Иммуногистология при раке молочной железы

Иммуногистохимическое исследование – вид изучения тканей при использовании определенных реактивов. После проведения биопсии или операции, взятый материал подвергается окрашиванию для гистологического метода исследования.

При иммуногистохимии рака молочной железы реактивы, которые используют, содержат в себе антитела, меченные определенными веществами. Антитело-белковое соединение, которое образует специфическую реакцию при соединении с другими участками. В результате такого метода можно судить о присутствии разных веществ в тканях.

В теле человека каждый день происходят иммуногистохимические реакции, суть которых основано на взаимодействии антиген-антитело. Например, при болезни, когда вирусы и бактерии попадают в организм человека, в крови образуются антитела, которые захватывают чужеродные вещества. По такому принципу работает и вакцинация, когда в ответ на вводимые антигены вырабатываются антитела, которые при болезни захватывают чужеродные микроорганизмы.

Обнаружить онкологическое заболевание возможно при использовании иммуногистохимического исследования, например, при раке молочной железы. Метод основывается на введении сыворотки с антителами, который связывается с опухолевые факторы в организме.

Множество ученых по всему миру подтвердили наличие ряда определенных факторов в опухолях, которые напрямую связаны с прогнозированием онкологического заболевания и ответом на соответствующее лечение.

К таким факторам принадлежат:

Рецепторы к женским половым гормонам;
Маркеры активности онкологического процесса;
Чувствительность к противоопухолевым средствам;
Сосудистый фактор роста опухоли.

При проведении обычного гистологического исследовании при подозрении на рак грудной железы, невозможно обнаружить такие характеристики, которые может содержать в себе опухоль, поэтому иммуногистохимия рака молочной железы имеет существенное преимущество, перед другими методами исследования.

Материалом для исследования является опухолевая ткань, забор которой производится во время биопсии или же во время операции. Стоит отметить, что материал должен обязательно браться перед началом курса терапии, иначе результат окажется недостоверным.

Взятый материал помещают в формалин (дезинфицирующее средство) и отправляют в лабораторию. Там проводят его обезжиривание, а затем заливают специальным парафином. Далее образец тонко нарезают на пластины до 1 мкм, раскладывают на предметных стеклах и окрашиваются реактивами необходимой концентрации.

Интенсивность окраски реактивов с опухолевыми клетками зависит от содержания рецепторов. Чем больше их находится в материале, тем интенсивнее будет окраска. Гистологи интерпретирует результаты окраски по специальной шкале:

0-1+ обозначает отсутствие онкологического процесса;
2+ означает среднюю концентрацию HER2-белка в образце и отрицательное новообразование;
3+ свидетельствует о повышенном содержании HER2-белка, а онкологическое образование положительное.

Получить результаты можно уже через одну-две недели.

В лаборатории Юсуповской больницы опытные специалисты произведут грамотный забор материала и дадут качественную расшифровку полученных данных. Мощная исследовательская база позволить максимально быстро верифицировать диагноз и начать лечение, основываясь на иммуногистохимии опухоли. Огромный опыт враче и среднего медицинского персонала гарантирует пациенту успешность и эффективность от проведенного лечения.

источник

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы: показания, подготовка к анализу, расшифровка ИХГ

Давайте для начала мы разберем, что же такое иммуногистохимическое исследование. Под ним подразумевается микроскопическое исследование ткани, которое основано на выявлении антител на патологические вещества.

Разделяют два метода исследования:

прямой (прямая реакция антител непосредственно на патологическое вещество);
непрямой метод (патологические вещества, распознаются с помощью вторичных антител).

ферменты — белковые молекулы, они же молекулы РНК. Так например: щелочная фосфатаза (фермент гидролаза);
флуоресцентные — тот же физический процесс, например — флуоресцеин — органическое соединение;
электроно-плотные частицы, к таким относится золото.

изучения и исследования секреторных процессов, в том числе синтетических;
распознавания гормонов рецепторов;
выявления различных типов, родов клеток по их свойствам.

В области исследования грудной железы данное исследование используется в качестве предварительной диагностики для установления точного диагноза, в том числе при злокачественных образованиях. Данное исследование дает возможность определить следующее:

Точное образование (доброкачественное или злокачественное) и назначение правильного лечения.
Точное месторасположение (наличие метастаз в организме и их дислокацию).
Первоначальный очаг заболевания.
Стадию заболевания (например, степень рака).
Пролиферацию клеток (распознать скорость размножения и развития раковых клеток).
Ответ раковых клеток на медикаменты, их чувствительность, также можно отследить чувствительность к химиотерапии, к лучевой терапии.

Исследование способно детально изучить заболевание, что дает возможность полностью диагностировать заболевание и подобрать правильное лечение. Это играет не маловажную роль в диагностике, лечении, продолжительности жизни онкологических больных. Также можно сказать, что с помощью данного метода можно:

Иммуногистохимия при раке молочной железы

на более раннем сроке диагностировать заболевание;

выяснить непосредственный очаг заболевания;

найти границы заболевания;

определить точное место образования;

определить точный вид новообразования;

определить точную стадию развития;

определить рост патологических клеток;

узнать реакцию на препараты (в частности, на гормоны, на лучевую терапию и так далее);

определить необходимость операции;

помогает точно оценить качество лечения.

В основном данная диагностика используется для изучения (исследования) любой ткани человеческого организма. Основа для проведения данного исследования — это любое новообразование, которое предполагает развитие рака. Также исследование проводится для изучения эндометрия:

при метастазах;
при бесплодии;
после неудачных попыток ЭКО;
при различных заболеваниях матки;
при различных видах патологий органов малого таза;
при постоянных невынашивания плода;
при заболевания эндометрия.

Исследование не имеет абсолютных противопоказаний. Препятствием для ИГХ может быть, только невозможность по каким либо причинам забора материла на исследование.

Данный вид исследования может проводится только в специализированных лабораториях, при этом врач должен иметь специальную квалификацию, пройти специальное обучение.

Забор проходит непосредственно пораженного участка кожи с помощью биопсии. Также забор материала может происходить во время хирургического вмешательства на молочной железе.

Потом полученный материал специально обрабатывается и консервируется. Для этого она заливается парафином. В таком виде, в парафине, материал может правильно храниться в течении многого времени.

Следующим этапом является микротомирование. Материал нарезают на тонкие пласты при помощи специального аппарата.

В дальнейшим нарезанные пласты окрашиваются с определенными антителами и все это изучается под микроскопом. В некоторых лабораториях изучается окрашенный материал на автоматическом приборе.

две-три неуспешных процедур ЭКО;
не первое (постоянное) невынашивание плода на ранних сроках;
бесплодие.

Во время исследования могут выявить такие заболевания как:

эндометрит,
гиперплазия,
неполную трансформацию эндометрия,
нарушение фаз развития
и другие заболевания.

Как показывает практика, именно заболевания, связанные с эндометрием на 73% являются причиной бесплодия.

Данное исследование проводится в определенный день менструального цикла, обычно на 5-7 день смотрят воспалительные процесса эндометрия, на 20-24 день цикла — оценивают секрецию, смотрят рецепторную функцию.

Для этого пациентке рекомендуют:

не принимать гормоны за неделю до анализа;
не принимать кровоостанавливающих препаратов;
правильная интимная гигиена.

Процедура происходит на гинекологическом кресле. Женщину обезболивают специальными препаратами и вводят зеркало. Делается санация половых органов. Вводится специальный прибор — система гистероскопа и проводится забор. Далее убирают прибор, проводя санацию органов.

Потом женщина находится под наблюдением врача до полного восстановление, примерно 1-2 часа.

Результаты примерно готовятся 3-5 дней. Оценить результаты может только специалист.

HER2neu или, по-другому говоря, человеческий рецептор эпидермального фактора роста. Несет ответственность за продукцию белка. При поражении раковых клеток усиливается беспорядочный рост.

Если результат пишется 1 (+), то это говорит о том, что избытка белка нет, следствие — нехорошее состоянии опухоли.

При 2 (++) обычно назначают повторное исследование.

При 3 (+++) рассматривают как положительную опухоль, которую обычно подвергают медикаментозному лечению.

ER uPR данный вид гормонов способствует стимуляции роста патологических тканий. Если данные показатели увеличены, то это говорит о правильном лечении, что опухоль реагирует на гормонотерапию. Следовательно, если данные показатели понижены, то можно говорить о неправильном подборе лекарств. Опухоль развивается дальше.

