Indianapolis, IN, США) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, спустя 24 часа после обработки ДИА, фиксировались клетки, выращенные на стеклянных чехлах. Затем следовала инкубация в концевой дезоксинуклеотидилтрансферазы (TdT) -методической реакционной смеси с концевой мешалкой (TUNEL) в течение 60 минут при 37 ° C. Слайды трижды промывали в PBS / Triton X-100 / BSA (0,3%) и визуализировали на флуоресцентном микроскопе. Клетки, не выращенные на стеклянном покрытии, промывали в PBS и ресуспендировали в реакционной смеси PBS и TUNEL в течение 60 минут при 37 ° C. Клетки промывали три раза в PBS и анализировали с помощью проточной цитометрии на FACS Calibur, как описано ранее.

Общая РНК была приготовлена с использованием RNeasy MiniKit (Qiagen, Valencia, CA, США) в соответствии с инструкциями производителя. Один микрограмм общей РНК транскрибировали с обратной транскрипцией в общей сложности 20 мкл с использованием SuperScript III (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Полученную кДНК затем разбавляли до общего объема 100 мкл стерильной водой. Каждая ПЦР в реальном времени состояла из 1 мкл продукта разведенной обратной транскриптазы, iQ SYBR Green Supermix (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) и 50 нМ прямого и обратного праймеров (см. Ниже). Реакции проводили на RotorGene 3000 (Corbett Research, Sydney, NSW, Australia) при 95 ° C в течение 10 минут, затем 40 циклов 95 ° C в течение 20 секунд, 56 ° C в течение 15 секунд и 72 ° C для 20 секунд. Измерения флуоресценции анализировали с использованием программного обеспечения RotorGene 3000. Выражение смены складок каждого гена рассчитывали с использованием метода ΔΔCT с циклофилином А в качестве внутреннего контроля. Праймеры, используемые для ПЦР в реальном времени, были: MYB F, 5′-GCCAATTATCTCCCGAATCGA-3 ‘; MYB R, 5’-ACCAACGTTTCGGACCGT A-3 ‘; β-казеин F, 5’-CCCTCAAATCCCAAAACTCA-3 ‘; ß-казеин R, 5’-GAGCAGAAGGGCTTGAACAG-3 ‘; BCL2F, 5’-GTTCGGTGGGGTCATGTGTGTGGAGAGCG-3 ‘; BCL2R 5’-TAGCTGATTCGACGTTTTGCCTGA-3 ‘; Cyclophilin A F, 5’-GGCAAATGCTGGACCCAACACAAA-3 ‘; Циклофилин A R, 5’-CTAGGCATGGGAGGGAACAAGGAA-3 ‘.

Вестерн-блот-анализ проводили, как описано ранее [24]. Вкратце, экстракты, полученные в буфере для загрузки SDS, разрешались в гелях SDS / 10% PAGE и переносили в PVDF-мембраны. Они инкубировали в течение ночи в присутствии анти-c-Myb-антител 1,1 [25] и были разработаны с использованием вестерн-блоттинговых субстратов ECL (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA).

Мы впервые охарактеризовали дифференцировку клеток MCF-7 (и ZR-75-1, не показанных данных) с использованием нескольких сообщенных маркеров этого процесса. Ряд соединений способен индуцировать дифференцировку в клетках рака молочной железы, таких как бутират натрия (NaBu), сукцинат витамина E (VES) или 12-O-тетрадеканоилфорбор-13-ацетат (TPA) [26,27]. Мы исследовали формирование липидных капелек в качестве индикатора дифференцировки клеток рака молочной железы [28] с использованием флуоресцентного красителя Нила Красного в сочетании с флуоресцентной микроскопией или проточной цитометрией [29]. Обработанные аппаратом клетки MCF-7, выраженные только минимальным количеством детектируемых липидных вакуолей при окрашивании красным нилом (рис. 1a и 1b). Напротив, наблюдалось дозозависимое увеличение накопления липидных капель в цитоплазме клеток, обработанных NaBu в течение 72 часов, и в клетках, обработанных VES и TPA [см. Дополнительный файл 1].