Ki — 67, по данному показателю оценивают стадию опухоли и её характеристики. Если результат дает повешенные цифры, то это говорит о быстром течении заболевания, наличии метастаз и, к сожалению, совсем не хороший прогноз. Данный результат отмечается в процентах. Так например:

11% — вполне хороший прогноз (выздоровление 93%);
21 % — говорят о нем как 50% на 50%, все зависит от организма человека;
все показатели за 30% — оценивают как тяжелая стадия — высокоагрессивная;
90% — неизлечимо, приводит к смерти.

Так же данный индекс способствует к определению выбора лечения.

Ген p53 — способствует предотвращению роста патологической ткани. Данный ген является барьером для заболевания. Для начала заболевания служит мутация гена, например, наследственность или нарушение белковой матрицы.

VEGF — обозначается белок, которой несет функцию контроля жизнедеятельности ткани при условии недостаточного кровообращения. Высокие показатели данного белка говорит о росте опухолевой ткани, в следствии «хорошего» питания ткани.

В основном выделяют 4 типа рака:

Люминальный А — при этом: к женским гормонам рецепторы положительны, к HER2- отрицательные, показатель ki- 65-13% меньше.
Люминальный В — при этом: к женским гормонам рецепторы положительны, к HER2- отрицательные, показатель ki- 65-15% меньше.
Erb — B2 — при этом: реакция рецепторов к прогестерону (эстрогену) отрицательная, к HER2- положительная.
Базальноподобный — отрицательный показатель по всем категориям.

Принято считать, что отвечают за саму опухоль — PD-1, PDL-1 и PDL-2. Но они могут присутствовать не во всех патологических тканях. Для точного определения и назначения правильной терапии всем пациенткам, которым непосредственно показана иммунотерапия проводится такое исследование, как экспрессия белков PD-1, PDL-1 и PDL-2.

Данное исследование проводят с помощью флуоресцентной гибридизации FISH. В результате наличия экспрессии иммунотерапия назначается такими препаратами, как: Ниволумаб, Атезолизумаб, Пембролизумаб.

Иммуногистохимическое исследование очень сложный анализ, в котором используются множественное количество онкомаркеров.

Стоимость исследования зависит от количества проверяемых факторов. Цена исследования начинается от 4 тысяч рублей и до 20 тысяч рублей.

источник

иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы нередко применяется в онкологии. Именно антитела, как специальные белки, быстро вступают в реакцию с антигенами, обладающими свойством флюооресценции при взаимодействии, т. е. издающими свечение, хорошо различимое под микроскопом при введении в патологическую ткань. Метод проводится в лабораторных условиях, по его результатам врачи делают вывод о том, присутствуют данные молекулы в тканях или нет. Исследованию подлежит кусочек опухолевидной ткани, взятой при проведении биопсии.

Иммуногистохимическое исследование с использованием реактивов и добавлением антител нередко применяется в онкологии при подозрении на развитие раковой злокачественной опухоли у пациентов

Гормональный фон у женщин переживает сильный сбой несколько раз в жизни. Уровень гормонов неустойчив в подростковом возрасте у девочек (начиная с 11 лет), в период беременности и с приходом климакса. Именно поэтому рак молочных желез – довольно распространенное заболевание, и опухоль может начать развитие практически в любом возрасте в случае переизбытка гормонов (прогестерон, эстроген), способных спровоцировать рост злокачественного новообразования и метастазирование.

ИГХ назначается при подозрении на рак молочных желез, патологические и злокачественные процессы в полости матки. Исследование помогает выявить в клетках ткани:

рецепторы прогестерона, эстрогена;
показатель Ki 67 как индекс, указывающий на степень активного роста опухолевых клеток;
первичные или одиночные очаги новообразования;
стадию и течение развития опухоли для дачи прогноза;
наличие микроорганизмов;
степень чувствительности рецепторов к гормонам;
наличие метастазов;
пролиферацию или скорость роста опухоли.

Иммуногистохимическое исследование незаменимо с целью назначения эффективного лечения, выявления степени чувствительности новообразования к тем или иным вводимым препаратам. Это современный информативный метод диагностики, в отличие от привычной гистологии, хотя иногда оба исследования совмещают для получения более точной картины опухолевидного тела.

Как правило, исследование назначается при подозрении на онкологию, патологические процессы в ткани в любом из органов пациента. ИГХ показан к проведению при подозрении на следующие патологии:

рак молочных желез или первичную опухоль груди у женщин;
бесплодие;
болезни матки со злокачественным течением;
развитие гиперплазии, эндометрита, иного недуга в репродуктивной системе.

гормональный фон, именно уровень прогестерона и эстрогена, от которого напрямую зависит скорость роста опухолевидного тела и стадия развития болезни;
ткань эндометрия при частых выкидышах, неудачных попытках ЭКО, подозрении на бесплодие.

Именно иммуногистохимическое исследование может выявить наличие клеток, препятствующих зачатию у женщин, реакцию рецепторов в маточной ткани при назначении гормонально-заместительной терапии. Это важно выявить для разработки лечебной тактики и необходимости определить, следует вводить или нет гормоны, поскольку при выработке их в норме новообразование не столь прогрессивно, растет медленно и быстро подлежит устранению. Возможные рецидивы сведены к нулю.

Иммуногистохимическое исследование незаменимо с целью назначения эффективного лечения

Показатель Ki 67 указывает на быстроту роста опухоли. Если его значение превышает отметку в 35%, значит, новообразование растет быстро и уже не обойтись без назначения курса химиотерапии во избежание появления метастазов. Анализ с показателем менее 10% дает прогнозы вполне оптимистичные, выживаемость пациенток – 95%, а вот при показателе более 85% летальность уже неизбежна.

Иммуногистохимическое исследование назначается почти всем женщинам, независимо от возраста, при подозрении на рак груди, т. к. метод практически не имеет противопоказаний. Трудности представляет лишь болезненный забор образца патологичной ткани, и многие пациентки тяжело переносят проведение биопсии. Хотя стоит потерпеть, ведь чем быстрее будет начато лечение, тем больше шансов на полное выздоровление.

В зависимости от вида опухоль может быстро прогрессировать. Если не выявить ее на начальном этапе формирования, то с появившимися метастазами бороться будет гораздо труднее.

Материал берется из опухолевидной ткани путем прокола или с помощью раны, оставшейся после проведенной операции. Исследование – поэтапное:

Забор (иссечение) образца ткани преимущественно из груди у женщин с постановкой отметины черным маркером в предполагаемом месте локализации образования.
Отправка ткани в лабораторию с помещением в емкость с формалином. Возможно окрашивание сывороткой с содержанием антител, ферментов, металлопротеина, флуоресцентного красителя с добавлением в разных дозах. Данные вещества послужат метками, чтобы было лучше визуально наблюдать за происходящей реакцией при соединении антител с антигеном. Если, например, реакции не произойдет при использовании в качестве метки металла или радиоизотопа, значит, и опухоли как таковой в организме нет.
Обезжиривание состава, заливка парафином, чтобы получить блоки для последующего изучения материала на гистологию.
Помещение на стекла срезов в 1 мм толщиной, сделанных из блоков.
Окрашивание состава антителами.
Изучение (интерпретация) анализов.

Обычно заключение врачи дают по истечении 7 дней. Будет выявлено сходство (родство) ткани к тем или иным антителам, описана морфология образца, количество присутствующих здоровых и замещенных патологичных клеток.

Выявить опухоль в молочной железе можно с помощью широко используемых иммуногистологических маркеров:

HER2, реагирующий на рецепторы в виде антенн, лежащих на поверхности клеток, способных уловить сигналы, подаваемые организмом. Клетки вполне нормально делятся, если количество рецепторов не отклонено от нормы. Но иногда ген при остром течении опухоли дает сбой и начинает выработку множества рецепторов одновременно. При этом клетки усиленно делятся, получая подобный опасный сигнал. Это говорит о начальной стадии развития рака и стремительном течении, хотя прогнозы хорошие. Опухоль неплохо поддается специфическим лекарствам.
HER2 neu, способный выявить кодирующий рецептор или протоонкоген, при повышенном содержании которого рак прогрессирует и, скорее всего, в регионарных лимфоузлах присутствуют метастазы. Для назначения адекватного лечения крайне важно установить характер (отрицательный, положительный) HER2. При значении “+” будут назначены лекарства Герцептин, Лапатиниб. При отрицательном показателе данные препараты противопоказаны.
Ki 67, как маркер пролиферации, способный выявить степень и скорость деления патологичных клеток. Опухоль не агрессивна при показателе маркера меньше 15%. Лечение сводится к проведению гормонотерапии. Реакция рецептора к прогестерону и эстрогену вполне позитивная, равно как и прогнозы после лечебного курса. Опухоль быстро растет, если показатель превышает 30%. Требуется проведение химиотерапии.

При раке молочной железы реакция и степень окрашивания забранной ткани будут напрямую зависеть от подтипа:

люминального А, при котором HER2 будет отрицательный, а – Ki 67 не более 13%;
люминального В, при котором HER2 – отрицательный, а Ki 67 – свыше 15%;
Erb-B2 как сильно прогрессирующего, при котором HER2 – положительный, но рецепторы к прогестерону и эстрогену отсутствуют;
базальновидного, при котором наблюдаются отрицательные значения на любой фактор.

Только патологоанатом или онколог со специальной подготовкой к проведению данного обследования сможет дать правильное заключение после использования метода и расшифровки результатов. Последняя проводится с учетом показателей вводимых антител, их тропности к исследуемому материалу. Выявляются те или иные антигены, указывающие на количество атипичных клеток, структуру и морфологию патологичной ткани, вид развивающейся опухоли.

Показатели в результатах напрямую зависят от развития того или иного заболевания. Более всего иммуногистохимическое обследование как анализ информативно при онкологии груди.

В учет берутся следующие показатели, которые показывает расшифровка:

Протеины, оцениваемые по шкале от 0 до +3. При отметке 0 реакции не произойдет. При отметке +1 исследование на подтверждение онкологического статуса HER2 придется пациентам пройти вновь. При отметке +2 нет четкости в характере HER2 и возможно назначение дополнительного метода FISH. При отметке +3 HER2 – положительный результат, при котором активно вырабатывается специальный рецептор. Течение рака – быстрое и агрессивное. Вероятно назначение лекарств – Герцептина, Тайверба.
Маркер Ki 67 укажет на злокачественность новообразования, хотя при отметке менее 15% прогноз хороший. Излечиться можно полностью.

При расшифровке исследуется экспрессия ПР и ЭР, как рецепторов к эстрогену и прогестерону. У большинства опухолей статус ЭР(+) и всего в 5% случаев статус ЭР(-) ПР+. Опухоли с высокой концентрацией гормонов ПР и ЭР обычно неагрессивны и малоактивны, успешно лечатся гормональными препаратами. При их экспрессии к эстрогенам прогноз благоприятен в половине случаев.

При экспрессии же рецепторов опухоли как к эстрогену, так и прогестерону на благоприятный исход лечения можно рассчитывать в 80% случаев. Благодаря результатам экспрессии врачам удается понять, какое лечение станет более эффективным – гормональное или же агрессивное, химическое.

Самой сложной формой при раке молочной железы является карцинома, когда процентное содержание белка в ткани чрезмерно повышенное, а клетки становятся неуправляемыми, начинают бесконтрольное деление. При появлении неприятных симптомов в груди женщинам не рекомендуется откладывать визит к врачу и прохождение анализа. Своевременное выявление и устранение онкогенных клеток дает благоприятные прогнозы.

Иммуногистохимия позволяет выявить множество разных патологий, в частности развитие опухоли, очаг и место ее локализации. Благодаря данному методу врачами устанавливается стадия рака, скорость развития новообразования. Это важно на начальных 1-2 этапах рака при появлении одиночной опухоли, причем при расположении ее в любом органе, а не только в молочных железах.

источник

Иногда результатов гистологии бывает недостаточно. Если не удается получить окончательный ответ и поставить диагноз или необходимо уточнение молекулярных параметров опухолевого образования назначается иммуногистохимическое исследование.

Метод иммуногистохимии используют как дополнительный. Он помогает выявить в биологическом материале специфичные белки, которые характерны для определенного вида клеток и, как следствие, отличить одну разновидность опухолевого образования от другой. Также исследование помогает выявить:

Маркеры иммуногистохимии, которые отвечают за чувствительность опухоли к воздействию лекарственных средств, лучевой терапии.
Метастатический характер происхождения образования и определить первичный источник поражения.
Гормоны и рецепторы к ним.
Малигнизацию клеток.

ИГХ как метод диагностики широко применяется в онкологии. Этот вид изучения тканей предполагает применение определенных реактивов. Они содержат в себе антитела или белковые соединения, которые помечены определенными веществами.

ВАЖНО! Антитела (иммуноглобулины, специфические белки) вырабатываются различными клетками организма и обеспечивают иммунитет, при внедрении антигена. Часто вырабатываются при попадании вирусов, бактерий, при онкологии, вакцинации, пересадке тканей, а иногда и против собственных клеток, что приводит к аутоиммунным патологиям. Получают их от различных животных.

При контакте с антигенами, которые могут содержаться в исследуемом биоптате, происходит специфическая реакция (антигенами являются межклеточные вещества ткани, компоненты клеточных структур). В результате нее можно судить о наличии или отсутствии того или иного вещества в тканях.

ВАЖНО! Антигены — генетически чужеродное тело, которое при попадании в организм вызывает иммунную реакцию, а именно выработку антител для подавления этого чужеродного агента. В случае с ИГХ-анализом антигенами выступают молекулы, которые вырабатываются патологически измененными опухолевыми клетками.

Структурная специфичность исследования — принципиально отличает ИГХ от других способов иммунологической диагностики, которые используют реакцию антиген-антитело. Т. е. специалисты оценивают помимо присутствия тех или иных веществ в тканях (при наличии или отсутствии окрашивания) и их количественный состав (по интенсивности окрашивания), еще пространственное распределение различных структурных элементов (цитоплазма, ядро, мембрана клетки и пр.) в тонком окрашенном срезе.

Реакцию можно получить несколькими способами. Часто применяется прямой, при котором используется один вид маркированных антител. Последние должны связаться с выявляемым веществом или молекулой-мишенью. Если последняя присутствует в биоптате, то исследуемая ткань окрашивается.

Непрямой метод считается более информативным и чувствительным. Его суть заключается в поэтапном введении 2 разных антител. Немаркированные первичные антитела вступают в реакцию с опухолевым антигеном в биоптате, образуют комплекс антитело-антиген. Затем вводят вторичные уже маркированные антитела (реагент), которые связываются с определенной частью молекулы первичного антитела. Т. е. первичные антитела являются антигенами для вторичных.

ИГХ назначается в том случае, когда обычного гистологического исследования недостаточно. Например, когда опухоль молочной железы имеет неспецифичное микроскопическое строение, не позволяющее поставить точный окончательный диагноз.

Биопсия с иммуногистохимией являются важной частью верификации диагноза при раке молочной железы, предстательной железы, мягких тканей и пр. Особенно актуально исследование для выявления лимфом, поскольку зачастую диагностировать эту болезнь без ИГХ невозможно. Большую роль ИГХ исследование играет в определении гистологического типа недифференцированных опухолевых образований, а также метастазов, которые имеют невыясненный первичный очаг.

Иммуногистохимия рака молочной железы полезна в прогнозировании течения опухолевого процесса и возможности таргентной терапии. Она помогает оценить:

функциональное состояние клеток образования;
злокачественный потенциал и темп роста опухоли;
тенденцию к метастазированию.

Чтобы провести исследование, необходимы образцы самой опухоли и близлежащих тканей. Их можно получить при биопсии или после хирургического вмешательства. Материалу необходимо пройти несколько этапов подготовки перед исследованием: фиксация, промывание, обезвоживание, погружение в парафин или заливка другим веществом.

Исследуемый биологический объект должен получиться плотным, но не хрупким. Сначала материал промывают, обезвоживают и уплотняют в спиртах возрастающей крепости. Затем его просветляют путем погружения в смесь абсолютного спирта и О-ксилола в пропорции 1:1. После этого помещают в несколько порций чистого О-ксилола. И только потом биологический объект пропитывают в парафине. Последний этап помогает законсервировать ткань и на долгое время сохранить ее структурные особенности в парафиновом блоке.

Затем лаборант производит с этих блоков срезы, при помощи специального прибора — микротома, толщиной до 1 мкм. Полученные срезы наклеивают на предметное стекло, которое смазано глицерином и смесью белка. Подсушивают.

Чтобы исследуемый материал вступил в реакцию с антителом, необходимо его обезжирить и удалить парафин. Процедура называется депарафинизация. Для ее проведения используют 3 порции О-ксилола, а также спирты нисходящей крепости.

Последний этап — окрашивание. Оно проводится для того, чтобы четко видеть структуру тканей под микроскопом. Лаборанты могут использовать огромное количество красителей. Условно их можно классифицировать по:

происхождению, например, животные — кармин, растительные — гематоксилин, синтетические — эозин;
химическим свойствам, например, нейтральные, основные, кислые.