Индукция дифференцировки и клетки, обработанные индуцирующим дифференцировку агентом NaBu. (а) Клетки MCF-7 выращивали на стеклянных крышках и обрабатывали с увеличением количества бутирата натрия (NaBu), как указано, в течение 72 часов. Морфологические изменения оценивали с помощью флуоресцентной микроскопии (× 63). Индукцию биохимической дифференциации определяли с использованием окраски Нила-красного для липидных везикул в клетках (красный). Ядерную ДНК окрашивали 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) (синий). (б) Количественный анализ индукции липидов. Ячейки MCF-7, как указано выше, окрашивали краской Нила и анализировали с помощью проточной цитометрии, как описано в Материалах и методах. Стандартные отклонения показаны как полосы ошибок (n = 6). (c) Количественная (Q) ПЦР экспрессии мРНК β-казеина после лечения с увеличением дозы NaBu. Индукция β-казеина нормирована против индукции в необработанных клетках. (d) Q-ПЦР мРНК MYB из MCF-7. Клетки MCF-7, обработанные увеличением дозы NaBu, показывают зависимое от дозы снижение экспрессии мРНК MYB. Данные из (c) и (d) представляют средние значения (n = 6), а стандартные отклонения показаны как полосы ошибок. Все данные Q-PCR были нормализованы против контролей циклофилина А. (e) Вестерн-блот-анализ MYB из общего количества лизатов клеток, как указано выше. Также показано управление нагрузкой на β-тубулин. Результаты свидетельствуют о двух независимых экспериментах.

Поскольку клетки эпителия молочной железы подвергаются дифференцировке, происходит увеличение транскрипции гена, кодирующего молочный белок ß-казеин [26]; как таковой, это может быть использовано в качестве молекулярного маркера для дифференциации. Действительно, количественная ОТ-ПЦР показала, что сообщение β-казеина было значительно увеличено после обработки клеток MCF-7 с увеличением концентрации DIA в течение 72 часов (фиг. 1c).

Предыдущие исследования показали, что дифференцировка ряда различных типов клеток, особенно гемопоэтических [2,3] и кишечных эпителиальных клеток [8,9,11,14,16], связана с уменьшением экспрессии MYB. Поэтому мы спросили, будет ли уменьшаться уровень MYB, если клетки карциномы молочной железы прошли дифференциацию. Сообщение MYB было, как и ожидалось, легко обнаруживалось в контрольных клетках MCF-7 с помощью количественной RT-PCR, но обработка с увеличением концентрации NaBu в течение 72 часов вызывала зависящее от дозы снижение уровня сообщения MYB (рисунок 1d). Вестерн-блот-анализ полных клеточных лизатов показал соответствующий профиль для белка MYB (рис. 1е).

HC11 представляет собой иммортализованную линию новообразованных эпителиальных клеток молочной железы, которая возникла из ткани грудной железы средней груди мыши и сохранила важные характеристики нормальных эпителиальных клеток молочной железы [30]. После стимуляции лактогенными гормонами эти клетки дифференцируют, синтезируют β-казеин и образуют блистерные структуры, называемые «куполами», которые, как полагают, являются результатом выделения жидкости. Мы вначале подтвердили, что МЭК ХС11 могут подвергаться дифференцировке в присутствии лактогенных гормонов, что контролируется наличием липидных капель, обнаруженных Нилом Красным (рис. 2а и 2с), образованием куполов (рис. 2б) и индукцией β- казеина (данные не показаны). В ходе таких экспериментов дифференцировка клеток происходила постепенно после удаления эпидермального фактора роста (EGF) в течение 24 часов и последующего добавления лактогенных гормонов в течение семи дней. Количественный анализ ОТ-ПЦР и вестерн-блоттинга показал снижение уровней установившегося состояния мРНК MYB и белка соответственно, так как эти клетки подвергались дифференцировке (рис. 2d и 2е). Эти данные свидетельствуют о том, что снижение уровней MYB является частью нормального пути дифференциации эпителиальных клеток молочной железы и подтверждают использование клеточных линий карциномы молочной железы и MEC в качестве моделей для изучения роли MYB в этом процессе.

Экспрессия Myb во время слияния / гормональной дифференцировки клеток HC11. HC11 пролиферировали (1-й день), выращивали до слияния (2-й день), а затем дифференцировали путем удаления эпидермального фактора роста (EGF) в течение 24 часов (3-й день) с последующим добавлением среды дифференцировки, содержащей лактогенные гормоны (дни 4-9) , (а) клетки HC11, выращенные на стеклянных крышках, окрашивали ДНК (4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол [DAPI], синий), липидные везикулы (красный красный цвет) и смотрели под флуоресцентной микроскопией на 1-й день и День 9. (b) Клетки HC11 выращивали в 24-луночных чашках и подвергали дифференцированию, как описано. Показаны световые микрофотографии конфлюэнтных клеток и «куполов» (стрелка), которые образуются в присутствии среды, индуцирующей дифференцировку. (c) Количественный анализ окрашивания Нила красным путем проточной цитометрии. Клетки HC11 анализировали на формирование липидных везикул на разных стадиях дифференцировки. (d) Количественная ПЦР мРНК MYB из клеток HC11, подвергающихся дифференцировке. Клетки HC11 анализировали каждый день во время процесса дифференцировки. Стандартное отклонение представлено ошибками. (e) Вестерн-блот-анализ белка MYB из общего клеточного лизата клеток HC11 во время процесса дифференцировки. Также показано управление нагрузкой на β-тубулин. Результаты свидетельствуют о двух независимых экспериментах.

источник