Чаще всего для этой процедур используют эозин, гематоксилин. Биологический материал помещают в раствор гематоксилина на несколько минут, затем промывают и дифференцируют результаты окрашивания. После этого провидится окрашивание в эозине, промывание и обезвоживание в спиртах восходящей крепости. Последовательная многоэтапная окраска позволяет на каждом этапе все больше определить нозологию и фенотип опухолевого образования. Патоморфолог изучает материл под микроскопом после каждого окрашивания. И только после оценки изменений и интерпретации полученной информации, назначает панель антител.

Чтобы получить точные данные о патологическом процессе и верифицировать заболевание лаборант приступает к обработке подготовленного образца специальными реактивами, содержащими меченые антитела. В результате происходит реакция между антителом и антигеном. Это сопровождается характерной визуализацией, которая зависит от веществ, используемых для маркировки.

Иммуногистохимия молочной железы — это сложный многоступенчатый анализ, на результат которого влияет множество факторов, например, низкое качество реагентов, недостаточная фиксация исследуемого биологического объекта или неправильно подобранная панель антител. Количество искомых клеток-мишеней исчисляется сотнями, поэтому специалист должен понимать, что он ищет и использовать для этого необходимые антитела.

Гистологи оценивают интенсивность окрашивания опухолевых клеток после взаимодействия с реактивами по специальной шкале:

0-1+ — онкологии нет;
2+ — онкологическое образование отрицательное;
3+ — онкологическое образование положительное.

Длительность ИГХ при раке молочной железы во многом зависит от способа его проведения. Бывает ручной и автоматический. Последний считается более совершенным, поскольку вероятность технической ошибки сведена к минимуму, да и проводится он гораздо быстрее.

Перед определением тактики лечения онколог задается различными вопросами: какова вероятность рецидива заболевания у больного или его смерти, какой результат лечения можно ожидать. Для этого специалист изучает особенности и характеристики опухоли и в зависимости от различных предсказывающих и прогностических факторов назначает тактику лечения.

К этим факторам относятся основополагающие признаки, которые определяют особенность протекания болезни и ее исход. При операбельных формах онкологии груди к таким факторам относятся: морфологическое строение новообразования и его размер, состояние лимфоузлов. Т. е. подобные характеристики определяют хронологию болезни.

Особенности прогностических факторов:

Базируются на биологических характеристиках опухолевого образования.
Взаимосвязаны с продолжительностью жизни пациента в независимости от тактики терапии.
Делят пациентов по степени риска смерти, рецидива.
Примеры: индекс митотической активности, протеолитические ферменты, антиогенез и др.

Индекс митотической активности (MAI) является независимым прогностическим фактором, который характеризует продолжительность жизни больных. У пациентов с индексом меньше 10 в процессе наблюдения летальный исход составлял 6 %, у пациентов с индексом больше 10 — 28 %.

Протеолитические ферменты имеют значение в процессе метастазирования. В трансформированных злокачественных клетках таких ферментов вырабатывается больше, чем в здоровых, поэтому при злокачественных образованиях наблюдается выход этих веществ в межклеточное пространство и увеличение активности. Т. е. ферменты вовлечены в процесс онкогенеза. Т. о. пациенты с низким уровнем этих ферментов имеют более благоприятный прогноз по безрецидивной выживаемости.

Способность новообразования расти и метастазировать во многом зависит от ангиогенеза — образования новых кровеносных сосудов. В процессе наблюдения пациентов в течение 10 лет, было выявлено, что у женщин с высоким значением плотности микрососудов в опухоли прогноз хуже.

Эти факторы предсказывают эффективность лечения. Они помогают выделить группу пациентов с более-менее значимым ответом на проводимую терапию. К примеру, опреелить эффективность гормональных препаратов, уровень рецепторов стероидных гормонов.

К клиническим факторам, которые помогают интерпретировать ответ на терапию при метастатической форме рака относятся:

Локализация и количественный показатель метастазов. Например, при поражении кости — прогноз относительно благоприятный; поражение кости, 2 органов, легких — менее благоприятный; при поражении больше 2 органов, наличии метастаз в печени, мозгу и пр. — неблагоприятный.
Временной интервал между лечением первичного новообразования и появления метастазов. Чем он продолжительнее, тем благоприятнее прогноз.
Общее состояние здоровья пациента.
Возрастная категория. Женщины в постменопаузе имеют больше шансов на благоприятный ответ на терапию.
Рецепторы стероидных гормонов в опухоли (гормононезависимые новообразования не реагируют на гормональное лечение).

Метастатический рак молочных желез считается хронической патологией. После полного регресса, полученного в результате химиотерапии, продолжительность жизни 5-10 лет встречается достаточно редко, примерно в 5-20 % случаев. Поэтому для лечения считается оптимальным вариантом — последовательное применение лечебных воздействий с как можно меньшей токсичностью, чтобы получить максимальный паллиативный эффект и отсрочить прогрессирование патологии, смерти.

Достоверность результатов ИГХ молочной железы достигает 99 %. Методика чувствительна и высокоспецифичная. Она помогает верифицировать патологический процесс и установить стадию заболевания. Для ее проведения необходимо минимум биоптата и реактивов, при этом она будет информативна даже спустя длительное время после взятия биопсии.

источник

прямой (прямая реакция антител непосредственно на патологическое вещество);
непрямой метод (патологические вещества, распознаются с помощью вторичных антител).

ферменты — белковые молекулы, они же молекулы РНК. Так например: щелочная фосфатаза (фермент гидролаза);
флуоресцентные — тот же физический процесс, например — флуоресцеин — органическое соединение;
электроно-плотные частицы, к таким относится золото.

изучения и исследования секреторных процессов, в том числе синтетических;
распознавания гормонов рецепторов;
выявления различных типов, родов клеток по их свойствам.

Точное образование (доброкачественное или злокачественное) и назначение правильного лечения.
Точное месторасположение (наличие метастаз в организме и их дислокацию).
Первоначальный очаг заболевания.
Стадию заболевания (например, степень рака).
Пролиферацию клеток (распознать скорость размножения и развития раковых клеток).
Ответ раковых клеток на медикаменты, их чувствительность, также можно отследить чувствительность к химиотерапии, к лучевой терапии.

Иммуногистохимия при раке молочной железына более раннем сроке диагностировать заболевание;
выяснить непосредственный очаг заболевания;
найти границы заболевания;
определить точное место образования;
определить точный вид новообразования;
определить точную стадию развития;
определить рост патологических клеток;
узнать реакцию на препараты (в частности, на гормоны, на лучевую терапию и так далее);
определить необходимость операции;
помогает точно оценить качество лечения.

при метастазах;
при бесплодии;
после неудачных попыток ЭКО;
при различных заболеваниях матки;
при различных видах патологий органов малого таза;
при постоянных невынашивания плода;
при заболевания эндометрия.

две-три неуспешных процедур ЭКО;
не первое (постоянное) невынашивание плода на ранних сроках;
бесплодие.

Во время исследования могут выявить такие заболевания как:

эндометрит,
гиперплазия,
неполную трансформацию эндометрия,
нарушение фаз развития
и другие заболевания.

Как показывает практика, именно заболевания, связанные с эндометрием на 73% являются причиной бесплодия.

Для этого пациентке рекомендуют:

не принимать гормоны за неделю до анализа;
не принимать кровоостанавливающих препаратов;
правильная интимная гигиена.

Потом женщина находится под наблюдением врача до полного восстановление, примерно 1-2 часа.

Результаты примерно готовятся 3-5 дней. Оценить результаты может только специалист.

При 2 (++) обычно назначают повторное исследование.

При 3 (+++) рассматривают как положительную опухоль, которую обычно подвергают медикаментозному лечению.

11% — вполне хороший прогноз (выздоровление 93%);
21 % — говорят о нем как 50% на 50%, все зависит от организма человека;
все показатели за 30% — оценивают как тяжелая стадия — высокоагрессивная;
90% — неизлечимо, приводит к смерти.

Так же данный индекс способствует к определению выбора лечения.

В основном выделяют 4 типа рака:

Люминальный А — при этом: к женским гормонам рецепторы положительны, к HER2- отрицательные, показатель ki- 65-13% меньше.
Люминальный В — при этом: к женским гормонам рецепторы положительны, к HER2- отрицательные, показатель ki- 65-15% меньше.
Erb — B2 — при этом: реакция рецепторов к прогестерону (эстрогену) отрицательная, к HER2- положительная.
Базальноподобный — отрицательный показатель по всем категориям.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы представляет собой метод морфологического диагностирования, позволяет установить восприимчивость опухолевых клеток к специфическим веществам и служит стопроцентным методом определения злокачественности либо доброкачественности новообразования.

Предметом проверки является строение пораженных опухолью тканей. При помощи микроскопа на предметном стекле изучают биоматериал, который предварительно обрабатывают специфическими белками.

Клетки новообразований для организма являются чужими элементами — антигенами (от англ. antibody-generator — создатель антител).

Он реагирует на них, вырабатывая протеиновые частички (иммунный ответ), способные вступать в связь и обезвреживать инородных агентов.

При иммуногистохимии применяется сыворотка, включающая белковые антитела, реагирующие с чужими элементами.

Это взаимодействие указывает на наличие или отсутствие новообразования, его малигнизацию, а также восприимчивость к половым гормонам.

Помимо того, этот метод позволяет подбирать наиболее эффективную тактику ведения больного, наглядно оценивать ее результативность и давать прогноз в каждом конкретном случае.

На бытовом уровне наглядно представить суть ИГХ можно, проведя клеевым прозрачным карандашом по листу. При осмотре он почти неприметен, но если присыпать его, к примеру, речным мелким песочком, то благодаря прилипшим частичкам след проступит явственно.

Исследование ИГХ назначается, если имеется опасение развития злокачественного образования молочной железы, и преследует цели:

обнаружить болезнетворный процесс возможно раньше;
выяснить местоположение больных клеток и определить, захвачены ли ими соседние ткани — очертить границы;
найти источник метастазов, изначальный очаг болезни;
уточнить вид опухоли и стадию ее развития;
установить биологический резерв больных клеток: темпы разрастания, быстроту метастазирования; реакцию на гормоны, противоопухолевые препараты, лучевую терапию;
определить надобность в хирургическом вмешательстве;
оценить эффективность проводимого лечения.

Главными достоинствами данного метода является возможность обнаружения больных клеток и опухолевых факторов, чего нельзя достичь при гистохимическом анализе, и вероятность подбора максимально результативного варианта безоперационного лечения новообразований.

Противопоказаний данный метод не имеет и не проводится только в случае невозможности забора исследуемого материала (больной ткани).

При обследовании пациенток с проблемами репродуктивной сферы, помимо случаев злокачественных новообразований молочной железы, ИГХ будет информативен при онкологических заболеваниях матки и бесплодии.

Иммуногистохимическое исследование проводится в медицинских лабораториях автоматизированно либо мануальным способом, специально обученным врачом-патологоанатомом, обладателем сертификата на право его проведения.

Забор биологического материала для изучения — пораженной болезнью ткани — производится методом биопсии (прокола иглой) или во время операции на молочной железе.
На следующем этапе образец обрабатывают и консервируют, заливая парафином, чтобы избежать повторных заборов ткани. В виде парафинового блока биоматериал может храниться в течение нескольких лет.
Далее проводится микротомирование — нарезание на тончайшие пласты, не толще 1 микрона — специальным аппаратом.
Эти срезы впоследствии окрашиваются сывороткой с помеченными особым образом антителами и отправляются для изучения под микроскоп либо в автоматический прибор, в зависимости от выбора красителя-маркера.

По интенсивности окрашивания либо при фиксации измерителем реакции судят о результате. При работе вручную на точность выводов может влиять человеческий фактор — субъективное цветовосприятие врача-лаборанта.

Полный цикл иммуногистохимического исследования укладывается в двухнедельный срок.

Главными объектами изучения являются HER2/HER2neu, ER и PR, ki-67, p53, VEGF, Bcl-2.

HER2neu в переводе с английского означает «человеческий рецептор эпидермального фактора роста», он ответствен за продукцию белка HER2. Соединяясь с нервными окончаниями пораженных раком клеток HER2, вынуждает их усиленно делиться, бесконтрольно разрастаясь.

Показатель количества 1 (+) свидетельствует о HER2-негативном состоянии опухоли, избытка белка нет, встречается в двух третях случаев.

Индекс 2 (++) — пограничное значение, рекомендуется проведение повторного исследования.

Знак 3 (+++) характеризует новообразование как HER2-позитивное. У четверти пациенток с раком молочной железы отмечено избыточное вырабатывание этого белка. Течение имеет более динамичное, но дает положительный отклик на лечение специфическими онкопрепаратами.

ER и PR — рецепторы, чувствительные к эстрогену (ER) и прогестерону (PR), также расположены на клеточных оболочках и при образовании комплексов с этими гормонами способны стимулировать рост больной ткани.

Высокие показатели ER и PR в опухолевых клетках достоверно указывают на возможность адекватного отклика на гормонотерапию. При низких их значениях проведение подобного лечения не целесообразно.

Ki-67 характеризует стадию развития и степень динамичности новообразования; высокий ее показатель свидетельствует об агрессивности опухоли, скорости метастазирования и неутешительном прогнозе.

Выражается в процентном отношении. Показатель до 10 % обещает весьма благоприятный исход (выживаемость 95 %), пограничным считается индекс 20 %, значения более 30 % характеризуют опухоль как высокоагрессивную. 90-процентная отметка свидетельствует о критичном состоянии (смерть во всех случаях).

Помимо того, индекс Ki-67 во многом определяет тактику лечения.

Например, динамичные опухоли лучше поддаются химиотерапии, а коэффициент менее 15 % предполагает использование гормонов (при положительных ER и PR).

Ген p53 является своеобразным охранником, предотвращающим рост больных клеток. Мутация этой единицы наследственности или повреждение ее белковой матрицы выступает главным фактором возникновения ракового новообразования.

VEGF — белок, отвечающий за жизнеобеспечение тканей в условиях недостаточности кровообращения. Избыток его способствует улучшению питания опухоли и благоприятствует ее росту.

Различают четыре молекулярных подтипа рака молочной железы:

А-люминальный — ER и PR положительные, HER2 отрицательный, Ki-67 менее 15 %, прогноз наиболее благоприятен.
В-люминальный — ER и PR положительные, HER2 отрицательный, Ki-67 15 % и более.
Сверхэкспрессирующий — ЕR и PR отрицательные, HER2 положительный.
Базальноподобный — трижды негативный — все факторы отрицательные, прогноз наименее благоприятен.

Иммуногистохимическое исследование — сложный и многоэтапный метод, использующий множество онкомаркеров.

Разумеется, расшифровкой и интерпретацией результатов должен заниматься врач, прошедший специальное обучение ИГХ.

Как правило, при выявлении злокачественного образования молочной железы участие в диагностировании и разработке тактики лечения принимает консилиум докторов.

ER и PR – протеиновые рецепторы на поверхности опухолевых клеток.

В организме человека постоянно вырабатываются гормоны – эстроген и прогестерон. Эти гормоны воздействуют на ER и PR рецепторы, что приводит к стимуляции роста опухолевых клеток.

Определение Эстрогеновых и Прогетестероновых рецепторов является одним из важнейших моментов, определяющих чувствительность опухоли к терапии гормональными препаратами.

Чаще всего наличие рецепторов ER/PR определяют при раке молочной железы . Их наличие дает возможность, помимо стандартных методов лечения, применить гормональную терапию.

При гормон позитивном раке молочной железы, назначаются препараты: Тамосксифен, Экземестан (Аромазин), Летрозол (Фемара), Анастразол (Аримидекс), Гексэстрол (Синестрол) и другие.

Также, считается, что гормонально-зависимый рак молочной железы отличается спокойным течением и редким метастазированием.

Чувствительность опухолевых клеток к гормональной терапии выражается в баллах от 0 до 10. Опухоль считается гормонозависимой, начиная с 2-х баллов. и требует добавления к лечению гормональной терапии.

Her2Neu – это рецептор эпидермального фактора роста раковой клетки. Это – ген, который воздействует на мембранные рецепторы клетки, и стимулирует её к усиленному делению.

В некоторых опухолях (чаще всего рак молочной железы, рак пищевода, рак желудка) присутствует гиперэкспрессия (повышенная активность) Her2Neu, что вызывает быстрое деление опухолевой клетки и её повышенную активность.

Также снижается эффективность химиотерапии, лучевой терапии, гормональной терапии. Из-за этого опухоли с Her2neu позитивным статусом отличаются агрессивным течением.

Существует две методики определения наличия у опухоли гена Her2neu:

1. Иммуногистохимическое исследование

Результаты иммуногистохимического исследования выражаются в баллах:

0-1 означает, что опухоль без гиперэкспрессии Her2neu.
3 означает, что опухоль с гиперэкспрессией Her2neu.

2. Метод FISH (Флуоресцентная гибридизация in situ)

В отличие от иммуногистохимического исследования, при котором определяются белки, при методе FISH определяется наличие генов, кодирующих протеины Her2neu. В зависимости от их наличия, определяется гиперэкспрессия Her2neu.

Определение гиперэкспрессии рецептора Her2neu в опухоли молочной железы является очень важным для дальнейшего назначения лечения.

В современной онкологии гиперэкспрессию Her2neu определяют, чтобы понять, необходимо ли добавление к лечению ингибиторов Her2neu.

Эти препараты прицельно блокируют рецепторы Her2neu, тем самым останавливая активный рост опухолевых клеток и повышая их чувствительность к химиопрепаратам.

Добавление таргетной терапии к стандартной химиотерапии при лечении Her2neu позитивных опухолей, серьезно увеличивает общую выживаемость и результат противоопухолевого лечения.

Ki-67 – это маркер пролиферативной активности опухолевой клетки. Данный параметр оценивается в процентах и показывает, сколько процентов опухолевых клеток активно делятся.

Если Ki-67 меньше 15%, опухоль считается слабоагрессивной, при показателе Ki-67 от 30 до 50% опухоль считается агрессивной, а при показателе Ki-67 выше 50% опухоль является высокоагрессивной.

Также Ki-67 является фактором прогноза течения опухолевого заболевания и ответа опухоли на химиотерапевтическое лечение. Определяется это простым способом: чем ниже показатель Ki-67, тем хуже опухоль реагирует на химиотерапевтическое лечение.

И наоборот – чем выше показатель Ki-67, тем лучше опухоль будет отвечать на химиотерапию.

Белок p53 – это транскрипционный фактор, регулирующий клеточный цикл. В быстро делящихся клетках обнаружено увеличение концентрации белка р53 по сравнению с клетками, делящимися медленно, что обусловлено высоким риском их онкогенности.

Белок p53 предотвращает образование злокачественных опухолей в нашем организме. В норме, антионкоген р53 находится в неактивном состоянии, а при появлении повреждений ДНК в здоровой клетке – активируется.

Функция белка р53 состоит в удалении тех клеток, которые являются потенциально онкогенными. Это называется – индуцированный апоптоз, уничтожение потенциально опасной клетки.

При иммуногистохимическом исследовании, повышенное содержание белка p53 обнаруживается в 50% злокачественных клеток, что позволяет им беспрепятственно делиться и избегать апоптоза (уничтожения).

Количество белка p53, определяют в дополнение к показателю Кi67, для того, чтобы понять насколько агрессивна опухоль и определить дальнейшее течение болезни.

Если уровень белка p53 высокий, значит опухоль не агрессивная и не склонна к метастазированию и быстрому росту.

Если же, показатель белка p53 низкий, то значит опухоль агрессивна и склонна к быстрому росту в окружающие ткани и метастазированию .

Иммуногистохимическое исследование: как проводится анализ при раке молочной железы, расшифровка результатов, показания и противопоказания

Иммуногистохимический анализ молочной железы относится к современным видам диагностики, позволяющим получить обширную информацию о раковой опухоли.

Рассмотрим особенности гистохимии, как преимуществами обладает, при каких патологической ситуации назначается, как проводится, и о чем говорят результаты исследования.

Иммуногистохимия – высокоточное микроскопическое тестирование взятого биоматериала, помогающее специалистам обнаружить и провести идентификацию особых веществ, характерных для раковых клеток.

На сегодняшний день гистохимия используется с целью:

Уточнения предполагаемого диагноза.
Установления вида или подвида опухоли.
Определения стадии злокачественного процесса.
Выявления степени распространенности единичного ракового новообразования.
Установления патологического очага, провоцирующего метастазы, если исследуемый образец получен из вторичного злокачественного источника.
Определения особенности ответной реакции на лечение.
Подтверждения результатов предыдущих анализов.
Исключения вероятного присутствия других злокачественных процессов.
Уточнения скорости роста опухоли.

Основная суть иммуногистохимической диагностики состоит в следующем:

Изучение клеток биоптата злокачественного новообразования с применением реактивов, содержащих особые белки (или антитела), помеченные специальными веществами, поддающимися детектированию.
Иммуноглобулины обладают пространственным строением, которое разрешает им соединяться с отыскиваемым веществом (антигеном) в онкологических клетках. Подобный химический процесс называется «антиген-антитело», позволяющий подтвердить присутствие в исследуемом материале веществ, характерных для рака.

При проведении ИХГ может быть осуществлено выявление отдельных рецепторов к определенным гормонам, как прогестерон, эстроген, а также ферментов интенсивного роста злокачественных клеток, онкологические маркеры и прочие антигены.

Гистохимическая методика исследования полученного образца тканей груди может проводиться двумя способами:

Способ	Особенности
Прямой	Строится на специфической реакции, проявляемой в момент соединения маркированных тел непосредственно с обнаруженным антигеном.
Непрямой	Является более популярным, чем прямой вариант. Отличается высокой чувствительностью, при этом его основной особенностью является то, что немаркированные первичные антитела сначала соединяются с выявляемым веществом, и лишь потом осуществляется установление их присутствие вторичными мечеными антителами. К тому же начальные вещества выступают антигенами для вторичных антител.

Стоит подчеркнуть, назначаемые медикаментозные средства для лечения онкологии должны получить подтверждение ИХГ.

Сколько стоит выполнение ИХГ молочной железы? В большинстве регионов РФ при наличии направления специалиста данный тест можно сделать бесплатно. Однако в случае обращения пациентки в коммерческие лаборатории, представляющие платные услуги, цена анализа зависит от применяемого количества антител.

В основном при проведении исследования используется от двух до пяти антител, но могут выявляться около десятка антигенов. Исходя из этого, и определяется стоимость процедуры:

От 2 до 5 антител – 4000-5000 рублей.
До 10 антител – от 15000 рублей.

Иммуногистохимическое исследование молочной железы обладает существенными преимуществами перед другими лабораторными видами диагностики:

Не требует большого количества биоматериала и химреагентов для своего выполнения.
Результат теста готов за очень короткое время, в срочных ситуациях — через 3 часа.
Исследуемый образец хранится в парафине достаточно длительное время, что позволяет произвести его повторное тестирование.
Возможность установить тип раковых клеток и стадию болезни.
Помогает обнаружить первичный очаг злокачественной опухоли.
Результаты исследования отличаются максимальной достоверностью – 99%.

Кроме этого данная методика лабораторной диагностики способна устанавливать присутствие некоторых факторов, которые не может показывать гистологический анализ:

Рецепторы к половым гормонам женского организма.
Степень чувствительности к препаратам противоопухолевого действия.
Сосудистый фактор развития злокачественной опухоли.
Активные маркеры онкологического новообразования.

Хотя ИХГ и отличается высокой информативностью по сравнению с гистологией, в отдельных клинических ситуациях анализ может оказаться малоинформативным либо показать неверный результат:

«Не умеет» отличать невус от меланомы вследствие одинакового окрашивания их клеток.
Если женщина придерживается безглютеновой диеты, то результат чаще всего является ложноотрицательным.
Дороговизна исследования.

Данный вид диагностической методики обладает способностью протестировать любые ткани организма человека. Если врач назначает пациентке прохождение иммуногистохимии при раке молочной железы, то решение объясняется следующими моментами:

Необходимо определить нозологическую и гистологическую природу патологического очага.
Требуется установить класс опухоли.
Нужно выявить место расположения первичного образования. Если локализация не выявлена, то его нахождение определяется по отдельному метастазу.
Необходимо определиться с прогнозом дальнейшего течения злокачественного процесса.
Возникает необходимость уточнить либо откорректировать дальнейшую терапию.
Надо подтвердить либо исключить присутствие болезнетворных микроорганизмов.

Помимо этого, иммуногистохимический метод диагностики позволяет:

Узнать степень восприимчивости раковых клеток к медикаментам таргетной группы либо химиотерапии.
Определить резистентность новообразования к отдельным группам химиопрепаратов (для раковых опухолей МЖ, имеющих рецепторы к эстрогену в схему лечения добавляются гормональные лекарства).
Посредством теста на фермент пролиферации узнать степень агрессивности злокачественной опухоли.

Необходимо отметить, данный лабораторный метод назначается не только при онкологии молочных желез — он может быть порекомендован и в тех ситуациях, когда в анамнезе присутствует:

Бесплодие.
Рак матки.
Целиакия.
Туберкулез.
Гастрит хронической формы.
Почечная недостаточность.
Болезни репродуктивных органов.
Системное заболевание соединительных тканей.

Иммуногистохимический анализ не имеет существенных противопоказаний к своему проведению. Невозможность его выполнения отмечается только в той ситуации, когда присутствуют непреодолимые сложности с взятием образца ткани из патологического очага.

К тому же относительным запретом к процедуре на этапе проведения биопсии является:

Некорректная свертываемость крови.
Аллергия на анестезирующие препараты.
Патологии крови.
Прием лекарств антикоагулянтов.

В какой период менструального цикла лучше сдавать гистохимический анализ для исследования патологического образования в молочной железе? По мнению специалистов, самым оптимальным временем для проведения процедуры является:

19-22 день месячного цикла при 28-дневном менструальном цикле.
23-26 день менструального цикла при 35-дневном месячном цикле.

В первую очередь осуществляется взятие частицы ткани опухоли, так называемая биопсия, имеющая несколько вариаций своего выполнения. Зачастую требуемый кусочек биоптата извлекается посредством очень тонкой иглы. В отдельных случаях нужный биоматериал берется в ходе хирургического вмешательства после выполнения надреза тканей груди.

Иммуногистохимия молочной железы выполняется поэтапно, в такой последовательности:

Добытый образец материала фиксируется, а для предотвращения его преждевременного высыхания перекладывается в раствор формалина.
Подготовленный биоматериал отправляется на исследование
На данном этапе процедуры исследуемый материал обезжиривается и заливается медицинским парафином.
Затем биоптат нарезается тонкими пластинками толщиной не более 1 мкм, а затем перекладывается на медицинские стекла для исследования.
Подготовленный образец поддается окрашиванию реактивами обусловленной концентрации.
Степень окраски химических реактивов со злокачественными клетками зависит от присутствия определенных рецепторов. Чем ярче получается цвет, тем большее количество рецепторов имеется в исследуемом материале.

Сколько ждать результат ИХГ? Сроки выполнения анализа зависят от количества используемых маркеров:

Применение до 5 ферментов – в течение 7 дней.
Использование более 5 маркеров – не больше 15 дней.
При необходимости срочного получения результата – через 3 часа.

Как расшифровывать данные иммуногистохомического теста? Интерпретация добытой в ходе анализа информации осуществляется врачом-онкологом. На бланке заключения в непременном порядке указываются:

Параметры Ki 67(фермент пролиферативной активности), которым определяется степень злокачественного процесса.
Уровень онкопротеина (обозначается как HER2NEY).
Показатели некоторых гормонов, от которых зависят особенности поведения опухоли, интенсивность развития и скорость проявления метастазов, где ER — рецептор эстрогенов, а PR — рецептор прогестерона.

Результат окрашивания сопоставляется со специальной шкалой:

Показатель шкалы	Расшифровка
0-1+	Норма, то есть, раковые клетки отсутствуют.
2+	Средняя концентрация HER2-белка в исследуемом образце и наличие отрицательного тела.
3+	Повышенное присутствие HER2-белка, онкология – положительная.

Исходя из полученной информации, определяется приемлемый вариант лечения:

Позитивный HER2 свидетельствует о присутствии опухоли способной к прогрессированию и быстрому увеличению в размере. В данной ситуации назначается прохождение медикаментозной терапии.
Отрицательный либо негативный характер HER2 требует применения более агрессивных препаратов – курс химиотерапии.

К тому же специалисты обращают внимание на следующее:

Завышенный показатель эстрогена и прогестерона в исследуемом материале указывает на активное прогрессирование новообразования и возможное присутствие метастазов.
Средний уровень гормонов свидетельствует об умеренном формировании раковой опухоли, поэтому присутствует шанс избавиться от нее при помощи медикаментозной терапии.

При анализе учитывается и степень показателя на онкогенность, который обозначается знаком Ki-67:

Меньше 10% — выживаемость составляет 95%.
15-17%– исход благоприятен.
До 35%– стремительное развитие опухоли.
Выше 85-95% – 100% летальный исход.

Необходимо подчеркнуть, заключение иммуногистохимии не является диагнозом, а выступает как информационный источник для лечащего врача.

Иммунногистохимическая методика диагностики грудных желез не провоцирует никаких отрицательных последствий для здоровья пациентки. Неприятными моментами является:

Возникновение боли на этапе проведения биопсии, однако практически всегда область груди для проведения манипуляции обезболивается анестезирующим средством.
Занесение инфекции при игнорировании правил антисептики, что может привести к воспалительному процессу.
Проявление мигрени, как реакция на анестетик. В данной ситуации головная боль носит временный характер и купируется обезболивающими средствами

Иммуногистохимия назначается в тех случаях, когда невозможно произвести дифференцирование патологического очага в груди при помощи гистологического исследования либо возникает необходимость уточнения некоторых молекулярных нюансов опухоли.

Суть методики заключается в установлении присутствия определенных белков, которые характерны для раковых клеток того или иного вида образования.

Иммуногистохимическое исследование в онкологии – это разновидность исследования ткани с помощью специальных реактивов по принципу антиген-антитело.

При иммуногистохимическом исследовании используются реактивы, которые содержат антитела, отмеченные специальными веществами.

Антитело – это белок, который связывается в тканях с определенными молекулами — антигенами, после чего возникает реакция. Если же таких молекул нет, то и реакции не будет.

По этому признаку можно судить, присутствует в ткани интересная нам молекула или нет. Это похоже на то, если нанести на белый стол бесцветный клей.

Невооруженным глазом на белом фоне он практически незаметен, но стоит насыпать на стол мелкого песка, как клей становится виден за счет прилипших песчинок.

По правилам иммуногистохимическое исследование при раке всегда проводится в специализированной лаборатории.

Для его проведения необходима опухолевая ткань, полученная в результате биопсии или операции.

Иммуногистохимическое исследование проводится для определения наличия в опухолевых клетках различных точек приложения, например, наличие рецепторов эстрогенов (ER) и прогестеронов (PR).

Также иммуногистохимия выполняется для определения показателя Ki-67 (индекс пролиферативной активности опухолевых клеток), гиперэкспрессии белка Her2neu, VEGF (сосудистый фактор роста), р53.

Иммуногистохимическое исследование при раке выполняется для того, чтобы понять, какими препаратами можно лечить злокачественную опухоль, и к каким видам препаратов она чувствительна.

Самый распространённый анализ, определяемый при иммуногистохимическом исследовании, это наличие рецепторной чувствительности к гормонам у опухоли.

ER и PR — протеиновые рецепторы на поверхности опухолевых клеток.

В организме человека постоянно вырабатываются гормоны — эстроген и прогестерон. Эти гормоны воздействуют на ER и PR рецепторы, что приводит к стимуляции роста опухолевых клеток.

Чаще всего наличие рецепторов ER/PR определяют при раке молочной железы. Их наличие дает возможность, помимо стандартных методов лечения, применить гормональную терапию.

При гормон позитивном раке молочной железы, назначаются препараты: Тамосксифен, Экземестан (Аромазин), Летрозол (Фемара), Анастразол (Аримидекс), Гексэстрол (Синестрол) и другие.Также, считается, что гормонально-зависимый рак молочной железы отличается спокойным течением и редким метастазированием.

Чувствительность опухолевых клеток к гормональной терапии выражается в баллах от до 10. Опухоль считается гормонозависимой, начиная с 2-х баллов. и требует добавления к лечению гормональной терапии.

Her2Neu — это рецептор эпидермального фактора роста раковой клетки. Это — ген, который воздействует на мембранные рецепторы клетки, и стимулирует её к усиленному делению.

В некоторых опухолях (чаще всего рак молочной железы, рак пищевода, рак желудка) присутствует гиперэкспрессия (повышенная активность) Her2Neu, что вызывает быстрое деление опухолевой клетки и её повышенную активность.

Также снижается эффективность химиотерапии, лучевой терапии, гормональной терапии.

Из-за этого опухоли с Her2neu позитивным статусом отличаются агрессивным течением.

Существует две методики определения наличия у опухоли гена Her2neu:

Результаты иммуногистохимического исследования выражаются в баллах:

0-1 означает, что опухоль без гиперэкспрессии Her2neu.
3 означает, что опухоль с гиперэкспрессией Her2neu.

Метод FISH (Флуоресцентная гибридизация in situ).

В отличие от иммуногистохимического исследования, при котором определяются белки, при методе FISH определяется наличие генов, кодирующих протеины Her2neu. В зависимости от их наличия, определяется гиперэкспрессия Her2neu.

В современной онкологии гиперэкспрессию Her2neu определяют, чтобы понять, необходимо ли добавление к лечению ингибиторов Her2neu.

Для лечения опухолей с гиперэкспрессией рецептора Her2Neu активно и успешно используются таргетные препараты Трастузумаб (Герцептин), Пертузумаб (Перьета), Трастузумаб-эмтанзин (Кадсила), Бейодайм (Трастузумаб+Пертузумаб). Эти препараты прицельно блокируют рецепторы Her2neu, тем самым останавливая активный рост опухолевых клеток и повышая их чувствительность к химиопрепаратам. Добавление таргетной терапии к стандартной химиотерапии при лечении Her2neu позитивных опухолей, серьезно увеличивает общую выживаемость и результат противоопухолевого лечения.

Ki-67 — это маркер пролиферативной активности опухолевой клетки. Данный параметр оценивается в процентах и показывает, сколько процентов опухолевых клеток активно делятся.

Если Ki-67 меньше 15%, опухоль считается слабоагрессивной, при показателе Ki-67 от 30 до 50% опухоль считается агрессивной, а при показателе Ki-67 выше 50% опухоль является высокоагрессивной.

Также Ki-67 является фактором прогноза течения опухолевого заболевания и ответа опухоли на химиотерапевтическое лечение.

Определяется это простым способом: чем ниже показатель Ki-67, тем хуже опухоль реагирует на химиотерапевтическое лечение. И наоборот — чем выше показатель Ki-67, тем лучше опухоль будет отвечать на химиотерапию.

Белок p53 — это транскрипционный фактор, регулирующий клеточный цикл. В быстро делящихся клетках обнаружено увеличение концентрации белка р53 по сравнению с клетками, делящимися медленно, что обусловлено высоким риском их онкогенности.

Белок p53 предотвращает образование злокачественных опухолей в нашем организме. В норме, антионкоген р53 находится в неактивном состоянии, а при появлении повреждений ДНК в здоровой клетке — активируется.

Функция белка р53 состоит в удалении тех клеток, которые являются потенциально онкогенными.

Это называется — индуцированный апоптоз, уничтожение потенциально опасной клетки.

При иммуногистохимическом исследовании, повышенное содержание белка p53 обнаруживается в 50% злокачественных клеток, что позволяет им беспрепятственно делиться и избегать апоптоза (уничтожения).

Количество белка p53, определяют в дополнение к показателю Кi67, для того, чтобы понять насколько агрессивна опухоль и определить дальнейшее течение болезни. Если уровень белка p53 высокий, значит опухоль не агрессивная и не склонна к метастазированию и быстрому росту.

Если же, показатель белка p53 низкий, то значит опухоль агрессивна и склонна к быстрому росту в окружающие ткани и метастазированию.

VEGF – это сигнальный белок, вырабатываемый клетками для активного роста новых сосудов в уже существующей сосудистой системе.

Есть несколько видов белка VEGF, и каждый воздействует на определенный рецептор VEGFR (Vascular endothelial growth factor receptor). Для того чтобы активно делиться, опухоли нужно питание, а для этого нужны сосуды, по которым это питание будет поступать.

Именно по этой причине в опухолевых клетках содержится повышенное содержание белка VEGF — для того, чтобы в короткие сроки строить сосудистые сети.

Наличие белка VEGF в опухоли говорит о возможности применения таргетной терапиитакими препаратами, как Бевацизумаб (Авастин), Рамуцирумаб (Цирамза), Афлиберцепт (Залтрап). Они перестраивают сосудистую сеть опухоли, тем самым лишая её питания.

Иммунотерапия в онкологии появилась сравнительно недавно, но уже успела показать удивительные результаты в лечении опухолей. Механизм иммунотерапии рака заключается в том, что препарат позволяет иммунитету увидеть опухоль и уничтожить её. Ответственные за «видимость» опухоли белки PD-1, PDL-1 и PDL-2 в достаточном количестве присутствуют не во всех опухолях. Именно поэтому одним пациентам иммунотерапия помогает, а другим нет.

Чаще всего определение гиперэкспрессии белка PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2 необходимо при меланоме, немелкоклеточном раке легкого, раке желудка и раке почки.

Для того чтобы отобрать пациентов, которым показана иммунотерапия, проводится определение наличия экспрессии PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2, при помощи флюоресцентной гибридизации in situ (FISH). При наличии экспрессии PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2, показано применение иммунотерапии препаратами Пембролизумаб (Кейтруда), Ниволумаб (Опдиво), Атезолизумаб (Тецентрик).

В современной онкологии иммуногистохимическое исследование играет очень важную роль, так как при помощи этого исследования онкологи определяют наличие тех или иных факторов в опухоли, которые позволяют грамотно и адекватно составить дальнейшее лечение пациента и говорить о прогнозах заболевания.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы (ИГХ) – лабораторный способ изучения тканей, полученных с помощью биопсии. Методика иммуногистохимии применяется чтобы:

определить характер и тип патологии;
выявить чувствительность, а также устойчивость клеток опухоли к тем или иным вариантам химиотерапии или радиотерапии;
обнаружить источник рака, если имеются метастазы неясного генеза;
установить степень распространения ракового процесса;
узнать гистогенетическое происхождение заболевания;
оценить успешность проведённого лечения;
диагностировать пролиферацию новообразования;
определить нозологический вариант раковой опухоли.

Противопоказаний процедура ИГХ практически не имеет. Проблемы с проведением анализа возникают лишь при невозможности забора образцов повреждённых клеток по причине труднодоступной локализации онкообразования.

Для проведения иммуногистохимического исследования нужна поражённая опухолью ткань. Обычно ее получают при выполнении биопсии или после проведения операции.

Взятый образец помещают в формалин и отправляют в лабораторию. Там его обезжиривают, заливают специальным парафином. Потом выполняют микротомирование – делают тонкие срезы до 1 мкм с парафиновых блоков.

Их раскладывают на специальных стёклах. Лишь потом начинают процедуру.

Выполняется окрашивание исследуемого материала определёнными реактивами в необходимой концентрации. Для анализа может применяться малая панель – с набором из 5 разновидностей антител или большая панель – насчитывающая от 6 типов маркеров.

От количества HER2 рецепторов зависит цветовая комбинация реактивов с опухолевыми клетками. Чем их больше имеется в исследуемом образце, тем интенсивнее окраска. Результаты анализа ИГХ обычно готовы в течение 1-2 недель. Точность иммуногистохимии зависит от субъективного восприятия результатов гистологом.

Иммуногистохимия отображает концентрацию HER2-белка (рецептора человеческого эпидермального фактора роста) в патологическом образце. Благодаря ему в здоровом организме контролируется нормальный процесс деления и самовосстановления клеток.

Почти у 25 % женщин с карциномой молочной железы рецептор человеческого эпидермального фактора роста производит чрезмерное количество HER2. Потом клетки начинают неконтролируемо расти и делиться. Итоги иммуногистохимического исследования HER2 статуса при карциноме грудной клетки интерпретируют в зависимости от интенсивности окраски по специальной шкале:

0-1+ обозначает, что HER2-белок обнаружен в нормальном количестве и раковая опухоль негативная (75% ситуаций). Необходимости на этом этапе заболевания в медикаментозных препаратах нет;
2+ подтверждает среднюю концентрацию HER2-белка в исследуемом материале и наличие отрицательной карциномы груди;
3+ сигнализирует, что фиксируется превышение выработки HER2-белка, а онкологическое образование положительное (25%).

HER2 позитивный рак груди характеризуется агрессивным вариантом течения. Опухоль увеличивается намного быстрее, чем при HER2 негативной карциноме. В 30% случаев HER2-положительный вариант с течением времени преобразовывается в HER2 — отрицательный.

Если после исследования подтверждается положительный HER2, то доктор может назначить лечение препаратами Лапатаниб и Герцептин. Эти медикаменты используются лишь при позитивной форме HER2. Они прикрепляются к белку HER2, не позволяют ему достичь злокачественных клеток и стимулировать их рост. Не рекомендуется применение Лапатаниба и Герцептина для лечения негативной карциномы груди.

Если опухоль оценена на 2+, то желательно провести ещё один анализ. Полученный результат не всегда правдиво обозначает превышение показателей HER2-белка.

Для уточнения информации дополнительно выполняют тест FISH. Он показывает уровень HER2-белка в каждой клетке и отвечает за его перепроизводство.

FISH-тест бывает либо положительный (нормальное количество HER2) либо отрицательный (амплификация генов).

При выполнении ИГХ учитывается также процентное соотношение Ki-67, характеризующее злокачественность ракового процесса. Если при диагностированной карциноме груди Ki-67 – 15%, то прогноз, скорее всего, будет благоприятным. Если Ki-67 достигает 30% и более, то опухоль считается высокоагрессивной.

Только специалист должен ставить точный диагноз на основании результатов расшифровки иммуногистохимии и при необходимости, итогов других анализов.

Иммуногистохимическое исследование – эффективная, высокоинформативная и достаточно новая методика дифференциального диагностирования онкологических опухолей, которая помогает определить её гистогенез на клеточном уровне.

источник